技术摘要：
本发明公开一种多羟基异黄酮的合成方法，该方法包括以下步骤：(1)将4′，7‑二甲氧基异黄酮与N‑溴代丁二酰亚胺反应，控制4′，7‑二甲氧基异黄酮与N‑溴代丁二酰亚胺的摩尔比及反应温度，使4′，7‑二甲氧基异黄酮碳环上的1个或者2个氢原子被溴原子取代，生成相应的溴 全部
背景技术：
异黄酮类化合物是植物的次生代谢产物，具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤、抗糖尿病、抗 辐射、抗缺血再灌注损伤以及神经保护等广泛的生理活性，而这些有益的药理作用大多归 因于其优异抗氧化活性，其能够通过抑制和清除自由基和活性氧来避免氧化损伤 (Nat.Prod.Rep，2019，36(8)：1156-1195)。研究指出：异黄酮结构中羟基取代基是清除自由 基的活性基团，羟基的数量、取代位置和取代形式对活性具有重要影响(Int J Mol Sci， 2015，16(6)：12891-12906)。 4′，7，8-三羟基异黄酮和3′，4′，7，8-四羟基异黄酮，结构式如下： 这两个异黄酮具有优异的抗氧化活性，但是其在天然产物中分布较少，而且含量 很低，无法从天然产物中大量获得这些化合物。 4′，7，8-三羟基异黄酮是大豆苷元在体内的主要代谢产物之一(Clin Chim Acta， 2003，334(1-2)：77-85)，可以从韩国发酵大豆中分离获得(J Soc .Cosmet .Sci .Korea， 2010，36(3)：221-226)，具有显著的自由基清除(Xenobiotica，2013，33(9)：913-925， Biosci Biotechnol Biochem，2004，68(6)：1372-1374)和抗炎活性(Plos one.2014，9(8)： e104938)，还是一种有效的蘑菇酪氨酸酶自杀底物(J .Agric .Food Chem，2007，55(5)： 2010-2015)。最新研究表明其还具有抗动脉粥样硬化(Food Chem，2018，240：607-614)和增 强记忆的作用(Brain Res.Bull，2018，142，197-206)。目前，4′，7，8-三羟基异黄酮的可以 通过生物转化法和化学合成法获得。Pandey(Enzyme.Microbial.Technol.，48，386-392.) 等利用细胞色素P450s酶催化大豆甘元，能够以36.3％的最高转化率得到7，8，4′-三羟基异 黄酮。Seo(Biosci .Biotechnol .Biochem，2013，77(6)：1245-1250)等则通过米曲霉 KACC40247催化大豆苷元产生4′，7，8--三羟基异黄酮，并将最高转化率提高到58％。Wu (Food Sci.Technol.Res，2015，21(4)：557-62)利用米曲霉BCRC 32288进一步将大豆苷元 催化生成4′，7，8-三羟基异黄酮转化率提高到77.8％。但该类方法反应过程复杂、不良反应 多、副产物毒性较大、后处理较为繁琐、分离纯化困难，往往需要通过HPLC才能得到纯度较 高的产物。Goto(Chem.Pharm.Bull，2009，57(4)：346-360)和王星(有机化学，2011，31(8)： 1245-1251)等以邻苯三酚和对羟基苯乙酸为原料，在BF3·Et2O催化下，发生脱水反应，生成 2-(4-羟基苯基)-1-(2，3，4-三羟基苯基)乙酮化合物，然后在MeSO2Cl-DMF体系中，发生脱 氧安息香反应，生成4′，7，8-三羟基异黄酮，但是反应中不但需要使用易燃，有毒，具有强烈 4 CN 111574490 A 说 明 书 2/7 页 的刺激性和强烈腐蚀性的三氟化硼乙醚，而且其总产率仅为30％。 