技术摘要：
本发明涉及利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞(IFNγ‑iMSC)的生产方法、包含通过上述方法制备的利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞、其培养物或从其分离的外泌体(IFNγ‑iMSC‑exo)作为有效成分的用于预防或治疗皮肤疾病的药剂  全部
背景技术：
以特异性湿疹周知的特应性皮炎(Atopic  dermatitis，AD)为常见的炎症性皮肤 疾病，众所周知，在全球范围内，在5～20％的儿童中发病。据报告，急性特异性皮炎的发病 机制与将以CD4 T细胞及嗜酸性粒细胞的皮肤渗透、免疫球蛋白E(IgE)及Th2细胞因子的分 泌增加作为介导的Th2炎症反应相关。对于特异性皮炎，目前为止没有周知的直接具体治疗 方法，急需研发用于治疗特异性皮炎的新的治疗方法。 间充质干细胞(mesenchymal  stem  cells)为具有可分化为骨、软骨及脂肪等的多 能性的高增殖性的附着性细胞，以具有抗炎症及免疫调节能力而周知。间充质干细胞具有 如T细胞和B细胞的增殖及分化抑制、树突状细胞(dendritic  cell)、自然杀伤(natural  killer，NK)细胞及巨噬细胞(macrophage)的免疫细胞的功能抑制等免疫抑制效果。最近， 据报告，具有将间充质干细胞与造血干细胞一同移植来增加造血干细胞的移植存活率的研 究，在移植物抗宿主病(graft-versus-host  disease，GVHD)、胶原诱导性关节炎 (collagen-induced  arthritis，CIA)、实验性变态反应性脑脊髓炎(experimental  autoimmune  encephalomyelitis，EAE)、系统性红斑狼疮(systemic  lupus  erythematosus，SLE)、败血症、急性胰腺炎(acute  pancreatitis，AP)、大肠炎、多发性硬化 症(multiple  sclerosis，MS)及类风湿性关节炎等的疾病中，间充质干细胞减少炎症并抑 制自身免疫性过度反应。 外泌体(Exosome)为由脂质双层构成的囊泡(vesicle)，为向细胞外分泌细胞的物 质的结构体。为了执行细胞间通讯(cell-cell  communication)及干预细胞性免疫的功能 性作用，外泌体起到输送(搬运)作为细胞中的生物分子的蛋白质、生物活性脂质及核糖核 酸(RNA)(miRNA)的作用。这种外泌体还作为阿尔茨海默病等神经疾病的生物标记被研究， 选择性渗透性高，能够透射分离脑脊髓液和血液的血脑屏障(blood-brain  barrier，BBB)， 3 CN 111601881 A 说　明　书 2/15 页 因此，还用于研发如特定药物的纳米载体(nanocarrier)的药物传递系统。 另一方面，从间充质干细胞分泌的外泌体参与细胞间通讯，具有干细胞所具有的 再生医学治疗功效，最近，积极进行如下的研究，即，不使用间充质干细胞本身，利用间充质 干细胞所分泌的外泌体的多种疾病的治疗效果。 本发明人努力研究研发利用间充质干细胞及其外泌体的特应性皮炎治疗剂。结 果，相比于现有的间充质干细胞，利用干扰素γ(IFN-γ)预处理的来源于诱导多能干细胞 (induced  pluripotent  stem  cell，iPSC)的间充质干细胞(mesenchymal  stem  cell，MSC) [IFNγ-iMSC]具有得到改善的抗炎活性，查明了上述利用干扰素γ预处理的诱导多能干细 胞来源的间充质干细胞及其外泌体(IFNγ-iMSC-exo)具有皮肤疾病的改善效果，从而完成 了本发明。
技术实现要素：
技术问题 本发明的目的在于，提供利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干 细胞[IFNγ-iMSC]的生产方法。 本发明的再一目的在于，提供利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充 质干细胞。 本发明的另一目的在于，提供利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充 质干细胞和/或来源于其的外泌体(IFNγ-iMSC-derived  exosome，IFNγ-iMSC-exo)的用 于预防或治疗皮肤疾病的药剂学组合物。 本发明的还有一目的在于，提供包含利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源 的间充质干细胞和/或来源于其的外泌体的用于预防或改善皮肤疾病的化妆品组合物。 