技术摘要：
本发明公开一种中华冀土鳖虫来源的具有降血脂功能的活性肽及其制备方法和应用。本发明所述的活性肽氨基酸序列为LAPAPGTL。本发明提供的活性肽具有降血脂功能，可以开发成药物或保健品。
背景技术：
高血脂是目前常见的心血管疾病，随着人民生活水平的提高，高热量与高脂肪饮 食使得高血脂的发病率持续增高。高血脂存在很多并发症，例如脂肪肝、动脉粥样硬化、糖 尿病等，因此对高血脂的防治与治疗是目前研究的热点之一。 土鳖虫为传统中药，具有破血逐瘀，续筋接骨之功效，用于跌打损伤，筋伤骨折，血 瘀经闭，产后瘀阻腹痛，瘾瘕痞块。现代研究得出土鳖虫具有治疗血脑血管疾病的作用，例 如动脉粥样硬化、高血脂、脑血栓等。 目前对于中药动物药研究是中药基础研究的一大热点，而且取得了很大的进展， 例如在水蛭中发现具有防凝血的水蛭素，在地龙体内发现具有溶栓作用的蚓激酶，这些研 究发现中药动物药发挥药理作用的物质基本为蛋白质，对土鳖虫蛋白质进行研究得出土鳖 虫蛋白具有促进血栓溶解、扩张血管、消除自由基的作用。 蛋白质多为100K或更大分子量的物质，口服后多经过胃蛋白酶、胰蛋白酶等胃肠 道蛋白酶作用成小分子多肽被吸收进入人体，发挥药理作用。所以蛋白质存在吸收效率低、 过敏等缺点。 本发明采用胃蛋白酶和胰蛋白酶在体外对土鳖虫进行仿生酶解来模拟蛋白质在 体内的消化，这样使得大分子蛋白在体外既可以被裂解为多肽，增加吸收效率。分解后的多 肽采用超滤、纳滤、大孔树脂、凝胶分子筛色谱进行分离，得到具有活血化瘀功能的多肽单 体，多肽单体纯度高，安全有效；消除了服用异蛋白等引起的免疫原反应，减小了不良反应 发生率。
技术实现要素：
本发明的第一个目的在于提供一种中华冀土鳖虫来源的活性肽。 本发明的第二个目的在于提供上述活性肽制备方法 本发明的第三个目的在于提供上述活性肽在制备预防或治疗降血脂的药物或保 健品中的应用。 为达到上述目的，本发明采用下述技术方案： 第一方面，本发明提供一种中华冀土鳖虫来源的活性肽，所述活性肽的氨基酸序 列为LAPAPGTL，如SEQ ID NO:1所示。 可选的，所述活性肽还可以是与上述活性肽的氨基酸序列具有80％及以上同源性 的活性肽，该活性肽和上述活性肽的功能相同或相似。例如，所述活性肽的氨基酸序列可以 是与上述活性肽的氨基酸序列具有85％，90％，95％或97％同源性的序列。 3 CN 111574586 A 说 明 书 2/6 页 本发明还提供了编码上述活性肽的多核苷酸。 在已知活性肽的氨基酸序列的情况下，本领域技术人员可以根据对于活性肽表达 的需要，基于密码子的简并性原则和不同物种对于密码子的使用偏好性，设计具有不同核 苷酸序列的活性肽的编码基因。 在本发明中，示例性的，上述活性肽的核苷酸序列为 ATGCTGGCACCAGCGCCGGGTACCCTG，如序列表SEQ ID NO:2所示。 第二方面，本发明提供了一种上述中华冀土鳖虫来源的活性肽的制备方法，包括 如下步骤： (1)将中华冀土鳖鲜虫体加入8-10倍重量份的去离子水或者蒸馏水进行剪切，制 成土鳖虫浆液，剪切时间为10-20min，剪切速率为5000转/分钟，剪切温度为室温； (2)将土鳖虫浆液加热至100℃杀菌15min，然后放冷至37℃，调节浆液pH值至2.5， 加入胃蛋白酶进行酶解，酶解时间为45min-80min，酶解温度为37℃；然后再调节浆液的pH 值至8.5，加入胰蛋白酶进行酶解，酶解时间为180min-300min，酶解温度为37℃，制得土鳖 虫仿生酶解液；其中，按土鳖虫浆液重量计，胃蛋白酶的加入量为1.5％-2.5％，胰蛋白酶的 加入量为1.5％-2.5％； (3)用DA201-C树脂柱对步骤(2)制得的土鳖虫仿生酶解液进行吸附层析，DA201-C 树脂重量与土鳖虫仿生酶解液体积比例为5:1-10:1，吸附完毕后采用25％乙醇进行洗脱； 制得洗脱液A； (4)用葡聚糖G25凝胶柱对步骤(3)制得的洗脱液A进行分子筛层析，每次洗脱液A 的加入量为0.5-2ml，用去离子水洗脱，制得洗脱液B； (5)将步骤(4)制得的洗脱液B经过RP-HPLC进行组分分离，采用的色谱条件为色谱 柱：waters ZOBRX-300SB C18色谱柱，150mm X 4 .6um，检测器为紫外检测器，检测波长： 220nm、280nm，流动相：A相0.1％三氟乙酸去离子水溶液(TFA)，B相0.1％三氟乙酸(TFA)乙 腈溶液；采用梯度洗脱方法进行分析，梯度顺序：0-55min 90％A-30％A；55-60min 30％A- 60％A；60-75min60％A-90％A； (6)经RP-HPLC分离后的各组分样品进行降血脂活性筛选，对活性最强的组分样品 进行氨基酸序列分析，即得。 上述方法中，优选的，所述胃蛋白酶的酶活力不低于1500U/g，胰蛋白酶的酶活力 不低于2500U/mg，胰蛋白酶的酪蛋白转化力不低于30.0。 在本发明的