3′，4′，7，8-四羟基异黄酮也是大豆苷元次级代谢产物之一(Arch Microbiol， 1995，164(6)：428-34；J.Agric.Food Chem，2001，49：3024-3033)，但是有关其生物活性的 研究鲜有报道。Goto(Chem Pharm Bull(Tokyo) .2009，57(4)：346-360)等以邻苯三酚和3， 4-二羟基苯乙酸为原料，在BF3·Et2O催化下，发生脱水反应，然后在MeSO2Cl-DMF体系中，发 生脱氧安息香反应，生成3′，4′，7，8-四羟基异黄酮，但是总产率仅为15％。
技术实现要素：
基于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种适于工业生产的多羟基异 黄酮的合成方法。 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 一种多羟基异黄酮的合成方法，包括以下步骤： (1)将4′，7-二甲氧基异黄酮与N-溴代丁二酰亚胺(NBS)反应，控制4′，7-二甲氧基 异黄酮与N-溴代丁二酰亚胺的摩尔比及反应温度，使4′，7-二甲氧基异黄酮碳环上的1个或 者2个氢原子被溴原子取代，生成相应的溴化物； (2)步骤(2)的溴化物在亚铜盐作用下与甲醇钠反应，使溴化物碳环上的溴原子被 甲氧基取代，得到甲氧基化产物； (3)步骤(3)的甲氧基化产物在氯化铝和二甲基硫醚的作用下发生脱甲基反应，得 到多羟基异黄酮。 优选地，所述亚铜盐为溴化亚铜、碘化亚铜和/或氯化亚铜。 优选地，当所述多羟基异黄酮为4′，7，8-三羟基异黄酮时，步骤(1)中所述4′，7-二 甲氧基异黄酮与N-溴代丁二酰亚胺的摩尔比为1∶1.1～1.3，反应温度为0～4℃，相应的溴 化物为8-溴-4′，7-二甲氧基异黄酮； 当所述多羟基异黄酮为4′，6，7，8-四羟基异黄酮时，步骤(1)中所述4′，7-二甲氧 基异黄酮与N-溴代丁二酰亚胺的摩尔比为1∶2.5～3.5，反应温度为75～85℃，相应的溴化 物为3′，8-二溴-4′，7-二甲氧基异黄酮； 优选地，所述多羟基异黄酮为4′，7，8-三羟基异黄酮时，具体合成过程包括： (1)将4′，7-二甲氧基异黄酮溶解于有机溶剂中，在0～4℃下，按4′，7-二甲氧基异 黄酮与N-溴代丁二酰亚胺的摩尔比为1∶1.1～1.3加入N-溴代丁二酰亚胺，反应得到8′-溴- 4′，7-二甲氧基异黄酮，所述8′-溴-4′，7-二甲氧基异黄酮与亚铜盐的摩尔比为1∶1～1.5； (2)将8-溴-4′，7-二甲氧基异黄酮与有机溶剂混合，加热到110～130℃，然后加入 亚铜盐和过量的甲醇钠，反应得到4′，7，8-三甲氧基异黄酮； (3)将氯化铝悬浮于有机溶剂中，冷却至0～8℃，缓慢滴加二甲基硫醚，混匀，加入 4′，7，8-三甲氧基异黄酮，升温，于20～30℃反应得到4′，7，8-三羟基异黄酮，其中，氯化铝、 二甲基硫醚和4′，7，8-三甲氧基异黄酮的摩尔比为8～10：8～10：1。 