技术摘要：
本发明提供一种简单芽孢杆菌（Bacillus simplex）SX‑GL4，所述简单芽孢杆菌（Bacillus simplex）SX‑GL4于保藏日期是2019年11月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号码是CGMCC No.18952；本发明的有益效果是：简单芽孢杆菌的新种，研究发现 全部
背景技术：
自然界中有许多微生物都能够产生淀粉酶，如根霉、曲霉、芽孢杆菌等。 淀粉酶是 水解淀粉和糖原的酶类总成，本着营养、健康、安全的宗旨，低温 淀粉酶非热加工已经成为 一种新型果蔬加工技术，具有减少营养损失、降低 损耗和保持新鲜度等优点，能够提高果 蔬加工产品品质，便于生产过程的控 制和食品安全监控。 低温淀粉酶一般来源与低温微生物，通常情况下，在相对较低温范围内， 低温淀 粉酶的活性比相应的嗜温淀粉酶要高。现有技术中，研究的酶多为中 高温淀粉酶，这些酶 在较高温度下才具有较好的催化活性，耗费能量较多， 如果采用低温淀粉酶则可以节约能 量，降低生产成本，生产前景广阔。同时， 研究新的产低温淀粉酶的菌株能够扩大微生物资 源库，增加生物的多样性。
技术实现要素：
本发明克服了现有技术中的不足，目的是提供了一种简单芽孢杆菌 (Bacillus simplex)以及简单芽孢杆菌(Bacillus simplex)能够生产低温淀粉 酶的应用。 本发明的目的通过下述技术方案予以实现。 一种简单芽孢杆菌(Bacillus simplex)SX-GL4，所述简单芽孢杆菌(Bacillus simplex)SX-GL4于保藏日期是2019年11月15日，保藏于中国微生物菌种 保藏管理委员会 普通微生物中心，保藏号码是CGMCC No.18952。 本发明还提供了一种简单芽孢杆菌用于生产低温淀粉酶的应用。 进一步，所述简单芽孢杆菌(Bacillus simplex)SX-GL4的低温淀粉酶的 酶活力 测定方法，包括： 配置反应试剂，所述反应试剂包括：柠檬酸-磷酸二氢钠缓冲液、淀粉 溶液、粗酶 液以及蒸馏水； 将反应试剂混合均匀，室温反应10min，将所述反应试剂与碘液混匀测 定OD620值； 将所述OD620值代入工作曲线，计算剩余淀粉含量，求得酶活力，其中， 反应淀粉量 (mg)＝8mg-剩余淀粉含量(mg)。 进一步，所述柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液的配置步骤为： 称取柠檬酸(含2水)21 .01g，溶于1000mL蒸馏水中，备用；称取无 水磷酸氢二钠 28.40g，溶于1000mL蒸馏水中，备用；取0.1moL/L柠檬酸溶 液7.37mL和0.2moL/L磷酸氢二 钠溶液12.63mL混合。 进一步，所述粗酶液的配置步骤为： 将所述简单芽孢杆菌(Bacillus simplex)SX-GL4菌株接入100ml种子培 养液，20 3 CN 111592999 A 说 明 书 2/7 页 ℃、140r/min条件下培养2d，得到种子液； 按0.2％-17％接种量将种子液加到发酵培养液中，20℃、140r/min条件 下培养 2d，0.22μm微孔滤膜过滤除菌，滤液为所述粗酶液。 进一步，所述简单芽孢杆菌(Bacillus simplex)SX-GL4的最佳碳源为麦 芽糖。 进一步，所述简单芽孢杆菌(Bacillus simplex)SX-GL4的最适氮源为复 合氮源， 所述复合氮源为牛肉膏和蛋白胨，其中，牛肉膏和蛋白胨比例为1:1。 进一步，所述简单芽孢杆菌(Bacillus simplex)SX-GL4的最适接种量为 1％。 进一步，所述简单芽孢杆菌(Bacillus simplex)SX-GL4的发酵培养液的 配方为： 芽糖7.15g，蛋白胨5g，牛肉膏5g，MgSO4·7H2O 0.05g，FeSO4·7H2O 0.01g，NaCl 3g，蒸馏水 1000mL。 进一步，所述发酵培养液配置完成后，置于121℃、1×105Pa条件下 灭菌30min。 本发明中的简单芽孢杆菌(Bacillus simplex)SX-GL4在忻州市五台县豆 村镇非 耕作土壤采集到菌株后，经过分离，通过16S rDNA鉴定发现该菌株 属于简单芽孢杆菌属， 发明人经过实验发现该菌株能够产生低温淀粉酶，该 菌株的发现不仅丰富了简单芽孢杆 菌属下菌株的种类，同时也丰富了产品剂 型、从而为农作物生产提供产品保障。 另外，本发明中简单芽孢杆菌(Bacillus simplex)SX-GL4所产低温淀粉 酶的最 适反应温度为15℃，温度超过50℃将会严重影响酶的催化效率，最 适pH为8，Ca2 、紫外线、 三氯甲烷对酶活力无影响，Fe2 、Cu2 、Mg2 、K 、 Na 、甲醇、二甲苯、乙酸和石油醚等对酶活力 的影响尚在可控范围。淀粉酶 是一类非常重要的工业用酶，已广泛应用于食品、医药、洗 涤、环保、纺织 等各个方面，该低温淀粉酶适应低温及偏碱性环境的特性，在食品和洗涤行 业具有非常大的应用潜力。 附图说明 图1是本发明菌株的16S rDNA序列的系统进化发育树分析图； 图2为本发明菌株产酶最适碳源的筛选； 图3为本发明菌株最适碳源浓度的确定； 图4为本发明菌株产酶最适氮源的筛选； 图5为本发明菌株产酶最适接种量的测定； 图6为本发明菌株产酶培养液初始pH对酶活力的影响； 图7为培养温度对本发明菌株产酶的影响； 图8为催化温度对本发明菌株产酶的影响； 图9为催化pH对本发明菌株的低温淀粉酶的影响； 图10为本发明菌株的生长曲线； 图11为本发明所产低温淀粉酶的生产曲线； 图12为本发明菌株所产低温淀粉酶的热稳定性； 图13为紫外线对本发明菌株所产低温淀粉酶稳定性的影响； 图14为金属离子对本发明菌株所产低温淀粉酶活力的影响； 图15为有机溶剂对本发明菌株所产低温淀粉酶活力的影响。 4 CN 111592999 A 说 明 书 3/7 页
