技术摘要：
本发明公开了一种猪痢疾雾化疫苗及其制备方法，包括：猪痢疾短螺旋体的至少两种基因多样性菌株的细菌的组合物，其特征在于：所述基因多样性是通过不同克隆复合体筛选来自猪痢疾短螺旋体的至少两种基因多样性菌株而获得的，且其中至少一个菌株属于克隆复合体I或克隆复合 全部
背景技术：
猪 痢疾 短 螺 旋 体 ( B .h y o d y s e n t e r i a e ；先 前 称 为 猪 痢疾 龙 介虫 (Serpulahyodysenteriae)、猪痢疾蛇形螺旋体(Serpulinahyodysenteriae)或猪痢疾密螺 旋体(Treponemahyodysenteriae))是一种厌氧肠螺旋体，其感染许多哺乳动物和禽类动 物，并在某些情况下引起腹泻疾病。一个经过充分研究的例子是猪痢疾(swinedysentery， SD)，这是在猪中由猪痢疾短螺旋体感染引起的全世界范围内的猪的重要地方病。SD是一种 传染性粘膜出血性 (mucohaemorrhagic)腹泻疾病，其特征在于大肠上皮表面广泛炎症和 坏死。由于SD导致的经济损失主要来自生长迟缓，药物成本和死亡率。在猪场确立SD 的情 况下，疾病谱可以从轻度、短暂或不明显变为严重甚至致命。 许多方法用于控制猪痢疾，从预防性使用抗微生物剂到完全去除感染畜群的库存 并防止感染的携带猪再进入。所有这些选择都很昂贵，且如果它们要完全有效，则它们需要 使用复杂的诊断测试来监控进程。目前，检测具有亚临床感染和个体健康携带者动物的畜 群中的猪痢疾仍然是主要问题并且妨碍了有效控制措施的实施。传统上，猪痢疾的明确诊 断需要从患病猪的粪便或粘膜中分离和鉴定猪痢疾短螺旋体。所涉及的主要问题包括这些 厌氧菌的缓慢生长和苛刻的营养需求以及由于在猪肠道的正常菌群中存在形态上相似的 螺旋体而导致的混淆。通过开发聚合酶链反应(PCR)检测来自粪便中的猪痢疾短螺旋体，实 现了显著改善受影响猪的诊断。不幸的是，在实际应用中，PCR检测的限制使其无法检测具 有亚临床感染的携带者动物。由于这些诊断问题，显然需要开发一种简单有效的诊断工具， 其能够在畜群水平上检测猪痢疾短螺旋体感染。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种猪痢疾雾化疫苗及其制备方法，用于治疗、预防、抑制 或减轻猪痢疾短螺旋体感染。 为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种猪痢疾雾化疫苗及其制备方法， 包括：猪痢疾短螺旋体的至少两种基因多样性菌株的细菌的组合物，其特征在于：所述基因 多样性是通过不同克隆复合体筛选来自猪痢疾短螺旋体的至少两种基因多样性菌株而获 得的，且其中至少一个菌株属于克隆复合体I 或克隆复合体Ⅱ或克隆复合体Ⅲ。 作为本发明的一种优选实施方式，所述细菌的组合物为灭活细菌，且细菌的组合 物的浓度为108至109总细菌数/mL。 作为本发明的一种优选实施方式，所述基因多样性菌株在总检测菌株的比例为至 少1％。 作为本发明的一种优选实施方式，所述基因多样性菌株的细菌的组合物内含有佐 剂，且佐剂为铝盐和矿物油，所述佐剂与基因多样性菌株的细菌的组合物的比例为9：1。 3 CN 111544582 A 说 明 书 2/5 页 作为本发明的一种优选实施方式，所述基因多样性菌株的细菌的组合物中至少有 一个菌株属于克隆复合体I或克隆复合体Ⅱ或克隆复合体Ⅲ。 