更具体地，4′，7，8-三羟基异黄酮的合成方法包括如下步骤， (1)将10mmol 4′，7-二甲氧基异黄酮溶于80～100mL DMF，冷却到0～4℃，搅拌下 加入11～13mmol NBS，继续反应2～3h，加入20～40mL的2M盐酸淬灭反应，加水250～300mL， 静置冰箱过夜，过滤，滤饼干燥得8-溴-4′，7-二甲氧基异黄酮； 5 CN 111574490 A 说 明 书 3/7 页 (2)将4～6mmol亚铜盐悬浮于1～3mL DMF中，20～30℃避光搅拌25～35min，加入 40～60mL 25％的甲醇钠/甲醇溶液，继续避光搅拌0.8～1.2h，备用；将5mmol 8-溴-4′，7- 二甲氧基异黄酮和4～6mL DMF加热到110～130℃，搅拌加入上述备用液，继续反应2～5h， 冷却至室温后，将反应液倒入到40～60mL的2M盐酸溶液中，减压除去溶剂，水相用乙酸乙酯 萃取，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤一次，无水硫酸钠干燥过夜，过滤，减压除去乙酸乙酯 后通过硅胶柱层析分离纯化得4′，7，8-三甲氧基异黄酮； (3)将2.4～3mmol氯化铝悬浮于8～12mL无水二氯甲烷中，冷却至0～8℃，缓慢滴 加2.4～3mmol二甲基硫醚，搅拌20～30min，加入0.3mmol 4′，7，8-三甲氧基异黄酮，升温至 20～30℃继续反应5～8h，停止反应，冷却到0～4℃，加入10％(w/w)盐酸溶液搅拌2h，减压 除去二氯甲烷，过滤，滤饼用甲醇/水体系重结晶得4′，7，8-三羟基异黄酮。 优选地，所述多羟基异黄酮为3′，4′，7，8-四羟基异黄酮时，具体合成过程包括： (1)将4′，7-二甲氧基异黄酮溶解于有机溶剂中，在75～85℃下，按4′，7-二甲氧基 异黄酮与N-溴代丁二酰亚胺的摩尔比为1∶2.5～3.5加入N-溴代丁二酰亚胺，反应得到3′， 8-二溴-4′，7-二甲氧基异黄酮； (2)将3′，8-二溴-4′，7-二甲氧基异黄酮与有机溶剂混合，加热到110～130℃，然 后加入亚铜盐和过量的甲醇钠，反应得到3′，4′，7，8-四甲氧基异黄酮，所述3′，8-二溴-4′， 7-二甲氧基异黄酮与亚铜盐的摩尔比为1∶2～3； (3)将氯化铝悬浮于有机溶剂中，冷却至0～8℃，缓慢滴加二甲基硫醚，混匀，加入 3′，4′，7，8-四甲氧基异黄酮，升温，于20～30℃反应得到3′，4′，7，8-四羟基异黄酮，其中， 氯化铝、二甲基硫醚和3′，4′，7，8-四甲氧基异黄酮的摩尔比为10～12∶10～12∶1。 更具体地，3′，4′，7，8-四羟基异黄酮的合成方法包括如下步骤， (1)将3mmol 4′，7-二甲氧基异黄酮溶于25～35mL DMF，搅拌下加入8～10mmol NBS，升温至80℃继续反应2.5～3.5h。加入20～40mL的2M盐酸淬灭反应，加水130～170mL， 静置冰箱过夜，过滤，滤饼干燥得3′，8-二溴-4′，7-二甲氧基异黄酮； (2)将4～6mmol亚铜盐悬浮于2～3mL DMF中，20～30℃避光搅拌25～35min，加入 40～60mL 25％(w/v)的甲醇钠/甲醇溶液，继续避光搅拌0.8～1.2h，备用；将2mmol 3′，8- 二溴-4′，7-二甲氧基异黄酮和4～6mL DMF加热到110～130℃，搅拌下加入上述备用液，继 续反应2～5h，冷却至室温后，将反应液倒入到40～60mL的2M盐酸溶液中，减压除去溶剂，水 相用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤一次，无水硫酸钠干燥过夜，过滤，减压 除去乙酸乙酯后通过硅胶柱层析分离纯化得3′，4′，7，8-四甲氧基异黄酮； (3)将4.0～4.8mmol氯化铝悬浮于10～15mL无水二氯甲烷中，冷却至0～8℃，缓慢 滴加4.0～4.8mmol二甲基硫醚，搅拌20～30min，加入0.4mmol3′，4′，7，8-四甲氧基异黄酮， 升温至20～30℃继续反应8～10h。