技术摘要：
本发明公开了一种用于检测未知样品年龄的引物组，包括以4个位点作为甲基化标志物对应的8组引物序列，所述甲基化标志物分别为：ITGA2B、KLF14、RASSF5、PDE4C，所述8组引物序列分别为ITGA2B‑F、ITGA2B‑R、KLF14‑F、KLF14‑R、RASSF5‑F、RASSF5‑R、PDE4C‑F、PDE4C  全部
背景技术：
个体年龄推断一直是法医学研究的重要内容。目前实际工作中主要依据法医人类 学的方法，通过测量骨骼形态学指标，应用相应模型推断个体年龄。实践证明，法医人类学 个体年龄推断技术已经比较成熟，误差也相对较小，且骨骼保留时间长，甚至经过百万年的 时间仍可能通过形态特征揭示年龄信息。目前，通过X射线、大体骨骼形态、牙齿形态等骨骼 形态信息可初步推断个体年龄。多种骨骼用于推断个体年龄，包括耻骨、胸骨、股骨、锁骨 等。但是在遇到检测所需的骨骼检材缺失的案例时，法医人类学技术的应用就会受到极大 的限制，此时通过其他生物组织来推断个体年龄就显得尤为重要。近年来，年龄推断已发展 到分子生物学领域。新兴的表观遗传学研究发现DNA甲基化与衰老之间存在着密切的相关 性。 DNA甲基化与衰老之间的关系很复杂。早期研究认为衰老会导致基因组整体低甲 基化，然而后续研究发现，包括多种肿瘤抑制基因及多梳靶基因在内的位点随着年龄的增 加，呈现高甲基化。目前以欧美人群为对象的DNA甲基化与衰老之间关系的研究较多，并通 过筛选年龄相关DNA甲基化位点，成功将DNA甲基化应用于年龄推断的研究与实践中，证实 了这一研究的可行性与现实意义。地域环境对DNA甲基化的影响是不可忽视的，然而迄今为 止，针对中国汉族人群的研究还很有限，这一问题还需要深入研究。目前年龄相关DNA甲基 化位点研究见表1-3，本项目可以基于这些研究进行进一步筛查。 除地域环境外，性别、酗酒、吸烟、疾病等因素也会影响DNA甲基化情况，这可能是 目前采用DNA甲基化方法进行年龄推断时准确率低，特别是60岁以上人群准确率下降(慢性 病多发、不良嗜好引起的问题堆加)的主要原因。那么，如何提高通过筛选年龄相关DNA甲基 化位点，推断年龄的特异性成为了亟待解决的问题，而考察年龄相关DNA甲基化位点在不同 性别、不同状态下人群中的变化情况，可能为阐明这一问题，提高推断年龄准确率提供重要 的理论支撑。 有鉴于此，特提出本发明。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题是克服以上技术缺陷，提供一种用于检测未知样品年龄 的引物组、试剂盒其使用方法，其缓解现有技术中检测所需的骨骼检材缺失，导致传统检测 方法无法检测的技术问题。 为了达到上述发明目的，本发明采用的技术方案为：一种用于检测未知样品年龄 的引物组，包括以4个位点作为甲基化标志物对应的8组引物序列，所述甲基化标志物分别 为：ITGA2B、KLF14、RASSF5、PDE4C，所述8组引物序列分别为ITGA2B-F、ITGA2B-R、KLF14-F、 3 CN 111593130 A 说　明　书 2/9 页 KLF14-R、RASSF5-F、RASSF5-R、PDE4C-F、PDE4C-R，所述8组引物序列具体表示如下： ITGA2B-F(SEQ  ID  NO.1)：ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTTAAGATTTGATTT TGGTTGGG； ITGA2B-R(SEQ  ID  NO.2)：GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTATCACATACTAC ACATTAAACTC； KLF14-F(SEQ  ID  NO.3)：ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTTGGTAGAGATTTGT TTTGGTTTGT； KLF14-R(SEQ  ID  NO.4)：GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTCTTTCTAAAACTC CACAAAACACCC； RASSF5-F(SEQ  ID  NO.5)：ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTGTAGTATTGAGTG TGTAGTGTGTG； RASSF5-R(SEQ  ID  NO.6)：GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTCCTAACACACAC ATCCTCCAAC； PDE4C-F(SEQ  ID  NO.7)：ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTGAATAGAAGTGTTG TTGGATGTGG； PDE4C-R(SEQ  ID  NO.8)：GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTCACTCCTCAACAC CCACTCAC。 进一步的，所述引物组中的SEQ  ID  NO.1-SEQ  ID  NO.8所述单链DNA分子的终浓度 均独立地为0.1-0.15umol/L。 权利要求1所述的用于检测未知样品年龄的引物组在对制备检测试剂中的应用。 一种用于检测未知样品年龄的试剂盒，包括含有权利要求1所述的引物组以及PCR 反应体系，所述PCR反应体系包括聚合酶、反应缓冲液和dNTP。 一种用于检测未知样品年龄的试剂盒的使用方法，用权利要求1所述的引物组对 待测样品进行扩增，检测扩增产物中甲基化情况，进而确定样品年龄。 本发明的有益效果为：本发明针对甲基化位点(ITGA2B，KLF14，RASSF5，PDE4C)序 列，设计特异性扩增引物组，并基于该引物组建立了未知样品年龄检测方法，可对2组2重甲 基化位点进行定性检测。通过试验证明：本发明的引物组特异性好、灵敏度高，操作的简便 度和试剂成本明显降低，不需要依赖骨骼检材，可用于法医现场样品扩增和痕量样本的检 测。含有该引物组的试剂或试剂盒可以特异性的检测、预测未知样品年龄，且基于该引物组 建立的未知样品年龄预测的方法灵敏、准确、简便，可以实现未知样品年龄的快速检测，不 会受到骨骼检材缺失的限制，做到准确、快速的现场痕量样本的检测。 说明书附图 图1是本发明的试剂盒验证结果ITGA2B、KLF14的位点大小。 图2是本发明的试剂盒验证结果RASSF5、PDE4C的位点大小。