技术摘要：
本发明首次公开了一种EB病毒的抗体，由轻链和重链组成，所述重链的重链可变区中具有3个互补区CDR1、CDR2和CDR3，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1～3所示，所述轻链的轻链可变区中具有3个互补区CDR1’、CDR2’和CDR3’，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4、GNN、SEQ ID NO.5 全部
背景技术：
EB病毒最早于1964年由Epstein和Barr从Burkitt淋巴瘤细胞中成功培养并建株。 EBV属于γ亚型疱疹病毒，是首个被发现的人类致癌病毒。EBV在人群中的感染非常普遍，据 报道全球约有95％以上的成年人携带有EBV。在儿童和青少年中，EBV感染多造成传染性单 核细胞增多症。EBV的潜伏感染与人类多种淋巴肿瘤和上皮肿瘤发生有关，如霍奇金淋巴 瘤、伯基特淋巴瘤及NK/T细胞淋巴瘤等，上皮肿瘤包括鼻咽癌和大约10％的胃癌等。而对于 器官移植病人以及艾滋病患者等免疫抑制病人来说，罹患EBV相关肿瘤的概率大大增加。据 统计，全球每年新增约200000例EBV相关的肿瘤病例,美国NIH已于2016年正式将EBV列入第 14版致癌物名录。 目前针对EB病毒尚无有效的疫苗，由EBV感染引起的疾病也缺乏特异的治疗手段。 传染性单核细胞增多症的治疗大多应用抗病毒药物如阿昔洛韦等，虽然可一定程度上缓解 症状，但并不能消除B淋巴细胞内及咽喉部上皮的EB病毒。EBV相关肿瘤的治疗主要为化疗 和放疗，但对于复发或转移的患者来说，疗效较差。 单克隆抗体可大量生产，其与抗原结合的高亲和性和高特异性，大大减少了临床 应用时的不良反应。同时可以对抗体分子进行改造以增加其抗病毒效力。抗体以其特异性 和使用的灵活性成为感染性疾病治疗中非常有前景的手段。而至今仍未有针对EBV囊膜糖 蛋白的人源单克隆抗体上市。因此开发抗EBV的人源单克隆抗体，将为EBV感染相关疾病提 供更有效的预防和治疗手段。
技术实现要素：
本发明第一个方面的目的，在于利用EB病毒(Epstein-Barr Virus，EBV)膜蛋白 gp350(glycoprotein 350)作为钓饵，筛选展示在酵母表面的人类非免疫单链可变区抗体 片段(single chain variable fragment,scFvs)文库，得到可同gp350蛋白特异结合的单 克隆抗体。通过EB病毒感染细胞模型，筛选得到了具有中和活性的单克隆抗体。 本发明第二个方面的目的，在于提供编码本发明第一个方面所述抗体的核苷酸序 列。 本发明第三个方面的目的，在于提供含有本发明第二个方面所述的核苷酸序列的 转基因细胞系。 本发明第四个方面的目的，在于提供一种治疗与EB病毒相关疾病的药物，所述药 物的活性成分为本发明第一个方面所述的抗体。 本发明所采取的技术方案是： 本发明的第一个方面，提供一种中和EB病毒的抗体，由轻链和重链组成，所述重链 3 CN 111574621 A 说 明 书 2/13 页 的重链可变区中具有3个互补区CDR1、CDR2和CDR3，其中，CDR1的氨基酸序列为GYTFTTYY (SEQ ID NO .1)，CDR2的氨基酸序列为INPSVGSA(SEQ ID NO .2)，CDR3的氨基酸序列为 ARVGPSRYSTSSPY(SEQ ID NO.3)；所述轻链的轻链可变区中具有3个互补区CDR1’、CDR2’和 CDR3’，其中，CDR1’的氨基酸序列为SSNIGSNT(SEQ ID NO .4)，CDR2’的氨基酸序列为GNN， CDR3’的氨基酸序列为SSYTSSSSLV(SEQ ID NO.5)。 根据本发明第一个方面所述的抗体，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示。 根据本发明第一个方面所述的抗体，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示。 根据本发明第一个方面所述的抗体，所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示。 根据本发明第一个方面所述的抗体，所述抗体的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO.17所示。 本发明的第二个方面，提供一种编码本发明第一个方面所述抗体的核苷酸序列。 根据本发明第二个方面所述的核苷酸序列，编码重链可变区中3个互补区CDR1、 CDR2和CDR3的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8所示。 