本发明的又一目的在于，提供从利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间 充质干细胞或其培养物中分离的外泌体。 本发明的又一目的在于，提供从利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间 充质干细胞分离的外泌体的生产方法。 本发明的又一目的在于，提供包含利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的 间充质干细胞和/或利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞外泌体的 干细胞治疗剂。 技术方案 根据本发明的一实施方式，本发明提供利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来 源的间充质干细胞的生产方法，包括在包含干扰素γ的细胞培养基中培养诱导多能干细胞 来源的间充质干细胞(iMSC)的步骤。 本发明人努力研发抗炎活性得到强化的间充质干细胞。结果，确认相比于现有的 间充质干细胞，利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞具有得到改善 的抗炎活性，利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞及其外泌体具有 皮肤疾病的改善效果。 在本说明书中，术语“诱导多能干细胞”是指如下的细胞，即，在如体细胞的已分化 的细胞诱导脱分化(dedifferentiation)，返回至初始的未分化的状态，从而具有多能性 4 CN 111601881 A 说　明　书 3/15 页 (pluripotency)。上述脱分化可通过导入特定基因(例如，Sox2，c-Myc，Klf4，Oct-4等)来表 达或注入在导入特定基因的上述细胞制备的脱分化诱导蛋白来诱导。上述多能性为能够分 化为起源于构成生物体的3种胚层(germ  layer)，即，内胚层(endoderm)、中胚层 (mesoderm)及外胚层(ectoderm)的组织或器官的能力。 本发明的诱导多能干细胞包含来源于人、猴、猪、马、牛、羊、狗、猫、鼠、兔等所有哺 乳动物的诱导多能干细胞，优选地，为来源于人的诱导多能干细胞。 在本说明书中，术语“间充质干细胞”是指具有能够分化为脂肪、软骨、骨、肌肉、皮 肤、神经等的细胞的多能性(multipotent)的干细胞。上述间充质干细胞可从诱导多能干细 胞分化或从骨髓、脂肪组织、脐带组织、脐带血、骨骼肌、外周血、润滑膜、羊水等分离。 在本说明书中，术语“诱导多能干细胞来源的间充质干细胞”是指从诱导多能干细 胞分化的间充质干细胞。 在本发明的一实例中，相比于从体内(例如，骨髓、脂肪组织、脐带组织、脐带血、骨 骼肌、外周血、润滑膜、羊水等)分离的间充质干细胞，上述诱导多能干细胞来源的间充质干 细胞具有如下的特征，即，(i)吲哚胺2，3-双加氧酶(indoleamine  2，3-dioxygenase)的表 达增加，(ii)炎症细胞因子的分泌减少。 上述炎症细胞因子为选自由白细胞介素19(IL-19)、白细胞介素22(IL-22)、白细 胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)及白细胞介素6Rα(IL-6Rα)组成的组中的至少一种 炎症细胞因子。 在本说明书中，术语“外泌体”是指向细胞外分泌细胞或具有由存在于细胞中的脂 质双层构成的膜结构的膜囊(membrane  vesicle)，存在于几乎所有真核生物的体液。外泌 体的直径为30～1000nm左右，当多泡体(multivesicular  bodies)与细胞膜融合时，从细胞 释放或直接从细胞膜释放。为了执行凝固、细胞间通讯及仲裁细胞性免疫的功能性作用，外 泌体起到输送作为细胞中的生物体分子的蛋白、生物体活性脂质及核糖核酸(miRNA)的作 用。在本发明中，上述外泌体为包括微泡(microvesicle)的概念。外泌体的标记蛋白有 CD63、CD81等，除此之外，还有如表皮生长因子受体(EGFR)的细胞表面的受体、与信号传递 相关的分子、与细胞附着相关的蛋白、与间充质干细胞(MSC)相关的抗原、热激蛋白(heat  shock  protein)、与囊泡形成相关的Alix等的蛋白。 在本发明的一实例中，上述诱导多能干细胞来源的间充质干细胞为在细胞外基质 包被的培养容器中培养并分化诱导多能干细胞的间充质干细胞。 