技术摘要：
本发明公开了一种具有免疫检查点CTLA‑4抑制活性的多肽及其应用，属于生物医药领域。本发明系列多肽应具有氨基酸序列KXaVLTXbMSGD（其中Xa、Xb可被删除或替换）或其药学上可以接受的盐，更进一步地，所述的多肽序列在上述的序列基础上，一个或多个氨基酸被删除、置换或  全部
背景技术：
免疫检查点是一系列免疫抑制类分子，包括细胞毒T淋巴细胞相关抗原  -4 (Cytotoxic  T  lymphocyte-associated  antigen-4，CTLA-4)在内的多种分子。在正常的生 理状态下，免疫检查点可以调节免疫应答、防止自身组织损伤，以及对于维持免疫耐受具有 重要的意义，同时免疫检查点与很多自身免疫疾病相关，例如狼疮样自身免疫综合征和自 身免疫性扩张性心肌病。但是在肿瘤发生发展过程中，免疫检查点分子的活化和高表达会 抑制免疫细胞的功能，减弱免疫细胞细胞对肿瘤细胞的杀伤能力从而介导肿瘤免疫逃逸。 免疫检查点阻滞剂就是通过抑制负调节信号，调节免疫细胞活性来提高抗肿瘤免疫反应的 治疗方法。 整个免疫应答过程中，T细胞激活需要双信号通路介导。首先通过T细胞表面的T细 胞受体TCR特异性识别抗原递呈细胞APC或肿瘤细胞表面的MHC分子抗原肽复合体；其次APC 或肿瘤细胞上的共刺激分子与T细胞上的共刺激受体结合，激活或者抑制T淋巴细胞。T细胞 上的共刺激分子主要包括共激活分子4-1BB，CD27，CD28，OX40，ICOS，以及共抑制分子 CTLA4，PD-1。 其中，CTLA-4又名CD152，是一种白细胞分化抗原,是由活化的效应T细胞表达的跨 膜蛋白，在T细胞增殖过程中起抑制作用，同时对相关细胞周期进程和细胞因子如白介素-2 (IL-2)，干扰素γ(IFN-γ)的分泌也有不同程度的抑制。  CTLA-4通过多种机制发挥其抑制 功能，包括与共刺激信号CD28竞争性结合抗原呈递细胞(antigen  presenting  cell，APC) 上共有的配体B7(CD80/CD86)。目前，靶向CTLA-4的抗体被用来治疗多种人恶性肿瘤，目的 是阻断CTLA-4在T  细胞活化过程中的抑制作用。 随着对CTLA-4研究得越来越深入，发现其在肿瘤微环境中的调节性T细胞  (Tregs)上也能发挥作用。肿瘤微环境中的调节性T细胞(Tregs)上高表达  CTLA-4，靶向 CTLA-4的抗体可能通过介导巨噬细胞的抗体依赖性细胞吞噬作用(Antibody  dependent  phagocytosis，ADCP)或自然杀伤细胞的抗体依赖性细胞毒性(antibody-dependent  cytotoxic  cell，ADCC)来消除肿瘤微环境内的Treg  细胞，从而达到抗肿瘤作用，这一机制 研究也为局部给药提供了用力地证据。 已上市的Ipilimumab是抗CTLA-4免疫调节的的单克隆抗体(monoclonal antibody，mAb)，单独成药适应症为黑色素瘤，随着联合用药的兴起，靶向于  CTLA-4的药物 参与治疗的肿瘤谱在不断扩大，例如，其与PD-1抗体联用已在黑色素瘤，肺癌，肾癌中取得 显著成效。除此之外，在Chimeric  Antigen  Receptor T,CAT-T疗法中加入CTLA-4靶点的联 合使用也是免疫疗法研究的一大热点。 3 CN 111592580 A 说　明　书 2/13 页
技术实现要素：