根据本发明第二个方面所述的核苷酸序列，编码轻链可变区中3个互补区CDR1’的 核苷酸序列为AGCTCCAACATCGGAAGTAATACT(SEQ ID NO .9)、CDR2’的核苷酸序列为 GGTAATAAT、CDR3’的核苷酸序列为AGCTCATATACAAGCAGCAGCAGTCTGGTC(SEQ ID NO.10)。 根据本发明第二个方面所述的核苷酸序列，编码所述抗体重链可变区的核苷酸序 列如SEQ ID NO.12所示。 根据本发明第二个方面所述的核苷酸序列，编码所述抗体轻链可变区的核苷酸序 列如SEQ ID NO.14所示。 根据本发明第二个方面所述的核苷酸序列，编码所述抗体重链的核苷酸序列如 SEQ ID NO.16所示。 根据本发明第二个方面所述的核苷酸序列，编码所述抗体轻链的核苷酸序列如 SEQ ID NO.18所示。 本发明的第三个方面，提供含有本发明第二个方面所述核苷酸序列的转基因细胞 系。 本发明的第四个方面，提供一种治疗与EB病毒相关疾病的药物，所述药物的活性 成分为本发明第一个方面所述的抗体。 本发明的有益效果是： 本发明首次公开了一种中和EB病毒的抗体，通过酵母表面的人类非免疫单链可变 区抗体片段(single chain variable fragment,scFvs)文库中分离特异性结合抗原的酵 母单克隆，然后进行单克隆抗体基因的克隆和结构功能研究以及筛选。既避免了由于抗原 免疫、杂交瘤融合和单克隆抗体筛选所需要的漫长过程，也可以大大降低动物来源抗体所 引起的副作用。 本发明采用该方法，利用gp350筛选展示在酵母表面的人类非免疫单链可变区抗 体片段文库，获得可以特异性结合抗原的酵母单克隆，获得抗体可变区基因，然后将抗体可 4 CN 111574621 A 说 明 书 3/13 页 变区基因克隆到含有对应恒定区的真核细胞表达载体上并转染293T细胞，即可得到同 gp350蛋白特异结合的单克隆抗体。然后通过EB病毒感染细胞模型，筛选得到了具有抗EBV 中和活性的单克隆抗体。 本发明提供的该中和EB病毒的抗体能够阻断EBV感染B细胞，IC50为203ng/ml，而 对埃博拉病毒的感染无中和效果，说明该抗体具有很高的特异中和EBV感染B细胞的能力。， 附图说明 图1实施例3中S54抗体对EBV感染Raji细胞的中和效果。 图2实施例3中S54抗体对埃博拉假病毒感染Huh7细胞的中和效果。
本发明首次公开了一种EB病毒的抗体，由轻链和重链组成，所述重链的重链可变区中具有3个互补区CDR1、CDR2和CDR3，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1～3所示，所述轻链的轻链可变区中具有3个互补区CDR1’、CDR2’和CDR3’，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4、GNN、SEQ ID NO.5 全部
背景技术：
EB病毒最早于1964年由Epstein和Barr从Burkitt淋巴瘤细胞中成功培养并建株。 EBV属于γ亚型疱疹病毒，是首个被发现的人类致癌病毒。EBV在人群中的感染非常普遍，据 报道全球约有95％以上的成年人携带有EBV。在儿童和青少年中，EBV感染多造成传染性单 核细胞增多症。EBV的潜伏感染与人类多种淋巴肿瘤和上皮肿瘤发生有关，如霍奇金淋巴 瘤、伯基特淋巴瘤及NK/T细胞淋巴瘤等，上皮肿瘤包括鼻咽癌和大约10％的胃癌等。而对于 器官移植病人以及艾滋病患者等免疫抑制病人来说，罹患EBV相关肿瘤的概率大大增加。据 统计，全球每年新增约200000例EBV相关的肿瘤病例,美国NIH已于2016年正式将EBV列入第 14版致癌物名录。 目前针对EB病毒尚无有效的疫苗，由EBV感染引起的疾病也缺乏特异的治疗手段。 传染性单核细胞增多症的治疗大多应用抗病毒药物如阿昔洛韦等，虽然可一定程度上缓解 症状，但并不能消除B淋巴细胞内及咽喉部上皮的EB病毒。EBV相关肿瘤的治疗主要为化疗 和放疗，但对于复发或转移的患者来说，疗效较差。 单克隆抗体可大量生产，其与抗原结合的高亲和性和高特异性，大大减少了临床 应用时的不良反应。同时可以对抗体分子进行改造以增加其抗病毒效力。抗体以其特异性 和使用的灵活性成为感染性疾病治疗中非常有前景的手段。而至今仍未有针对EBV囊膜糖 蛋白的人源单克隆抗体上市。因此开发抗EBV的人源单克隆抗体，将为EBV感染相关疾病提 供更有效的预防和治疗手段。
技术实现要素：
