技术摘要：
一种在胰蛋白酶酶切过程中选择性保护酶切位点的方法，其特征在于：包括一待用胰蛋白酶酶切的多肽，该多肽的精氨酸的两侧均设有一半胱氨酸，两个半胱氨酸形成二硫键，且所述二硫键横跨所述精氨酸。本发明对多肽中需进行保护的精氨酸的两侧，选择适当的位点插入半胱氨酸  全部
背景技术：
胰蛋白酶是肽链内切酶，其酶切位点为/K/R-\P，可以对蛋白质氨基酸序列中的精 氨酸和赖氨酸的C端进行酶切(如精氨酸/赖氨酸后面跟的是脯氨酸则不会发生酶切)。在酶 切反应中，为了防止肽链中的赖氨酸被胰蛋白酶酶切，通常使用柠康酸酐或者马来酸酐与 赖氨酸侧链上的ε氨基进行反应，保护赖氨酸C端不被胰蛋白酶酶切。但对于肽链中的精氨 酸没有很好的保护手段，只能将精氨酸突变为其他氨基酸。如果氨基酸序列中精氨酸所处 位置接近该蛋白本身的活性中心位点，或其本身为发挥其活性的关键残基，该突变可能导 致目标蛋白的活性降低甚至失活。因此，有必要设计一种在胰蛋白酶酶切过程中选择性保 护酶切位点的方法。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种在胰蛋白酶酶切过程中选择性保护酶切位点的方法。 为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供的技术方案是：一种在胰蛋白酶酶 切过程中选择性保护酶切位点的方法，包括一待用胰蛋白酶酶切的多肽，该多肽的精氨酸 的两侧均设有一半胱氨酸，两个半胱氨酸形成二硫键，且所述二硫键横跨所述精氨酸。 优选的技术方案为：所述半胱氨酸为插入或突变得到。 优选的技术方案为：在精氨酸的两侧均插入一半胱氨酸；或者将精氨酸的两侧的 不重要的氨基酸突变为半胱氨酸；或者在精氨酸的一侧插入一半胱氨酸，另一侧的不重要 的氨基酸突变为半胱氨酸；使两个半胱氨酸横跨待保护的精氨酸形成二硫键。 优选的技术方案为：两个半胱氨酸间隔的氨基酸数目为n，n为大于或等于1，小于 20的整数。 优选的技术方案为：两个半胱氨酸间隔的氨基酸数目为n，n为大于或等于5，小于 19的整数。 优选的技术方案为：所述多肽的序列为SEQ  ID  NO.1、SEQ  ID  NO.2、SEQ  ID  NO.3 或SEQ  ID  NO.4。 由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有的优点是： 本发明对多肽中需进行保护的精氨酸的两侧，选择适当的位点插入半胱氨酸或者 将不重要的氨基酸突变为半胱氨酸，使两个半胱氨酸横跨拟保护的精氨酸形成二硫键。通 过二硫键带来的构象变化，在酶切处形成空间位阻，降低胰蛋白酶和精氨酸羧基端的亲和 力，大幅减弱甚至消除酶切效应。 3 CN 111607004 A 说　明　书 2/9 页 附图说明 图1为多肽一酶切前后分子量检测图谱。 图2为多肽二酶切前后分子量检测图谱。 图3为多肽三酶切前后分子量检测图谱。 图4为多肽一序列。 图5为多肽二序列。 图6为多肽三序列。