技术摘要：
本发明公开了一种根际假河杆菌烟草发酵物的制备方法，包括以下步骤：①将根际假河杆菌C1‑9菌种活化；②制备根际假河杆菌C1‑9种子培养液；③利用根际假河杆菌C1‑9对烟草进行发酵，得到烟草发酵液；④提取烟草发酵液，得到根际假河杆菌烟草发酵物。本发明还公开了所述  全部
背景技术：
香精香料在食品、饲料、化妆品、化工和制药等工业上具有重要地位，其来  源主要 包括天然与化学合成两种方式。其中，化学合成的香精香料约占整个产品 的85％，但化学 合成的香精香料具有副产物多、产率低、高成本、污染环境等缺  点。随着绿色工业的倡导， 天然香精香料越来越被人们看重，天然香精香料主要  来源于动物和植物，但动物、植物香 料资源有限，提取成本高，远远满足不了日  益增长的市场需求。微生物制备的香料是以天 然原料为起始物，使用发酵技术、  酶技术等产生的香料，也属于天然香料；且微生物制备的 香料具有生产周期短，  不受气候影响，反应条件温和，产品分离后形成的“三废”少，对环境 友好等多  种优越性，使其可成为产香植物的替代者。 烟草行业是重要的消费品制造行业，通过降焦减害提高卷烟的安全性已成为  烟 草行业的共同目标。但随着降低卷烟焦油量的下降，卷烟香气成分不足的问题  也越发凸 显。为弥补卷烟香气和吃味，添加烟用香精香料已成为完善产品风格的 决定性因素和提高 卷烟香气质量的一个有效手段。获取风格特征各异，且具有良  好安全性能的烟用香精香料 也成为了烟草制品研发的重要方向之一。 烟用香精香料按照来源，分为来自烟草本身的香料、非烟草的天然香料和人  工合 成的香料。通过微生物制备的天然香料是近年来新兴的烟用香料的原料来源  之一，通过微 生物制备的微生物香料具有原料易得，条件温和、选择性高等优势。  但目前能用于微生物 产香的优势菌株种类并不多，所以筛选并使用新的菌株用于  烟草发酵制备烟用香精香料 具有现实的意义。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种根际假河杆菌烟草发酵物、其制备方法及用途。  本发 明的根际假河杆菌烟草发酵物制备方法是利用具有产香功能的微生物根际  假河杆菌C1-9 对烟草进行发酵处理，再经加热回流提取、乙醇回溶等制备工艺得  到根际假河杆菌C1-9发 酵物，其致香成分种类和含量明显提高，将其用于烟丝中，  具有丰富卷烟烟香、使烟草香韵 突出饱满、增强卷烟风格特征的作用。 本发明的技术方案如下： 除非另有说明，本发明中所采用的百分数均为质量百分数。 本发明第一方面公开了一种根际假河杆菌烟草发酵物的制备方法，包括以下  步 骤： ①将根际假河杆菌C1-9菌种活化； ②制备根际假河杆菌C1-9种子培养液； 3 CN 111575321 A 说　明　书 2/6 页 ③利用根际假河杆菌C1-9对烟草进行发酵，得到烟草发酵液； ④提取步骤③的烟草发酵液，得到所述的根际假河杆菌烟草发酵物。 优选地，步骤①根际假河杆菌C1-9菌种活化具体步骤为：将培养基在121℃  下灭 菌25分钟，摆成斜面，接种根际假河杆菌C1-9菌株，28℃下培养1周，获得  试管菌种；所述培 养基为R2A琼脂培养基。 优选地，步骤②制备根际假河杆菌C1-9种子培养液具体步骤为：将种子培  养基在 121℃下灭菌25分钟，从斜面培养上挑取部分步骤①得到的菌丝体接入  种子液中，30℃震 荡培养48h，获得种子培养液；所述种子培养基为R2A液体  培养基。 