1.要解决的问题 本发明提供一种具有免疫检查点抑制活性的多肽及其应用，本发明的多肽作用于 CTLA-4，来抑制CTLA-4/B7通路，通过多种实验模型验证该序列具有良好的抑瘤效果极具开 发前景。 2.技术方案 为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下： 一种具有免疫检查点CTLA-4抑制活性的多肽，其特征在于：具有  KXaVLTXbMSGD或 其药学上可以接受的盐，其中Xa、Xb可被删除或替换的氨基酸。 所述的多肽，其特征在于：所述的多肽序列在权利要求1的序列基础上，一个或多 个氨基酸被删除、置换或添加后仍具有靶向CTLA-4作用的多肽，或该多肽药学上可以接受 的盐。 所述的多肽，其特征在于所述的多肽序列为KMVLTMMSGD。 所述的多肽在制备预防与治疗肿瘤药物中的应用。 具体来说： 1 .固相合成的方法合成具有KXaVLTXbMSGD(其中Xa、Xb可被删除或替换)序列的多 肽，使用HPLC和质谱检测多肽纯度与分子量，以序列  KMVLTMMSGD为例，详细过程见实施例 1； 2.将多肽链接FITC，使其带有荧光标记，随后使用流式细胞仪检测荧光标记多肽 在不同浓度与T细胞的结合情况，以序列KMVLTMMSGD为例，详细过程见实施例2～3； 3.CTLA-4的负调节功能会抑制T细胞激活，加入序列为KXaVLTXbMSGD  (其中Xa、Xb 可被删除或替换)的CTLA-4拮抗肽后会增强免疫系统的激活程度，提高IL-2的分泌量，以序 列KMVLTMMSGD为例，详细过程见实施例4； 4 .检测多肽的体外活性，将免疫细胞与肿瘤细胞共孵育后，加入CTLA-4  拮抗肽 KXaVLTXbMSGD(其中Xa、Xb可被删除或替换)，会增强免疫系统的对肿瘤细胞的杀伤能力，分 别检测了对黑色素瘤、非小细胞肺癌、肾细胞癌、卵巢癌、头颈癌、前列腺癌、乳腺癌及结肠 癌的杀伤能力，以序列KMVLTMMSGD 为例，详细过程见实施例5； 5.检测多肽的体内抗肿瘤活性，建立皮下移植瘤模型，在实验过程中给与  CTLA-4 拮抗肽KXaVLTXbMSGD(其中Xa、Xb可被删除或替换)，会抑制肿瘤生长，分别检测多肽对不同 肿瘤包括黑色素瘤、非小细胞肺癌、肾细胞癌、卵巢癌、头颈癌、前列腺癌、乳腺癌及结肠癌 的抑瘤率来评价多肽体内药效，以序列  KMVLTMMSGD为例，详细过程见实施例6； 6.检测多肽的安全性，使用秀丽线虫为载体，通过过评价多肽对线虫幼虫致死率 和头部摆动次数的影响，以序列KMVLTMMSGD为例，评价多肽的安全性，详细过程见实施例7 ～8。 3.有益效果 相比于现有技术，本发明的有益效果为： (1)本发明的多肽结构简单，容易合成、分离和纯化，有效抑制CTLA-4/B7  通路，消 除免疫抑制的作用； (2)本发明的多肽不良反应和毒副性反应弱； 4 CN 111592580 A 说　明　书 3/13 页 (3)本发明涉及的多肽消除免疫抑制效果在体内外模型中表现良好，具体效果为 显著提高T细胞的活性，加强对肿瘤细胞的杀伤作用进而产生抑瘤效果。 附图说明 图1多肽HPLC纯度分析图。 图2多肽MS检测图。 图3流式细胞仪检测T细胞与FITC-抗CTLA-4多肽的结合。A：T细胞与  1μM多肽结合 率；B：T细胞与5μM多肽结合率；C：T细胞与10μM多肽结合率。 图4激光共聚焦显微镜观察T细胞与FITC-抗CTLA-4多肽的结合。A：DiI-  细胞膜B： FITC-抗CTLA-4多肽C：Merge图。 图5多肽对SEB刺激PBMC实验上清中IL-2的影响。注：各给药组与对照组(SEB  alone组)相比，并与Ipilimumab组相比，*P<0.05，**P<0.01，  ***P<0.001，ns表示P>0.05。 图6多肽对SEB刺激PBMC实验上清中IFN-γ的影响。注：各给药组与对照组(SEB  alone组)相比，并与Ipilimumab组相比，*P<0.05，**P<0.01，  ***P<0.001，ns表示P>0.05。