技术摘要：
本发明涉及一种含有毛乳头细胞来源外泌体的生发液及其制备方法，包括毛乳头细胞来源外泌体纳米粒、稳定剂、保湿剂、头皮吸收促进剂、抗氧剂和水。该生发液以毛乳头细胞来源的外泌体纳米粒为主要功效成分，搭配稳定剂、保湿剂、头皮吸收促进剂、抗氧剂等，能使毛乳头细  全部
背景技术：
头发是个人美的象征，在日常生活中起着至关重要的作用。然而，随着现代人生 活、学业和工作压力的增加，越来越多的人受到脱发的困扰，在所有造成脱发的病因中，雄 激素脱发(Androgenic  alopecia,AGA)最为常见。目前，针对脱发治疗的手段主要包括药物 治疗和手术治疗。其中，FDA批准正式用于雄激素脱发的治疗药物是口服非那雄胺和外用米 诺地尔。手术治疗即为毛发移植手术，根据术式分为毛囊单位移植术和毛囊单位提取移植 术，原理是将后枕部优势供区的毛囊提取移植到秃发部位。但是传统的脱发治疗手段存在 着局限性：比如药物治疗对于某些人效果不佳，非那雄胺可能引起抬举困难、阳痿等副作 用；手术治疗受限于供区的毛囊单位，对于终末期脱发无能为力。因此，需要一种新的替代 治疗方案来改善这一现状。 CN105078827A公开了一种含有苦参提取物的养发生发液，配方为：含具有占养发 生发液重量0.0001％至10％的苦参提取物；占养发生发液重量0.001％至5％的日扁柏素； 占养发生发液重量0.01％至10％的烟酰胺。通过以上三种活性物质的组合起到活化发根， 强健发根，促进头发生长和防脱发的效果。三种活性成份具有协同促进头发生长和防脱发 的效果，与单一活性成份相比具有更好的养发生发的效果。 CN104435358A公开了一种植物防脱育发生发液，包括以下重量份原料的有效成 分：人参50-100份、银杏叶50-100份、菟丝子30-150份、补骨脂40-200份、甘草20-90份、枸杞 子60-150份、绞股蓝30-110份、川芎30-100份、啤酒花40-100份和灵芝30-60份。该植物防脱 育发生发液利用各种中药成份的相互协同作用，能够改变头部血液循环、激活毛囊、实现头 发的快速止脱、修复。 现有技术中公开的养发生发类产品主要以中药或中药提取物为有效活性成分，虽 对激活毛囊和促进头发生长有一定的效果，但效果还很有限，不能实现标本兼治的效果。 外泌体是细胞分泌产物，它是一种直径约为50-15nm的脂质双层膜包围调节蛋白、 mRNA、miRNA等结构的微小囊泡。外泌体从母细胞分离而来与母细胞有高度同源性，并携带 母细胞合成生物信息，在细胞间信号交流中扮演着重要角色。尽管，在其他领域，干细胞来 源的外泌体治疗作用已被大量报道，而在皮肤领域，这一研究还相对欠缺。有研究报道，上 皮角质细胞来源的外泌体可以促进皮肤色素沉着，促进创伤修复和抑制瘢痕形成。在毛囊 方向，间充质干细胞来源的外泌体能促进鼠背毛从休止期进入生长期。
技术实现要素：
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种生发液及其制备方法，尤其提 供一种含有毛乳头细胞来源外泌体的生发液及其制备方法。 4 CN 111544373 A 说　明　书 2/11 页 为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案： 第一方面，本发明提供一种含有毛乳头细胞来源外泌体的生发液，所述生发液包 括毛乳头细胞来源外泌体纳米粒、稳定剂、保湿剂、头皮吸收促进剂、抗氧剂和水。 本发明所涉及的生发液以毛乳头细胞来源的外泌体纳米粒为主要功效成分，搭配 以稳定剂、保湿剂、头皮吸收促进剂、抗氧剂，各成分科学合理搭配，能使毛乳头细胞来源外 泌体纳米粒的功效最大化。该生发液能够促进毛母质细胞的增殖活性和迁移活性，能够显 著改善脱发严重患者的头油感和脱发现象，促进新生头发的生长。与现有技术常用的药物 米诺地尔相比具有相当或者更好的功效，且生物安全性很高。 当毛乳头细胞来源的外泌体直接涂抹于头皮表面的时候，由于表面肌肤角质层的 阻隔作用进入不了表皮层的肌底细胞；同时，外泌体本身的稳定性不佳，其在体内的停留时 间较短，需要高频次给药，从而限制了它的应用。基于此，本发明先将外泌体冻干成粉末再 将其制备成纳米颗粒应用于生发液中，即能克服上述弊端，正常使用就能获得较高的透皮 率、较好的稳定性和技术效果。 另外，本发明所涉及的生发液还添加有稳定剂和头皮吸收促进剂，在增加透皮率 和稳定性与毛乳头细胞来源的外泌体纳米颗粒协同增效，以获得更好的生发效果。 优选地，所述生发液以质量份数计包括毛乳头细胞来源外泌体纳米粒1-10份、稳 定剂2-10份、保湿剂1-5份、头皮吸收促进剂1-5份、氧化剂1-2份和水100份。 