技术摘要：
本发明提供一种干细胞冻存保护剂，以干细胞冻存保护剂总量为基准计，所述干细胞冻存保护剂包含：甘油体积分数为10％‑30％；海藻糖0.25mol/L‑1.5mol/L；溶剂为生理盐水或磷酸盐缓冲液。本发明的干细胞冻存保护剂，是一种具有有效低温保存干细胞活性和功能的冷冻保护剂 全部
背景技术：
干细胞具有分化为成脂、成骨以及成软骨等中胚层来源细胞的潜能，同时还能通 过旁分泌信号传导机制分泌刺激组织再生的生长因子和细胞因子等生物活性分子，为软组 织填充、糖尿病、肝损伤、难愈性创面及自身免疫性疾病提供替代治疗，甚至可以进行同种 异体移植治疗，已成为医学界最前沿、最热门的研究领域之一。如能长期保存干细胞，即可 很好的解决手术时机的限制并可为以后的临床应用提供具有稳定遗传特性且充足数量的 细胞。冷冻保存是长期保存的主要形式，然而冷冻保存的过程中，细胞内冰晶形成等过程会 对细胞形成冷冻损伤，对干细胞活性和功能有明显影响。冷冻保护剂的加入可保护细胞免 受低温冻存中的冷冻损伤，能更好的保存细胞的生物性能。 目前针对干细胞冻存经典保护剂为10％二甲基亚砜(DMSO) 90％胎牛血清(FBS)， 其中二甲基亚砜在常温下为细胞毒性物质，在临床使用时难以保证其冻存后能够被洗脱到 无存留，而胎牛血清含异种抗原，有造成人畜共患病及导致免疫反应等风险，因此两者均可 能对患者造成不良影响。其他一些保护剂使用方法复杂或成本高昂，不适于推广和应用。
技术实现要素：
鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种干细胞冻存保护剂、 制备方法及应用，用于解决现有技术中冻存保护剂毒性高、冻存效果差的问题。 为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种干细胞冻存保护剂， 以干细胞冻存保护剂总量为基准计，所述干细胞冻存保护剂包含： 甘油 体积分数为10％-30％； 海藻糖 0.25mol/L-1.5mol/L； 溶剂为生理盐水或磷酸盐缓冲液。 本发明第二方面提供前述干细胞冻存保护剂用于干细胞冻存的用途。 本发明第三方面提供一种干细胞冻存保护剂的制备方法，包括如下步骤： 1)将海藻糖加入到生理盐水或磷酸盐缓冲液中，配制海藻糖溶液； 2)以甘油为溶质，海藻糖溶液为溶剂配成干细胞冻存保护剂。 本发明第四方面提供一种干细胞冻存的方法，包括如下步骤： 1)将前述的干细胞冻存保护剂与干细胞以体积比1:1混合，得到混合物1； 2)将混合物1置于程序降温盒中，于-80摄氏度下程序降温； 3)将步骤2)得到的混合物1置于液氮中冻存，得到冻存的干细胞。 如上所述，本发明的干细胞冻存保护剂、制备方法及应用，具有以下有益效果： 本发明的干细胞冻存保护剂，具有有效低温保存干细胞活性和功能的冷冻保护 剂，高效且无毒无异种抗原，具有更高的生物安全性和临床应用可能性；不使用任何高分子 3 CN 111587877 A 说 明 书 2/6 页 聚合物及生物毒性物质，使用试剂均无细胞毒性，并且易洗脱；本发明无任何异种来源的血 制品，无异种抗原，发生超敏反应的可能性较低；发明较现有的细胞冻存保护剂成本较低， 大剂量应用的可能性大；操作方便，易于推广。 附图说明 图1：脂肪干细胞在不同冷冻保护剂保护下-196冻存180天后，复苏，通过台盼蓝检 测细胞活性。 图2：脂肪干细胞在不同冷冻保护剂保护下-196冻存180天后，复苏，通过CCK8检测 细胞的增值能力。 图3：脂肪干细胞在不同冷冻保护剂保护下-196冻存180天后，复苏，通过划痕实验 检测细胞迁移能力。 图4：脂肪干细胞在不同冷冻保护剂保护下-196冻存180天后，复苏，检测细胞的三 向分化能力。