在本说明书中，术语“细胞外基质(extracellular  matrix)”是指如下的物理环 境，即，储存细胞生长且分化所需的生化因子(biochemical  factors)，在适当地供给的同 时细胞可识别。 在本发明的一实例中，上述细胞外基质为细胞外基质蛋白。 在本发明的另一实例中，上述细胞外基质蛋白包括玻连蛋白(vitronectin)、纤连 蛋白(fibronectin)、层粘连蛋白(laminin)、弹性蛋白(elastin)、胶原蛋白(collagen)等， 但并不限定于此。 在本发明的特定实例中，上述细胞外基质蛋白为玻连蛋白。 本发明的利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞的生产方 法包括在包含干扰素γ的细胞培养基中培养诱导多能干细胞来源的间充质干细胞的步骤。 5 CN 111601881 A 说　明　书 4/15 页 本发明的在诱导多能干细胞来源的间充质干细胞预处理的干扰素γ (interferon-γ，IFN-γ，IFNγ)为通过活性化的T细胞或NK细胞、CD4及CD8阳性淋巴细胞 生成的细胞因子，上述干扰素γ为分裂促进因子或生长因子，参与包括T淋巴细胞在内的多 种细胞的活性化与增殖分化、提高抗原递呈细胞主要组织相容性复合体(MHC)表达的作用， 在免疫及炎症反应中起到重要作用。 在本说明书中，术语“预处理”是指如下的过程，即，在培养诱导多能干细胞来源的 间充质干细胞的过程中，将添加有干扰素γ的细胞培养基与诱导多能干细胞来源的间充质 干细胞相接触。 本发明的用于生产利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞 的细胞培养基可利用通常利用于培养动物细胞的任一培养基，例如，可利用达尔伯克氏改 良伊格尔氏培养基(DMEM，Dulbecco's  modification  of  Eagle's  medium)、达尔伯克氏改 良伊格尔氏培养基和F12的混合物、Eagle最低基础培养基(Eagles 's  MEM，Eagle 's  minimum  essential  medium)、α-MEM、Iscove's  MEM))、199培养基、CMRL  1066、RPMI  1640、 F12、F10、Way-mouth's  MB752/1、McCoy's  5A及MCDB系列等。 在本发明的一实例中，上述干扰素γ以1ng/ml至100ng/ml的浓度包含于细胞培养 基中。 在本发明的另一实例中，上述干扰素γ以1ng/ml至90ng/ml、1ng/ml至80ng/ml、 1ng/ml至70ng/ml、1ng/ml至60ng/ml、1ng/ml至50ng/ml、1ng/ml至40ng/ml、1ng/ml至30ng/ ml、10ng/ml至90ng/ml、10ng/ml至80ng/ml、10ng/ml至70ng/ml、10ng/ml至60ng/ml、10ng/ ml至50ng/ml、10ng/ml至40ng/ml及10ng/ml至30ng/ml的浓度包含于细胞培养基中。 在本发明的一实例中，上述培养执行6小时至48小时。 在本发明的另一实例中，上述培养执行6小时至42小时、6小时至36小时、6小时至 30小时、6小时至27小时、12小时至48小时、12小时至42小时、12小时至36小时、12小时至30 小时、12小时至27小时、18小时至48小时、18小时至42小时、18小时至36小时、18小时至30小 时、18小时至27小时、21小时至48小时、21小时至42小时、21小时至36小时、21小时至30小时 或21小时至27小时。 根据本发明的再一实施方式，本发明提供利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞 来源的间充质干细胞。 在本发明的一实例中，上述间充质干细胞通过上述利用干扰素γ预处理的诱导多 能干细胞来源的间充质干细胞的生产方法生产。 根据本发明的另一实施方式，本发明提供包含利用干扰素γ预处理的诱导多能干 细胞来源的间充质干细胞或其培养物作为有效成分的用于预防或治疗皮肤疾病的药剂学 组合物。 在本说明书中，术语“培养物”是指在培养基中培养利用干扰素γ预处理的诱导多 能干细胞来源的间充质干细胞而获取的培养液或上述培养液的干燥物、稀释物、过滤物和/ 或浓缩物。上述培养物可包含或不包含诱导多能干细胞来源的间充质干细胞。 在本说明书中，术语“包含……作为有效成分”是指本发明包含利用干扰素γ预处 理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞、其培养物或由此分离的外泌体充分达成皮肤疾 病的改善、预防或治疗活性的充分量。 