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慢病毒感染人表皮角质细胞株及其构建方法和应用


技术摘要:
本发明公开了一种shRNA片段。本发明还公开了一种含有所述的shRNA的重组质粒。本发明还公开了一种重组菌株。本发明还公开了一种重组质粒的构建方法和重组菌株的构建方法。本发明的细胞株遗传稳定性强,经过30次以上传代仍保留转入基因不发生丢失;本发明对于PPP2CA的敲  全部
背景技术:
角质形成细胞是构成表皮的主要细胞,占到表皮细胞80%以上。研究发现,表皮角 质细胞的增殖过度在许多恶性皮肤疾病包括银屑病中均有发生。诸如:砷中毒及其引起的 皮肤癌前期出现表皮细胞过度增殖以及皮肤异常角质化。银屑病的临床特征同样表现为表 皮角质细胞过度增生,表皮角质形成细胞异常增殖与大量鳞屑的产生相关。目前针对银屑 病的药物治疗手段主要有调节角质形成细胞异常增殖和分化、免疫抑制剂、阻断T细胞活化 和阻断中性粒细胞趋化药物,然而,以上药物治疗手段疗效均较差,且各有显著的副作用, 因此迫切需要进一步探寻参与银屑病发生发展重要的环节、发掘更好的靶分子及其适当的 抑制途径。 磷酸化修饰是调节蛋白活性、稳定性的重要生物事件,对于维持机体生理活动具 有重要意义。机体蛋白的磷酸化稳态调控主要是由各种磷酸酶和激酶共同调节。丝苏氨酸 磷酸酶2A(PP2A)是人体细胞中占比最高的磷酸酶,主要是针对特定的Ser/Thr进行去磷酸 化的蛋白酶,在真核细胞中大部分的Ser/Thr位点的去磷酸化是由PP2A所催化的。目前的研 究已经证明PP2A参与多种蛋白的合成、信号通路的传导、细胞代谢、细胞周期以及细胞骨架 的形成等生命活动,更多的研究表明PP2A在肿瘤的发生和转移过程中发挥重要的作用,通 常被作为一种抑癌基因进行研究。PP2A全酶是由结构亚基A(65kD)、调节亚基B(50-130kD) 和催化亚基C(36kD)构成的异三聚体。PP2A催化亚基C又具有2种亚型,分别是PP2Acα(由 PPP2CA基因编码)和β(由PPP2CB基因编码)。C亚基的α亚型占比远高于β亚型(约9倍以上), PPP2CA基因具有维持PP2A全酶活性的重要作用。在肿瘤以及退行性神经疾病的相关研究中 发现:PP2A在细胞的增殖、凋亡以及细胞命运的调控中扮演重要的角色,基于PP2A维持机体 磷酸化稳态的重要功能,PP2A在其他疾病中的研究仍需要更加深入。 针对在许多严重恶性皮肤疾病比如:皮肤癌、银屑病等,表皮角质细胞细胞的异常 增殖、凋亡、细胞周期的紊乱是一个典型的病理特征,未来此领域仍有需要更加深入的研 究。基于PP2A在调控细胞命运中所扮演的重要角色,结合目前PP2A在皮肤中的研究仅少量 存在于临床报道和动物模型,缺乏离体细胞模型进行深入研究的现状。
技术实现要素:
发明目的:为了解决
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