优选地，步骤③的发酵步骤为：将烟草粉碎成烟末，加水混合均匀；然后向  其中加 入糖源和无机盐，在121℃下灭菌25分钟，按烟末重量的5％～20％接种  步骤②得到的根际 假河杆菌C1-9种子培养液，30℃震荡培养进行发酵，发酵时间  24～48h，得到烟草发酵液。 烟草可以为烟叶或叶梗。 优选地，所述糖源为葡萄糖、乳糖、果糖中的一种或多种的混合物，其加入  量为混 合液的1.0wt％～5.0wt％。 优选地，所述无机盐为KH2PO4、(NH4)2SO4、MgSO4、Fe3(SO4)2、NaCl、CaCl2中一种或多 种的混合物，其加入量为混合液0.1wt％～2.0wt％。 优选地，步骤④提取烟草发酵液的步骤为：将步骤③得到的烟草发酵液在60  ～80 ℃条件下加热回流提取2～4h，然后在过滤目数为150～250目的条件下抽滤，  所得滤液在 45～60℃、60～100kPa条件下浓缩，得到烟草发酵浓缩提取液；向得  到的烟草发酵浓缩提 取液中加入其3～5倍质量的85wt％～95wt％乙醇，混合后置  于-10℃冷冻条件下沉降8～ 12h，得到上层清液和沉淀物；取上层清液在45～65℃、  60～90kPa条件下浓缩至密度为1.0 ～1.5g/cm3，即得到所述的根际假河杆菌烟草 发酵物。 本发明第二方面公开了所述的制备方法制得的根际假河杆菌烟草发酵物。 本发明第三方面公开了所述的根际假河杆菌烟草发酵物用于提升卷烟抽吸 品质 的用途。 优选地，将所述根际假河杆菌烟草发酵物用丙二醇或乙醇稀释3～5倍质量  后，以 喷雾的方式喷洒到卷烟烟丝上；所述根际假河杆菌烟草发酵物的添加量为  卷烟烟丝质量 0.2～0.5wt％。 本发明的微生物根际假河杆菌C1-9，其是从云南会泽烟草根际土壤中分离  得到 的，对其进行了形态学、生理生化性质和16S  rDNA分析，鉴定结果表明其  是一个新的菌种， 微生物学分类命名为根际假河杆菌(拉丁文名称：Rivibacter  sp.)，  参椐的生物材料(株) 为：C1-9，已于2019年8月9日在中国微生物菌种保藏  管理委员会普通微生物中心(简称： CGMCC)保藏，保藏编号为CGMCC No.1.13864，保藏单位为：中国科学院微生物研究所，保藏 地址为：北京市朝阳 区北辰西路1号院3号。 本发明的根际假河杆菌C1-9菌株的主要形态特征和生理生化性质特征为：  在大 多数培养基上生长良好，在R2A琼脂培养基上，菌落边缘整齐，中间凸起，  呈浅黄色；淀粉水 解、纤维素水解，过氧化氢酶、酸性磷酸酶、胰蛋白酶、吐温  20，40，60和80水解呈阳性，氧化 酶，酪蛋白水解，α-半乳糖苷酶、脲酶呈阴  性。能利用果糖、乳糖、柠檬酸、纤维二糖、岩藻 糖、甜醇、蜜二糖、丙氨酸、  精氨酸、天冬氨酸。细胞膜的极性脂成分主要包括磷脂酰甘油、 4 CN 111575321 A 说　明　书 3/6 页 双磷脂酰甘油和  磷脂酰乙醇胺，细胞的呼吸醌为泛醌-8(Q-8)。 本发明具有以下有益效果： 1、本发明首次利用微生物新菌种根际假河杆菌C1-9对烟草进行发酵，得到  的根 际假河杆菌烟草发酵物中致香成分种类和含量明显提高；将其应用于卷烟烟  丝中，具有丰 富卷烟烟香、使烟草香韵突出饱满、增强卷烟风格特征的作用。本  发明的根际假河杆菌烟 草发酵物应用于卷烟中能显著提升卷烟抽吸品质。 2、本发明的根际假河杆菌烟草发酵物的制备过程无有害的有机溶剂引入，  制备 工艺安全环保，且原料易得，成本低廉，便于实现工业化生产。本发明的根 际假河杆菌烟草 发酵物的制备方法具有良好的应用价值。 附图说明 图1为实施例1所制得的根际假河杆菌烟草发酵物的GC-MS图谱。 图2为实施例2所制得的对照烟草提取物的GC-MS图谱。