6 CN 111601881 A 说　明　书 5/15 页 在本说明书中，术语“皮肤疾病”是指在皮肤中发生的非正常状态或症状。 在本发明的一实例中，上述皮肤疾病为炎症性皮肤疾病。上述炎症性皮肤疾病为 示出以免疫细胞介导的炎症反应引起的如发痒、红斑等的的症状的皮肤疾病。 在本发明的另一实例中，上述炎症性皮肤疾病为选自：特应性皮炎、接触性皮炎及 银屑病的皮肤疾病。 在本说明书中，术语“特应性皮炎”是指慢性复发的伴随严重的瘙痒症的皮肤湿疹 疾病，为皮炎的一种。 在本发明中使用的术语“预防”是指通过给药本发明的组合物来抑制皮肤疾病或 疾病或者延迟皮肤疾病或疾病的发展速度的所有行为。 在本说明书中使用的术语“治疗”是指(a)抑制皮肤疾病或疾病的发展；(b)减轻皮 肤疾病或疾病；以及(c)去除皮肤疾病或疾病。 本发明的组合物可制备为药剂学组合物。 根据本发明的优选实例，本发明的组合物为(a)如上所述的本发明的利用干扰素 γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞或其培养物的药剂学有效量；以及(b)包 含药剂学上可接受的载体的药剂学组合物。在本说明书中，术语“药剂学有效量”是指达成 如上所述的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞或其培养物的功效或活性的充分量。 在本发明的组合物制备为药剂学组合物的情况下，本发明的药剂学组合物包含药 剂学上可接受的载体。本发明的药剂学组合物所包含的药剂学上可接受的载体包括通常用 于制剂的乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯树胶、磷酸钙、海藻酸盐、明 胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯、 羟基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸镁及矿物油等，但并不限定于此。除上述成分之外，本发明 的药剂学组合物还可包括润滑剂、保湿剂、甜味剂、调味剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂等。在雷 明登氏药学全书(Remington's  Pharmaceutical  Sciences)(19th  ed .，1995)详细记载了 适合的药剂学上可接受的载体及制剂。 本发明的药剂学组合物可口服给药或肠胃外给药，例如，可通过静脉注射、皮下注 射、肌肉注射、腹腔注射、局部给药、鼻腔给药、肺内给药、直肠内给药、鞘内给药、眼部给药、 皮肤给药及经皮给药等的方法给药。 本发明的药剂学组合物的适合剂量可根据制剂化方法、给药方式、患者年龄、体 重、性别、病态、饮食、给药时间、给药路径、排泄速度及反应灵敏度的因素处方的不同。本发 明的药剂学组合物的常规剂量以成人为基准在0.0001～1000mg/kg的范围以内，但并不限 定于此。 在本发明的一实例中，本发明的药剂学组合物的剂量可以为0.001～1000mg/kg、 0.01～1000mg/kg、0.1～1000mg/kg、1～1000mg/kg、5～1000mg/kg、10～1000mg/kg、20～ 1000mg/kg、30～1000mg/kg、50～1000mg/kg、100～1000mg/kg、0.0001～100mg/kg、0.001～ 100mg/kg、0.01～100mg/kg、0.1～100mg/kg、1～100mg/kg、5～100mg/kg、10～100mg/kg、20 ～100mg/kg、30～100mg/kg或50～100mg/kg，更具体地，可以为1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、 15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg、60mg/ kg、65mg/kg、70mg/kg、75mg/kg、80mg/kg、85mg/kg、90mg/kg、95mg/kg、100mg/kg、150mg/kg、 200mg/kg、250mg/kg、300mg/kg、350mg/kg、400mg/kg、450mg/kg、500mg/kg、750mg/kg或 7 CN 111601881 A 说　明　书 6/15 页 1000mg/kg。 本发明的药剂学组合物可根据本发明所属技术领域的普通技术人员容易实施的 方法利用药剂学上可接受的载体和/或赋形剂来制剂化，从而以单位容量形态制备或向多 容量容器内添加来制备。