作为本发明的一种优选实施方式，所述制备方法包括以下步骤： 步骤1：猪痢疾短螺旋体的采集：将健康易感染的家猪接种猪痢疾短螺旋体，无菌 采集接种后24～72h濒死或刚死亡的且具有典型病理变化的肠道组织经检验合格后，保存 作为生产用； 步骤2：基因多样性菌株的细菌的组合物悬浮液的制备：取生产用无菌条件下称量 采毒的肝脏组织，加适量的pH7.2磷酸盐缓冲液或生理盐水进行捣碎或研磨、过滤后得组织 悬液，按组织悬液总量的0.1％～0.5％加入甲醛溶液，充分混合后装入无菌容器中，密封后 置37℃环境下灭活48h,得到基因多样性菌株的细菌的组合物悬浮液； 步骤3：猪痢疾雾化疫苗的配制：在步骤2所得的基因多样性菌株的细菌的组合物 悬浮液中添加佐剂，佐剂成分为铝盐和矿物油，按照佐剂与基因多样性菌株的细菌的组合 物的比例为9：1进行配苗，将基因多样性菌株的细菌的组合物悬浮液与佐剂进行充分搅拌 混合，既得猪痢疾疫苗溶液。 步骤4：取步骤3所得的猪痢疾疫苗溶液，将该溶液加入医用下呼吸道沉积型喷雾 器中，将喷雾器连接空气压缩泵，调节压力为0.2MPa后进行喷雾，制备猪痢疾雾化疫苗。 作为本发明的一种优选实施方式，所述步骤4所得猪痢疾雾化疫苗通过肠胃外进 行给药，猪在断奶后2周进行疫苗接种且猪在首次疫苗接种后两周进行再次疫苗接种。 作为本发明的一种优选实施方式，所述猪痢疾雾化疫苗向猪给药的每剂总细菌数 在108至109个细菌之间。 作为本发明的一种优选实施方式，所述步骤2中，使用甲醛溶液对收获的细胞培养 物进行灭活处理；并对灭活后的基因多样性菌株的细菌的组合物悬浮液进行灭活检验：灭 活液接种细胞后无细胞病变。 与现有技术相比，本发明的有益效果如下： 本发明提供猪痢疾短螺旋体菌株，用于诱导针对短螺旋体属感染的防护的活的和 减毒疫苗，用于治疗、预防、抑制或减轻猪痢疾短螺旋体感染。
本发明公开了一种猪痢疾雾化疫苗及其制备方法，包括：猪痢疾短螺旋体的至少两种基因多样性菌株的细菌的组合物，其特征在于：所述基因多样性是通过不同克隆复合体筛选来自猪痢疾短螺旋体的至少两种基因多样性菌株而获得的，且其中至少一个菌株属于克隆复合体I或克隆复合 全部
背景技术：
猪 痢疾 短 螺 旋 体 ( B .h y o d y s e n t e r i a e ；先 前 称 为 猪 痢疾 龙 介虫 (Serpulahyodysenteriae)、猪痢疾蛇形螺旋体(Serpulinahyodysenteriae)或猪痢疾密螺 旋体(Treponemahyodysenteriae))是一种厌氧肠螺旋体，其感染许多哺乳动物和禽类动 物，并在某些情况下引起腹泻疾病。一个经过充分研究的例子是猪痢疾(swinedysentery， SD)，这是在猪中由猪痢疾短螺旋体感染引起的全世界范围内的猪的重要地方病。SD是一种 传染性粘膜出血性 (mucohaemorrhagic)腹泻疾病，其特征在于大肠上皮表面广泛炎症和 坏死。由于SD导致的经济损失主要来自生长迟缓，药物成本和死亡率。在猪场确立SD 的情 况下，疾病谱可以从轻度、短暂或不明显变为严重甚至致命。 许多方法用于控制猪痢疾，从预防性使用抗微生物剂到完全去除感染畜群的库存 并防止感染的携带猪再进入。所有这些选择都很昂贵，且如果它们要完全有效，则它们需要 使用复杂的诊断测试来监控进程。目前，检测具有亚临床感染和个体健康携带者动物的畜 群中的猪痢疾仍然是主要问题并且妨碍了有效控制措施的实施。传统上，猪痢疾的明确诊 断需要从患病猪的粪便或粘膜中分离和鉴定猪痢疾短螺旋体。所涉及的主要问题包括这些 厌氧菌的缓慢生长和苛刻的营养需求以及由于在猪肠道的正常菌群中存在形态上相似的 螺旋体而导致的混淆。