停止反应，冷却到0～4℃，加入10％(w/w)盐酸溶液搅拌 2h，减压除去二氯甲烷，过滤，滤饼用甲醇/水体系重结晶得3′，4′，7，8-四羟基异黄酮。 优选地，4′，7-二甲氧基异黄酮通过以方法得到：将大豆苷元或者刺芒柄花素、碳 酸钾和甲基化试剂在有机溶剂中混合反应，得到所述的4′，7-二甲氧基异黄酮，其中，反应 温度为60～70℃，大豆苷元∶碳酸钾∶甲基化试剂的摩尔比为1∶2～3∶2～3，或者，刺芒柄花 素∶碳酸钾∶甲基化试剂的摩尔比为1∶1～2∶1～2。 优选地，所述甲基化试剂为硫酸二甲酯或碳酸二甲酯。 6 CN 111574490 A 说 明 书 4/7 页 优选地，所述有机溶剂为丙酮、乙腈、二氯甲烷或N，N-二甲基甲酰胺(DMF)。 本发明所述的多羟基是指三个或三个以上的羟基。 本发明以来源丰富的大豆苷元或刺芒柄花素为起始原料，经过甲基化、溴代、甲氧 基化和去甲基化四步反应得到多羟基异黄酮4′，7，8-三羟基异黄酮和3′，4′，7，8-四羟基异 黄酮，总产率达到60％以上(以大豆苷元或者刺芒柄花素计)。4′，7-二甲氧基异黄酮与NBS 在不同反应条件下分别生成8-溴-4′，7-二甲氧基异黄酮和3′，8-二溴-4′，7-二甲氧基异黄 酮，选择性好，产率高。本发明合成方法具有反应条件温和，产率高，易于工业化生产的优 势。产物纯度经UPLC监测大于99.0％，可用于药理活性研究。 附图说明： 图1是4′，7，8-三羟基异黄酮的UPLC色谱图。 图2是3′，4′，7，8-四羟基异黄酮的UPLC色谱图。
本发明公开一种多羟基异黄酮的合成方法，该方法包括以下步骤：(1)将4′，7‑二甲氧基异黄酮与N‑溴代丁二酰亚胺反应，控制4′，7‑二甲氧基异黄酮与N‑溴代丁二酰亚胺的摩尔比及反应温度，使4′，7‑二甲氧基异黄酮碳环上的1个或者2个氢原子被溴原子取代，生成相应的溴 全部
背景技术：
异黄酮类化合物是植物的次生代谢产物，具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤、抗糖尿病、抗 辐射、抗缺血再灌注损伤以及神经保护等广泛的生理活性，而这些有益的药理作用大多归 因于其优异抗氧化活性，其能够通过抑制和清除自由基和活性氧来避免氧化损伤 (Nat.Prod.Rep，2019，36(8)：1156-1195)。研究指出：异黄酮结构中羟基取代基是清除自由 基的活性基团，羟基的数量、取代位置和取代形式对活性具有重要影响(Int J Mol Sci， 2015，16(6)：12891-12906)。 4′，7，8-三羟基异黄酮和3′，4′，7，8-四羟基异黄酮，结构式如下： 这两个异黄酮具有优异的抗氧化活性，但是其在天然产物中分布较少，而且含量 很低，无法从天然产物中大量获得这些化合物。 4′，7，8-三羟基异黄酮是大豆苷元在体内的主要代谢产物之一(Clin Chim Acta， 2003，334(1-2)：77-85)，可以从韩国发酵大豆中分离获得(J Soc .Cosmet .Sci .Korea， 2010，36(3)：221-226)，具有显著的自由基清除(Xenobiotica，2013，33(9)：913-925， Biosci Biotechnol Biochem，2004，68(6)：1372-1374)和抗炎活性(Plos one.2014，9(8)： e104938)，还是一种有效的蘑菇酪氨酸酶自杀底物(J .Agric .Food Chem，2007，55(5)： 2010-2015)。