本发明提供一种干细胞冻存保护剂，以干细胞冻存保护剂总量为基准计，所述干细胞冻存保护剂包含：甘油体积分数为10％‑30％；海藻糖0.25mol/L‑1.5mol/L；溶剂为生理盐水或磷酸盐缓冲液。本发明的干细胞冻存保护剂，是一种具有有效低温保存干细胞活性和功能的冷冻保护剂 全部
背景技术：
干细胞具有分化为成脂、成骨以及成软骨等中胚层来源细胞的潜能，同时还能通 过旁分泌信号传导机制分泌刺激组织再生的生长因子和细胞因子等生物活性分子，为软组 织填充、糖尿病、肝损伤、难愈性创面及自身免疫性疾病提供替代治疗，甚至可以进行同种 异体移植治疗，已成为医学界最前沿、最热门的研究领域之一。如能长期保存干细胞，即可 很好的解决手术时机的限制并可为以后的临床应用提供具有稳定遗传特性且充足数量的 细胞。冷冻保存是长期保存的主要形式，然而冷冻保存的过程中，细胞内冰晶形成等过程会 对细胞形成冷冻损伤，对干细胞活性和功能有明显影响。冷冻保护剂的加入可保护细胞免 受低温冻存中的冷冻损伤，能更好的保存细胞的生物性能。 目前针对干细胞冻存经典保护剂为10％二甲基亚砜(DMSO) 90％胎牛血清(FBS)， 其中二甲基亚砜在常温下为细胞毒性物质，在临床使用时难以保证其冻存后能够被洗脱到 无存留，而胎牛血清含异种抗原，有造成人畜共患病及导致免疫反应等风险，因此两者均可 能对患者造成不良影响。其他一些保护剂使用方法复杂或成本高昂，不适于推广和应用。
技术实现要素：
鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种干细胞冻存保护剂、 制备方法及应用，用于解决现有技术中冻存保护剂毒性高、冻存效果差的问题。 为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种干细胞冻存保护剂， 以干细胞冻存保护剂总量为基准计，所述干细胞冻存保护剂包含： 甘油 体积分数为10％-30％； 海藻糖 0.25mol/L-1.5mol/L； 溶剂为生理盐水或磷酸盐缓冲液。 本发明第二方面提供前述干细胞冻存保护剂用于干细胞冻存的用途。 本发明第三方面提供一种干细胞冻存保护剂的制备方法，包括如下步骤： 1)将海藻糖加入到生理盐水或磷酸盐缓冲液中，配制海藻糖溶液； 2)以甘油为溶质，海藻糖溶液为溶剂配成干细胞冻存保护剂。 本发明第四方面提供一种干细胞冻存的方法，包括如下步骤： 1)将前述的干细胞冻存保护剂与干细胞以体积比1:1混合，得到混合物1； 2)将混合物1置于程序降温盒中，于-80摄氏度下程序降温； 3)将步骤2)得到的混合物1置于液氮中冻存，得到冻存的干细胞。 如上所述，本发明的干细胞冻存保护剂、制备方法及应用，具有以下有益效果： 本发明的干细胞冻存保护剂，具有有效低温保存干细胞活性和功能的冷冻保护 剂，高效且无毒无异种抗原，具有更高的生物安全性和临床应用可能性；不使用任何高分子 3 CN 111587877 A 说 明 书 2/6 页 聚合物及生物毒性物质，使用试剂均无细胞毒性，并且易洗脱；本发明无任何异种来源的血 制品，无异种抗原，发生超敏反应的可能性较低；发明较现有的细胞冻存保护剂成本较低， 大剂量应用的可能性大；操作方便，易于推广。 附图说明 图1：脂肪干细胞在不同冷冻保护剂保护下-196冻存180天后，复苏，通过台盼蓝检 测细胞活性。 图2：脂肪干细胞在不同冷冻保护剂保护下-196冻存180天后，复苏，通过CCK8检测 细胞的增值能力。 图3：脂肪干细胞在不同冷冻保护剂保护下-196冻存180天后，复苏，通过划痕实验 检测细胞迁移能力。 图4：脂肪干细胞在不同冷冻保护剂保护下-196冻存180天后，复苏，检测细胞的三 向分化能力。