在此情况下，剂型可以为油介质或水性介质中的溶液、悬浮液、糖 浆剂或乳化液形态或提取剂、散剂、粉末剂、颗粒剂、片剂或胶囊剂形态，还可包括分散剂或 稳定化剂。 根据本发明的还有一实施方式，本发明提供包含利用干扰素γ预处理的诱导多能 干细胞来源的间充质干细胞或其培养物作为有效成分的用于预防或改善皮肤疾病的化妆 品组合物。 本发明的用于预防或改善皮肤疾病的化妆品组合物的有效成分及目标疾病与上 述用于预防或治疗皮肤疾病的药剂学组合物的有效成分及目标疾病相同，因此，为了避免 本说明书过于复杂，将省略两者之间相同的内容的记载。 在本发明中使用的术语“改善”是指通过给药本发明的组合物使皮肤疾病或疾病 好转或变为有利情况的所有行为。 本发明的组合物可制备为化妆品组合物。在包含本发明的利用干扰素γ预处理的 诱导多能干细胞来源的间充质干细胞或其培养物作为有效成分的用于预防或改善皮肤疾 病的组合物制备为化妆品组合物的情况下，除作为有效成分的利用干扰素γ预处理的诱导 多能干细胞来源的间充质干细胞或其培养物之外，包含通常利用于化妆品组合物的成分， 例如，包含如稳定剂、溶解剂、维生素、颜料及香料的常规助剂以及载体。 本发明的化妆品组合物可制备为在该领域中通常制备的任一剂型，例如，可剂型 化为溶液、悬浮液、乳浊液、浊液、膏、凝胶、霜、乳液、密粉、香皂、含表面活性剂的洗面奶、 油、粉末状粉底液、乳液状粉底液、蜡状粉底液及喷剂等，但并不限定于此。更详细地，可制 备为弹性化妆水、营养化妆水、营养霜、按摩霜、精华素、眼霜、卸妆膏、洗面奶、卸妆水、面 膜、喷剂或蜜粉的剂型。 在本发明的剂型为膏、霜或凝胶的情况下，作为载体成分，可利用动物性油、植物 性油、蜡、石蜡、淀粉、胺黄树胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅、膨润土、二氧化硅、滑石粉或 氧化锌等。 本发明的剂型为蜜粉或喷剂的情况下，作为载体成分，可利用乳糖、滑石粉、二氧 化硅、氢氧化铝、硅酸钙或聚酰胺粉，尤其，在喷剂的情况下，还可包含如氯氟烃、丙烷/丁烷 或二甲醚的推进剂。 在本发明的剂型为溶液或乳浊液的情况下，作为载体成分，可利用溶剂、溶解剂或 乳化剂，例如，可利用水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、 1，3-丁基乙二醇油、甘油脂肪酯、聚乙二醇或山梨醇酐脂肪酸酯。 在本发明的剂型为悬浮液的情况下，作为载体成分，可利用如水、乙醇或丙二醇的 液状稀释剂、如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇酯及聚氧乙烯山梨糖醇酐酯的悬浮剂、 微晶纤维素、甲基氢氧化铝、膨润土、琼脂或lakanto等。 在本发明的剂型为含表面活性剂洗面奶的情况下，作为载体成分，可利用脂肪醇 硫酸盐、脂肪醇醚硫酸盐、磺基琥珀酸单酯、羟乙基磺酸盐、咪唑啉衍生物、甲基牛磺酸盐、 肌氨酸盐、脂肪酸酰胺醚硫酸盐、烷基酰胺甜菜碱、脂肪族醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇 8 CN 111601881 A 说　明　书 7/15 页 酰胺、植物性油、羊毛脂衍生物或乙氧基化甘油脂肪酸酯等。 根据本发明的又一实施方式，本发明提供从利用干扰素γ预处理的诱导多能干细 胞来源的间充质干细胞或其培养物中分离的外泌体。 本发明的上述利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞为与 现有的间充质干细胞或与未利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞 不同的具有细胞学(免疫学)特征的间充质干细胞。如在本发明的实施例所证明，对本发明 的利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞与常规间充质干细胞及本 发明的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞及吲哚胺2，3-双加氧酶(indoleamine  2，3- dioxygenase，IDO)的表达量进行比较的结果，相比于间充质干细胞，诱导多能干细胞来源 的间充质干细胞中吲哚胺2，3-双加氧酶表达量高(为示出数据)，相比于诱导多能干细胞来 源的间充质干细胞，利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞中的吲哚 胺2，3-双加氧酶的表达量高(图3)。