本发明所涉及的生发液中各成分若以上述特定的质量配比进行组合，无论是对毛 母质细胞的增殖和迁移促进效果，还是改善脱发的效果，都是更优的。 所述毛乳头细胞来源外泌体纳米粒的质量份数可以为1份、2份、3份、4份、5份、6 份、7份、8份、9份或10份等，上述范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。 所述稳定剂的质量份数可以为2份、3份、4份、5份、6份、7份、8份、9份或10份等，上 述范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。 所述保湿剂的质量份数可以为1份、2份、3份、4份或5份等，上述范围内的其他具体 点值均可选择，在此便不再一一赘述。 所述头皮吸收促进剂的质量份数可以为1份、2份、3份、4份或5份等，上述范围内的 其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。 所述氧化剂的质量份数可以为1份、1.2份、1.5份、1.8份或2份等，上述范围内的其 他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。 优选地，所述毛乳头细胞来源外泌体纳米粒为低代毛乳头细胞来源外泌体纳米 粒，所述低代指1-3代，例如1代、2代或3代。本发明研究发现将低代的毛乳头细胞来源外泌 体添加入本发明生发液，相比于高代具有更好的效果。 优选地，所述毛乳头细胞来源外泌体纳米粒的制备原料包括毛乳头细胞来源外泌 体、碳酸二辛酯、甘草甜素和椰油酰胺基丙基甜菜碱。 本发明在众多的稳定剂、保湿剂、头皮吸收促进剂和抗氧剂中甄选出下述几种特 定的类型，研究表明，下述特定类型的配合使得生发液的生发效果更佳。 优选地，所述稳定剂包括透明质酸钠、羧甲基壳聚糖或羟乙基淀粉中的任意一种 或至少两种的组合；所述至少两种的组合例如透明质酸钠和羧甲基壳聚糖的组合、羧甲基 壳聚糖和羟乙基淀粉的组合等，其他任意的组合方式均可选择，在此便不再一一赘述。 5 CN 111544373 A 说　明　书 3/11 页 优选地，所述保湿剂包括丙二醇和/或甘油。 优选地，所述头皮吸收促进剂包括月桂氮卓酮、二甲基亚砜或薄荷醇中的任意一 种或至少两种的组合；所述至少两种的组合例如月桂氮卓酮和二甲基亚砜的组合、二甲基 亚砜和薄荷醇的组合等，其他任意的组合方式均可选择，在此便不再一一赘述。 优选地，所述抗氧剂包括柠檬酸、酒石酸或抗坏血酸中的任意一种或至少两种的 组合，所述至少两种的组合例如柠檬酸和酒石酸的组合、酒石酸和抗坏血酸的组合等，其他 任意的组合方式均可选择，在此便不再一一赘述。 另一方面，本发明提供一种如上所述的含有毛乳头细胞来源外泌体的生发液的制 备方法，所述制备方法包括如下步骤： (1)将毛乳头细胞来源外泌体纳米粒、稳定剂、保湿剂、头皮吸收促进剂和水混合， 搅拌，得到混合液； (2)将步骤(1)得到的混合液与抗氧剂混合，搅拌，得到所述含有毛乳头细胞来源 外泌体的生发液。 优选地，步骤(1)所述搅拌在4-10℃(例如4℃、5℃、6℃、7℃、8℃、9℃或10℃等)下 进行，搅拌的时间为30-50min(例如30min、35min、40min、45min或50min等)，搅拌的速度为 200-400r/min(例如200r/min、250r/min、300r/min、350r/min或400r/min等)；上述数值范 围内的具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。 优选地，步骤(2)所述搅拌是指先在15-25℃(例如15℃、18℃、20℃、22℃或25℃ 等)下搅拌10-15min(例如10min、11min、12min、13min、14min或15min等)，再升温至70-80℃ (例如70℃、72℃、75℃、78℃或80℃等)下搅拌25-40min(例如25min、30min、35min或40min 等)，搅拌的速度为600-800r/min(例如600r/min、650r/min、700r/min、750r/min或800r/ min等)。上述数值范围内的具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。 在本发明中，步骤(1)所述毛乳头细胞来源外泌体纳米粒的制备方法包括如下步 骤： (Ⅰ)将毛乳头细胞来源外泌体经冷冻干燥制成毛乳头细胞来源外泌体粉末； (Ⅱ)将步骤(Ⅰ)得到的毛乳头细胞来源外泌体粉末与碳酸二辛酯混合，制成油相 溶液；将甘草甜素、椰油酰胺基丙基甜菜碱和水混合，制得水相溶液； (Ⅲ)将步骤(Ⅱ)制得的油相溶液与水相溶液混合，并进行高速剪切乳化，制得初 乳； (Ⅳ)将步骤(Ⅲ)制得的初乳进行高压乳化，冷却，干燥，得到所述毛乳头细胞来源 外泌体纳米粒。 