通过开发聚合酶链反应(PCR)检测来自粪便中的猪痢疾短螺旋体，实 现了显著改善受影响猪的诊断。不幸的是，在实际应用中，PCR检测的限制使其无法检测具 有亚临床感染的携带者动物。由于这些诊断问题，显然需要开发一种简单有效的诊断工具， 其能够在畜群水平上检测猪痢疾短螺旋体感染。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种猪痢疾雾化疫苗及其制备方法，用于治疗、预防、抑制 或减轻猪痢疾短螺旋体感染。 为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种猪痢疾雾化疫苗及其制备方法， 包括：猪痢疾短螺旋体的至少两种基因多样性菌株的细菌的组合物，其特征在于：所述基因 多样性是通过不同克隆复合体筛选来自猪痢疾短螺旋体的至少两种基因多样性菌株而获 得的，且其中至少一个菌株属于克隆复合体I 或克隆复合体Ⅱ或克隆复合体Ⅲ。 作为本发明的一种优选实施方式，所述细菌的组合物为灭活细菌，且细菌的组合 物的浓度为108至109总细菌数/mL。 作为本发明的一种优选实施方式，所述基因多样性菌株在总检测菌株的比例为至 少1％。 作为本发明的一种优选实施方式，所述基因多样性菌株的细菌的组合物内含有佐 剂，且佐剂为铝盐和矿物油，所述佐剂与基因多样性菌株的细菌的组合物的比例为9：1。 3 CN 111544582 A 说 明 书 2/5 页 作为本发明的一种优选实施方式，所述基因多样性菌株的细菌的组合物中至少有 一个菌株属于克隆复合体I或克隆复合体Ⅱ或克隆复合体Ⅲ。 作为本发明的一种优选实施方式，所述制备方法包括以下步骤： 步骤1：猪痢疾短螺旋体的采集：将健康易感染的家猪接种猪痢疾短螺旋体，无菌 采集接种后24～72h濒死或刚死亡的且具有典型病理变化的肠道组织经检验合格后，保存 作为生产用； 步骤2：基因多样性菌株的细菌的组合物悬浮液的制备：取生产用无菌条件下称量 采毒的肝脏组织，加适量的pH7.2磷酸盐缓冲液或生理盐水进行捣碎或研磨、过滤后得组织 悬液，按组织悬液总量的0.1％～0.5％加入甲醛溶液，充分混合后装入无菌容器中，密封后 置37℃环境下灭活48h,得到基因多样性菌株的细菌的组合物悬浮液； 步骤3：猪痢疾雾化疫苗的配制：在步骤2所得的基因多样性菌株的细菌的组合物 悬浮液中添加佐剂，佐剂成分为铝盐和矿物油，按照佐剂与基因多样性菌株的细菌的组合 物的比例为9：1进行配苗，将基因多样性菌株的细菌的组合物悬浮液与佐剂进行充分搅拌 混合，既得猪痢疾疫苗溶液。 步骤4：取步骤3所得的猪痢疾疫苗溶液，将该溶液加入医用下呼吸道沉积型喷雾 器中，将喷雾器连接空气压缩泵，调节压力为0.2MPa后进行喷雾，制备猪痢疾雾化疫苗。 作为本发明的一种优选实施方式，所述步骤4所得猪痢疾雾化疫苗通过肠胃外进 行给药，猪在断奶后2周进行疫苗接种且猪在首次疫苗接种后两周进行再次疫苗接种。 作为本发明的一种优选实施方式，所述猪痢疾雾化疫苗向猪给药的每剂总细菌数 在108至109个细菌之间。 作为本发明的一种优选实施方式，所述步骤2中，使用甲醛溶液对收获的细胞培养 物进行灭活处理；并对灭活后的基因多样性菌株的细菌的组合物悬浮液进行灭活检验：灭 活液接种细胞后无细胞病变。 与现有技术相比，本发明的有益效果如下： 本发明提供猪痢疾短螺旋体菌株，用于诱导针对短螺旋体属感染的防护的活的和 减毒疫苗，用于治疗、预防、抑制或减轻猪痢疾短螺旋体感染。