本发明第一个方面的目的，在于利用EB病毒(Epstein-Barr Virus，EBV)膜蛋白 gp350(glycoprotein 350)作为钓饵，筛选展示在酵母表面的人类非免疫单链可变区抗体 片段(single chain variable fragment,scFvs)文库，得到可同gp350蛋白特异结合的单 克隆抗体。通过EB病毒感染细胞模型，筛选得到了具有中和活性的单克隆抗体。 本发明第二个方面的目的，在于提供编码本发明第一个方面所述抗体的核苷酸序 列。 本发明第三个方面的目的，在于提供含有本发明第二个方面所述的核苷酸序列的 转基因细胞系。 本发明第四个方面的目的，在于提供一种治疗与EB病毒相关疾病的药物，所述药 物的活性成分为本发明第一个方面所述的抗体。 本发明所采取的技术方案是： 本发明的第一个方面，提供一种中和EB病毒的抗体，由轻链和重链组成，所述重链 3 CN 111574621 A 说 明 书 2/13 页 的重链可变区中具有3个互补区CDR1、CDR2和CDR3，其中，CDR1的氨基酸序列为GYTFTTYY (SEQ ID NO .1)，CDR2的氨基酸序列为INPSVGSA(SEQ ID NO .2)，CDR3的氨基酸序列为 ARVGPSRYSTSSPY(SEQ ID NO.3)；所述轻链的轻链可变区中具有3个互补区CDR1’、CDR2’和 CDR3’，其中，CDR1’的氨基酸序列为SSNIGSNT(SEQ ID NO .4)，CDR2’的氨基酸序列为GNN， CDR3’的氨基酸序列为SSYTSSSSLV(SEQ ID NO.5)。 根据本发明第一个方面所述的抗体，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示。 根据本发明第一个方面所述的抗体，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示。 根据本发明第一个方面所述的抗体，所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示。 根据本发明第一个方面所述的抗体，所述抗体的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO.17所示。 本发明的第二个方面，提供一种编码本发明第一个方面所述抗体的核苷酸序列。 根据本发明第二个方面所述的核苷酸序列，编码重链可变区中3个互补区CDR1、 CDR2和CDR3的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8所示。 根据本发明第二个方面所述的核苷酸序列，编码轻链可变区中3个互补区CDR1’的 核苷酸序列为AGCTCCAACATCGGAAGTAATACT(SEQ ID NO .9)、CDR2’的核苷酸序列为 GGTAATAAT、CDR3’的核苷酸序列为AGCTCATATACAAGCAGCAGCAGTCTGGTC(SEQ ID NO.10)。 根据本发明第二个方面所述的核苷酸序列，编码所述抗体重链可变区的核苷酸序 列如SEQ ID NO.12所示。 根据本发明第二个方面所述的核苷酸序列，编码所述抗体轻链可变区的核苷酸序 列如SEQ ID NO.14所示。 根据本发明第二个方面所述的核苷酸序列，编码所述抗体重链的核苷酸序列如 SEQ ID NO.16所示。 根据本发明第二个方面所述的核苷酸序列，编码所述抗体轻链的核苷酸序列如 SEQ ID NO.18所示。 本发明的第三个方面，提供含有本发明第二个方面所述核苷酸序列的转基因细胞 系。 本发明的第四个方面，提供一种治疗与EB病毒相关疾病的药物，所述药物的活性 成分为本发明第一个方面所述的抗体。 本发明的有益效果是： 本发明首次公开了一种中和EB病毒的抗体，通过酵母表面的人类非免疫单链可变 区抗体片段(single chain variable fragment,scFvs)文库中分离特异性结合抗原的酵 母单克隆，然后进行单克隆抗体基因的克隆和结构功能研究以及筛选。既避免了由于抗原 免疫、杂交瘤融合和单克隆抗体筛选所需要的漫长过程，也可以大大降低动物来源抗体所 引起的副作用。 本发明采用该方法，利用gp350筛选展示在酵母表面的人类非免疫单链可变区抗 体片段文库，获得可以特异性结合抗原的酵母单克隆，获得抗体可变区基因，然后将抗体可 4 CN 111574621 A 说 明 书 3/13 页 变区基因克隆到含有对应恒定区的真核细胞表达载体上并转染293T细胞，即可得到同 gp350蛋白特异结合的单克隆抗体。然后通过EB病毒感染细胞模型，筛选得到了具有抗EBV 中和活性的单克隆抗体。 本发明提供的该中和EB病毒的抗体能够阻断EBV感染B细胞，IC50为203ng/ml，而 对埃博拉病毒的感染无中和效果，说明该抗体具有很高的特异中和EBV感染B细胞的能力。， 附图说明 图1实施例3中S54抗体对EBV感染Raji细胞的中和效果。 图2实施例3中S54抗体对埃博拉假病毒感染Huh7细胞的中和效果。