最新研究表明其还具有抗动脉粥样硬化(Food Chem，2018，240：607-614)和增 强记忆的作用(Brain Res.Bull，2018，142，197-206)。目前，4′，7，8-三羟基异黄酮的可以 通过生物转化法和化学合成法获得。Pandey(Enzyme.Microbial.Technol.，48，386-392.) 等利用细胞色素P450s酶催化大豆甘元，能够以36.3％的最高转化率得到7，8，4′-三羟基异 黄酮。Seo(Biosci .Biotechnol .Biochem，2013，77(6)：1245-1250)等则通过米曲霉 KACC40247催化大豆苷元产生4′，7，8--三羟基异黄酮，并将最高转化率提高到58％。Wu (Food Sci.Technol.Res，2015，21(4)：557-62)利用米曲霉BCRC 32288进一步将大豆苷元 催化生成4′，7，8-三羟基异黄酮转化率提高到77.8％。但该类方法反应过程复杂、不良反应 多、副产物毒性较大、后处理较为繁琐、分离纯化困难，往往需要通过HPLC才能得到纯度较 高的产物。Goto(Chem.Pharm.Bull，2009，57(4)：346-360)和王星(有机化学，2011，31(8)： 1245-1251)等以邻苯三酚和对羟基苯乙酸为原料，在BF3·Et2O催化下，发生脱水反应，生成 2-(4-羟基苯基)-1-(2，3，4-三羟基苯基)乙酮化合物，然后在MeSO2Cl-DMF体系中，发生脱 氧安息香反应，生成4′，7，8-三羟基异黄酮，但是反应中不但需要使用易燃，有毒，具有强烈 4 CN 111574490 A 说 明 书 2/7 页 的刺激性和强烈腐蚀性的三氟化硼乙醚，而且其总产率仅为30％。 3′，4′，7，8-四羟基异黄酮也是大豆苷元次级代谢产物之一(Arch Microbiol， 1995，164(6)：428-34；J.Agric.Food Chem，2001，49：3024-3033)，但是有关其生物活性的 研究鲜有报道。Goto(Chem Pharm Bull(Tokyo) .2009，57(4)：346-360)等以邻苯三酚和3， 4-二羟基苯乙酸为原料，在BF3·Et2O催化下，发生脱水反应，然后在MeSO2Cl-DMF体系中，发 生脱氧安息香反应，生成3′，4′，7，8-四羟基异黄酮，但是总产率仅为15％。
技术实现要素：
基于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种适于工业生产的多羟基异 黄酮的合成方法。 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 一种多羟基异黄酮的合成方法，包括以下步骤： (1)将4′，7-二甲氧基异黄酮与N-溴代丁二酰亚胺(NBS)反应，控制4′，7-二甲氧基 异黄酮与N-溴代丁二酰亚胺的摩尔比及反应温度，使4′，7-二甲氧基异黄酮碳环上的1个或 者2个氢原子被溴原子取代，生成相应的溴化物； (2)步骤(2)的溴化物在亚铜盐作用下与甲醇钠反应，使溴化物碳环上的溴原子被 甲氧基取代，得到甲氧基化产物； (3)步骤(3)的甲氧基化产物在氯化铝和二甲基硫醚的作用下发生脱甲基反应，得 到多羟基异黄酮。 