技术摘要：
本发明提供一种基于指尖血的酶联免疫分析方法，涉及免疫检测技术领域。该基于指尖血的酶联免疫分析方法，包括以下操作步骤：1)将血小板单克隆抗体SZ‑51与膜糖蛋白单克隆抗体SZ‑21分别加入稀释液进行稀释，然后加入到聚苯乙烯酶标板表面，将酶标板在低温下过夜并加入 全部
背景技术：
酶联免疫分析法是一种利用抗原抗体之间专一性键结的特性对检体进行检测的 方法。ELISA分析法由于其快速、简便的分析特性，广泛用于血清、血浆、尿、便、组织液等样 品中各种生化指标、疾病标志物的临床检验。其中，双抗体夹心法是检测抗原最常用的 ELISA分析方法，其基本工作原理是：利用连接于固相载体上的抗体和酶标抗体分别与样品 中被检测抗原分子上的两个抗原决定簇结合，形成固相抗体-抗原-酶标抗体免疫复合物。 由于反应系统中固相抗体和酶标抗体的量相对于待测抗原是过量的，因此复合物的形成量 与待测抗原的含量在检测范围内成正比，测定复合物中的酶作用于加入的底物后生成的有 色物质量，即可确定待测抗原含量。 目前，基于指尖血的酶联免疫分析时需要运用到大型仪器辅助，设备较昂贵、成本 高、操作复杂、费时，而且往往都需要受过专门培训的技术人员才会使用，难以在基层医疗 单位普及推广，不适合于大众人群对血小板的活化程度进行测定。
技术实现要素：
(一)解决的技术问题 针对现有技术的不足，本发明提供了一种基于指尖血的酶联免疫分析方法，解决 了现有技术中存在的缺陷与不足。 (二)技术方案 为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种基于指尖血的酶联免 疫分析方法，包括以下操作步骤： 1)将血小板单克隆抗体SZ-51与膜糖蛋白单克隆抗体SZ-21分别加入稀释液进行 稀释，然后将血小板单克隆抗体SZ-51稀释液与膜糖蛋白单克隆抗体SZ-21稀释液加入到聚 苯乙烯酶标板表面，将酶标板在低温下过夜并加入封闭液； 2)使用清洗液将酶标板清洗三次，洗涤除去杂质，形成包被的聚苯乙烯酶标板； 3)采集指尖血，将待测指尖血中加入pH值为7.4的0.2M磷酸缓冲液，配制待测指尖 血标准品溶液，混合均匀后低温保存备用； 4)待测指尖血标准品溶液加入到包被的聚苯乙烯酶标板表面，使其与抗体键合， 随后用清洗液洗涤聚苯乙烯酶标板并甩干； 5)往包被的聚苯乙烯酶标板表面加入Biotin-SZ2，使其进行反应，随后用清洗液 洗涤聚苯乙烯酶标板并甩干； 6)往包被的聚苯乙烯酶标板表面加入亲和素标记的辣根过氧化物酶检测与邻苯 二胺进行显色反应后，最后用酶标仪读取吸光度。 优选的，所述步骤1中稀释液为碳酸盐缓冲液，稀释的浓度为5-10ug/ml。 3 CN 111610333 A 说 明 书 2/3 页 优选的，所述步骤1中酶标板过夜的温度为3-4℃。 优选的，所述步骤5中反应的温度为30-36℃，反应时间为10-20分钟。 优选的，所述清洗液为PBS溶液与质量浓度为0.04％-0.06％的吐温20组成，其中 吐温20占清洗液质量的0.08％-0.12％。 (三)有益效果 本发明提供了一种基于指尖血的酶联免疫分析方法。具备以下有益效果： 该基于指尖血的酶联免疫分析方法，通过利用酶联免疫分析方法对指尖血中血小 板的活化程度进行测定，能够测定血小板功能活化剂或抑制剂对血小板功能的影响，测定 过程无需过多的大型设备，操作简单，省时省力，成本低。