优选地，步骤(Ⅱ)所述毛乳头细胞来源外泌体粉末在碳酸二辛酯中的浓度为20- 30mg/mL，例如20mg/mL、22mg/mL、25mg/mL、28mg/mL或30mg/mL等，上述数值范围内的具体点 值均可选择，在此便不再一一赘述。 优选地，步骤(Ⅱ)所述甘草甜素在水中的浓度为3-5mg/mL，例如3mg/mL、3.5mg/ mL、4mg/mL、4.5mg/mL或5mg/mL等，上述数值范围内的具体点值均可选择，在此便不再一一 赘述。 优选地，步骤(Ⅱ)所述椰油酰胺基丙基甜菜碱在水中的浓度为1-3mg/mL，例如 1mg/mL、1.5mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL或3mg/mL等，上述数值范围内的具体点值均可选择，在 6 CN 111544373 A 说　明　书 4/11 页 此便不再一一赘述。 优选地，步骤(Ⅲ)所述油相溶液与水相溶液的体积比为1:(3-7)，例如1:3、1:4、1: 5、1:6或1:7等，上述数值范围内的具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。 优选地，步骤(Ⅲ)所述高速剪切乳化的转速为1500-2000r/min，例如1500r/min、 1600r/min、1700r/min、1800r/min、1900r/min或2000r/min等，时间为30-40min，例如 30min、32min、35min、38min或40min等，上述数值范围内的具体点值均可选择，在此便不再 一一赘述。 优选地，步骤(Ⅳ)所述高压乳化的温度为40-50℃，例如40℃、42℃、45℃、48℃或 50℃等，压力为800-1000bar，例如800bar、850bar、900bar、950bar或1000bar等，上述数值 范围内的具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。 作为本发明的优选技术方案，所述含有毛乳头细胞来源外泌体的生发液的制备方 法具体包括如下步骤： (1)将毛乳头细胞来源外泌体经冷冻干燥制成毛乳头细胞来源外泌体粉末； (2)将步骤(1)得到的毛乳头细胞来源外泌体粉末与碳酸二辛酯混合，所述毛乳头 细胞来源外泌体粉末在碳酸二辛酯中的浓度为20-30mg/mL，制成油相溶液； (3)将甘草甜素、椰油酰胺基丙基甜菜碱和水混合，所述甘草甜素在水中的浓度为 3-5mg/mL，所述椰油酰胺基丙基甜菜碱在水中的浓度为1-3mg/mL，制得水相溶液； (4)将制得的油相溶液与水相溶液以体积比为1:(3-7)混合，并进行高速剪切乳 化，转速为1500-2000r/min，时间为30-40min，制得初乳； (5)将步骤(4)制得的初乳进行高压乳化，温度为40-50℃，压力为800-1000bar，冷 却，干燥，得到毛乳头细胞来源外泌体纳米粒； (6)将毛乳头细胞来源外泌体纳米粒、稳定剂、保湿剂、头皮吸收促进剂和水混合， 在4-10℃下搅拌30-50min，搅拌的速度为200-400r/min，得到混合液； (7)将步骤(6)得到的混合液与抗氧剂混合，先在15-25℃下搅拌10-15min，再升温 至70-80℃下搅拌25-40min，搅拌的速度为600-800r/min，得到所述含有毛乳头细胞来源外 泌体的生发液。 相对于现有技术，本发明具有以下有益效果： 本发明所涉及的生发液以毛乳头细胞来源的外泌体纳米粒为主要功效成分，搭配 以稳定剂、保湿剂、头皮吸收促进剂、抗氧剂，各成分科学合理搭配，能使毛乳头细胞来源外 泌体纳米粒的功效最大化。本发明先将外泌体冻干成粉末再将其制备成纳米颗粒应用于生 发液中，正常使用就能获得较高的透皮率、较好的稳定性和技术效果，其中稳定剂和头皮吸 收促进剂的添加，能与毛乳头细胞来源的外泌体纳米颗粒在增加透皮率和稳定性方面产生 协同增效效果。该生发液能够促进毛母质细胞的增殖活性和迁移活性，能够显著改善脱发 严重患者的头油感和脱发现象，促进新生头发的生长。使用本发明所涉及的产品最快15天 脱发处即可长出新生头发，第60天平均脱发量为84根，头油感第7天得到明显改善。与现有 技术常用的药物米诺地尔相比具有相当或者更好的功效，且生物安全性很高。 附图说明 图1是分离得到的人头皮毛乳头细胞的显微观察图(标尺为500μm)； 7 CN 111544373 A 说　明　书 5/11 页 图2是提取到的人头皮毛乳头细胞外泌体的扫描电镜图(标尺为50nm)。