优选地，所述亚铜盐为溴化亚铜、碘化亚铜和/或氯化亚铜。 优选地，当所述多羟基异黄酮为4′，7，8-三羟基异黄酮时，步骤(1)中所述4′，7-二 甲氧基异黄酮与N-溴代丁二酰亚胺的摩尔比为1∶1.1～1.3，反应温度为0～4℃，相应的溴 化物为8-溴-4′，7-二甲氧基异黄酮； 当所述多羟基异黄酮为4′，6，7，8-四羟基异黄酮时，步骤(1)中所述4′，7-二甲氧 基异黄酮与N-溴代丁二酰亚胺的摩尔比为1∶2.5～3.5，反应温度为75～85℃，相应的溴化 物为3′，8-二溴-4′，7-二甲氧基异黄酮； 优选地，所述多羟基异黄酮为4′，7，8-三羟基异黄酮时，具体合成过程包括： (1)将4′，7-二甲氧基异黄酮溶解于有机溶剂中，在0～4℃下，按4′，7-二甲氧基异 黄酮与N-溴代丁二酰亚胺的摩尔比为1∶1.1～1.3加入N-溴代丁二酰亚胺，反应得到8′-溴- 4′，7-二甲氧基异黄酮，所述8′-溴-4′，7-二甲氧基异黄酮与亚铜盐的摩尔比为1∶1～1.5； (2)将8-溴-4′，7-二甲氧基异黄酮与有机溶剂混合，加热到110～130℃，然后加入 亚铜盐和过量的甲醇钠，反应得到4′，7，8-三甲氧基异黄酮； (3)将氯化铝悬浮于有机溶剂中，冷却至0～8℃，缓慢滴加二甲基硫醚，混匀，加入 4′，7，8-三甲氧基异黄酮，升温，于20～30℃反应得到4′，7，8-三羟基异黄酮，其中，氯化铝、 二甲基硫醚和4′，7，8-三甲氧基异黄酮的摩尔比为8～10：8～10：1。 更具体地，4′，7，8-三羟基异黄酮的合成方法包括如下步骤， (1)将10mmol 4′，7-二甲氧基异黄酮溶于80～100mL DMF，冷却到0～4℃，搅拌下 加入11～13mmol NBS，继续反应2～3h，加入20～40mL的2M盐酸淬灭反应，加水250～300mL， 静置冰箱过夜，过滤，滤饼干燥得8-溴-4′，7-二甲氧基异黄酮； 5 CN 111574490 A 说 明 书 3/7 页 (2)将4～6mmol亚铜盐悬浮于1～3mL DMF中，20～30℃避光搅拌25～35min，加入 40～60mL 25％的甲醇钠/甲醇溶液，继续避光搅拌0.8～1.2h，备用；将5mmol 8-溴-4′，7- 二甲氧基异黄酮和4～6mL DMF加热到110～130℃，搅拌加入上述备用液，继续反应2～5h， 冷却至室温后，将反应液倒入到40～60mL的2M盐酸溶液中，减压除去溶剂，水相用乙酸乙酯 萃取，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤一次，无水硫酸钠干燥过夜，过滤，减压除去乙酸乙酯 后通过硅胶柱层析分离纯化得4′，7，8-三甲氧基异黄酮； (3)将2.4～3mmol氯化铝悬浮于8～12mL无水二氯甲烷中，冷却至0～8℃，缓慢滴 加2.4～3mmol二甲基硫醚，搅拌20～30min，加入0.3mmol 4′，7，8-三甲氧基异黄酮，升温至 20～30℃继续反应5～8h，停止反应，冷却到0～4℃，加入10％(w/w)盐酸溶液搅拌2h，减压 除去二氯甲烷，过滤，滤饼用甲醇/水体系重结晶得4′，7，8-三羟基异黄酮。 