本发明提供一种基于指尖血的酶联免疫分析方法，涉及免疫检测技术领域。该基于指尖血的酶联免疫分析方法，包括以下操作步骤：1)将血小板单克隆抗体SZ‑51与膜糖蛋白单克隆抗体SZ‑21分别加入稀释液进行稀释，然后加入到聚苯乙烯酶标板表面，将酶标板在低温下过夜并加入 全部
背景技术：
酶联免疫分析法是一种利用抗原抗体之间专一性键结的特性对检体进行检测的 方法。ELISA分析法由于其快速、简便的分析特性，广泛用于血清、血浆、尿、便、组织液等样 品中各种生化指标、疾病标志物的临床检验。其中，双抗体夹心法是检测抗原最常用的 ELISA分析方法，其基本工作原理是：利用连接于固相载体上的抗体和酶标抗体分别与样品 中被检测抗原分子上的两个抗原决定簇结合，形成固相抗体-抗原-酶标抗体免疫复合物。 由于反应系统中固相抗体和酶标抗体的量相对于待测抗原是过量的，因此复合物的形成量 与待测抗原的含量在检测范围内成正比，测定复合物中的酶作用于加入的底物后生成的有 色物质量，即可确定待测抗原含量。 目前，基于指尖血的酶联免疫分析时需要运用到大型仪器辅助，设备较昂贵、成本 高、操作复杂、费时，而且往往都需要受过专门培训的技术人员才会使用，难以在基层医疗 单位普及推广，不适合于大众人群对血小板的活化程度进行测定。
技术实现要素：
(一)解决的技术问题 针对现有技术的不足，本发明提供了一种基于指尖血的酶联免疫分析方法，解决 了现有技术中存在的缺陷与不足。 (二)技术方案 为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种基于指尖血的酶联免 疫分析方法，包括以下操作步骤： 1)将血小板单克隆抗体SZ-51与膜糖蛋白单克隆抗体SZ-21分别加入稀释液进行 稀释，然后将血小板单克隆抗体SZ-51稀释液与膜糖蛋白单克隆抗体SZ-21稀释液加入到聚 苯乙烯酶标板表面，将酶标板在低温下过夜并加入封闭液； 2)使用清洗液将酶标板清洗三次，洗涤除去杂质，形成包被的聚苯乙烯酶标板； 3)采集指尖血，将待测指尖血中加入pH值为7.4的0.2M磷酸缓冲液，配制待测指尖 血标准品溶液，混合均匀后低温保存备用； 4)待测指尖血标准品溶液加入到包被的聚苯乙烯酶标板表面，使其与抗体键合， 随后用清洗液洗涤聚苯乙烯酶标板并甩干； 5)往包被的聚苯乙烯酶标板表面加入Biotin-SZ2，使其进行反应，随后用清洗液 洗涤聚苯乙烯酶标板并甩干； 6)往包被的聚苯乙烯酶标板表面加入亲和素标记的辣根过氧化物酶检测与邻苯 二胺进行显色反应后，最后用酶标仪读取吸光度。 优选的，所述步骤1中稀释液为碳酸盐缓冲液，稀释的浓度为5-10ug/ml。 3 CN 111610333 A 说 明 书 2/3 页 优选的，所述步骤1中酶标板过夜的温度为3-4℃。 优选的，所述步骤5中反应的温度为30-36℃，反应时间为10-20分钟。 优选的，所述清洗液为PBS溶液与质量浓度为0.04％-0.06％的吐温20组成，其中 吐温20占清洗液质量的0.08％-0.12％。 (三)有益效果 本发明提供了一种基于指尖血的酶联免疫分析方法。具备以下有益效果： 该基于指尖血的酶联免疫分析方法，通过利用酶联免疫分析方法对指尖血中血小 板的活化程度进行测定，能够测定血小板功能活化剂或抑制剂对血小板功能的影响，测定 过程无需过多的大型设备，操作简单，省时省力，成本低。