优选地，所述多羟基异黄酮为3′，4′，7，8-四羟基异黄酮时，具体合成过程包括： (1)将4′，7-二甲氧基异黄酮溶解于有机溶剂中，在75～85℃下，按4′，7-二甲氧基 异黄酮与N-溴代丁二酰亚胺的摩尔比为1∶2.5～3.5加入N-溴代丁二酰亚胺，反应得到3′， 8-二溴-4′，7-二甲氧基异黄酮； (2)将3′，8-二溴-4′，7-二甲氧基异黄酮与有机溶剂混合，加热到110～130℃，然 后加入亚铜盐和过量的甲醇钠，反应得到3′，4′，7，8-四甲氧基异黄酮，所述3′，8-二溴-4′， 7-二甲氧基异黄酮与亚铜盐的摩尔比为1∶2～3； (3)将氯化铝悬浮于有机溶剂中，冷却至0～8℃，缓慢滴加二甲基硫醚，混匀，加入 3′，4′，7，8-四甲氧基异黄酮，升温，于20～30℃反应得到3′，4′，7，8-四羟基异黄酮，其中， 氯化铝、二甲基硫醚和3′，4′，7，8-四甲氧基异黄酮的摩尔比为10～12∶10～12∶1。 更具体地，3′，4′，7，8-四羟基异黄酮的合成方法包括如下步骤， (1)将3mmol 4′，7-二甲氧基异黄酮溶于25～35mL DMF，搅拌下加入8～10mmol NBS，升温至80℃继续反应2.5～3.5h。加入20～40mL的2M盐酸淬灭反应，加水130～170mL， 静置冰箱过夜，过滤，滤饼干燥得3′，8-二溴-4′，7-二甲氧基异黄酮； (2)将4～6mmol亚铜盐悬浮于2～3mL DMF中，20～30℃避光搅拌25～35min，加入 40～60mL 25％(w/v)的甲醇钠/甲醇溶液，继续避光搅拌0.8～1.2h，备用；将2mmol 3′，8- 二溴-4′，7-二甲氧基异黄酮和4～6mL DMF加热到110～130℃，搅拌下加入上述备用液，继 续反应2～5h，冷却至室温后，将反应液倒入到40～60mL的2M盐酸溶液中，减压除去溶剂，水 相用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤一次，无水硫酸钠干燥过夜，过滤，减压 除去乙酸乙酯后通过硅胶柱层析分离纯化得3′，4′，7，8-四甲氧基异黄酮； (3)将4.0～4.8mmol氯化铝悬浮于10～15mL无水二氯甲烷中，冷却至0～8℃，缓慢 滴加4.0～4.8mmol二甲基硫醚，搅拌20～30min，加入0.4mmol3′，4′，7，8-四甲氧基异黄酮， 升温至20～30℃继续反应8～10h。停止反应，冷却到0～4℃，加入10％(w/w)盐酸溶液搅拌 2h，减压除去二氯甲烷，过滤，滤饼用甲醇/水体系重结晶得3′，4′，7，8-四羟基异黄酮。 优选地，4′，7-二甲氧基异黄酮通过以方法得到：将大豆苷元或者刺芒柄花素、碳 酸钾和甲基化试剂在有机溶剂中混合反应，得到所述的4′，7-二甲氧基异黄酮，其中，反应 温度为60～70℃，大豆苷元∶碳酸钾∶甲基化试剂的摩尔比为1∶2～3∶2～3，或者，刺芒柄花 素∶碳酸钾∶甲基化试剂的摩尔比为1∶1～2∶1～2。 优选地，所述甲基化试剂为硫酸二甲酯或碳酸二甲酯。 6 CN 111574490 A 说 明 书 4/7 页 优选地，所述有机溶剂为丙酮、乙腈、二氯甲烷或N，N-二甲基甲酰胺(DMF)。 本发明所述的多羟基是指三个或三个以上的羟基。 本发明以来源丰富的大豆苷元或刺芒柄花素为起始原料，经过甲基化、溴代、甲氧 基化和去甲基化四步反应得到多羟基异黄酮4′，7，8-三羟基异黄酮和3′，4′，7，8-四羟基异 黄酮，总产率达到60％以上(以大豆苷元或者刺芒柄花素计)。4′，7-二甲氧基异黄酮与NBS 在不同反应条件下分别生成8-溴-4′，7-二甲氧基异黄酮和3′，8-二溴-4′，7-二甲氧基异黄 酮，选择性好，产率高。本发明合成方法具有反应条件温和，产率高，易于工业化生产的优 势。产物纯度经UPLC监测大于99.0％，可用于药理活性研究。 附图说明： 图1是4′，7，8-三羟基异黄酮的UPLC色谱图。 图2是3′，4′，7，8-四羟基异黄酮的UPLC色谱图。