并且，经确认，在分别回收诱导多能干细胞来源的间充 质干细胞和利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞的培养液后比较 与炎症相关的细胞因子蛋白分泌量的结果，相比于诱导多能干细胞来源的间充质干细胞， 本发明的利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞呈现白细胞介素19、 白细胞介素20、白细胞介素1β、白细胞介素6及白细胞介素6Rα的分泌显著减少(图4)。 根据本发明的又一实施方式，本发明提供包含从利用干扰素γ预处理的诱导多能 干细胞来源的间充质干细胞或其培养物中分离的外泌体作为有效成分的用于预防或治疗 皮肤疾病的药剂学组合物。 根据本发明的又一实施方式，本发明提供包含从利用干扰素γ预处理的诱导多能 干细胞来源的间充质干细胞或其培养物中分离的外泌体作为有效成分的用于预防或改善 皮肤疾病的化妆品组合物。 在本发明的包含从利用干扰素γ预处理的间充质干细胞或其培养物中分离的外 泌体作为有效成分的用于预防或治疗的药剂学组合物及用于预防或改善皮肤疾病的化妆 品组合物中，包含之前记载的从利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细 胞或其培养物中分离的外泌体作为有效成分，目标疾病与如上所述的药剂学组合物相同， 因此，为了避免本说明书过于复杂，将省略两者之间相同的内容。 根据本发明的一实施方式，本发明提供皮肤疾病的治疗方法，包括向需要治疗的 对象给药组合物的步骤，上述组合物包含利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间 充质干细胞或其培养物或者从利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细 胞或其培养物中分离的外泌体作为有效成分。 根据本发明的再一实施方式，本发明提供皮肤疾病的改善方法，包括向需要改善 的对象给药组合物的步骤，上述组合物包含利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的 间充质干细胞或其培养物或者从利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干 细胞或其培养物中分离的外泌体作为有效成分。 作为本发明的治疗方法或改善方法的目标疾病的皮肤疾病通过与上述药剂学组 合物的治疗对象疾病相关来定义。 在本发明的一实例中，上述对象为哺乳动物或人。 本发明皮肤疾病的治疗方法或改善方法为使用与如上所述的包含利用干扰素γ 9 CN 111601881 A 说　明　书 8/15 页 预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞或其培养物或者从利用干扰素γ预处理的 诱导多能干细胞来源的间充质干细胞或其培养物中分离的外泌体作为有效成分的组合物 相同的有效成分的方法，因此，为了避免本说明书的过于复杂，将省略重复内容的记载。 根据本发明的另一实施方式，本发明提供从利用干扰素γ预处理的诱导多能干细 胞来源的间充质干细胞分离的外泌体的生产方法，包括：步骤(a)，在包含干扰素γ的细胞 培养基中培养诱导多能干细胞来源的间充质干细胞；步骤(b)，在清洗培养的间充质干细胞 后，在细胞培养基中进一步培养；以及步骤(c)，从间充质干细胞的培养液中分离外泌体。 本发明的从利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞分离的 外泌体的生产方法与从利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞中生 产外泌体的方法相同，上述利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞通 过在上述内容中记载的利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞的生 产方法来生产，因此，为了避免本说明书过于复杂，将省略两者之间的相同记载。 在本发明的一实例中，上述步骤(c)可通过实施离心分离来从间充质干细胞的培 养液中分离外泌体。 更具体地，以200～400xg的条件对上述间充质干细胞的培养基进行5分钟至20分 钟的离心分离，来去除剩余的细胞和细胞残留物，之后，取出上清液并以9000～12000xg的 条件进行60分钟～80分钟的高速离心分离，之后，再次取出上清液并以90000～120000xg的 条件进行80分钟～100分钟的超高速离心分离，由此去除上清液，从而可获取留在底层的外 泌体。根据本发明的特定实例，回收间充质干细胞培养基，以300xg条件进行10分钟的离心 分离来去除剩余的细胞和细胞残留物，取出上清液并利用0.22μm的过滤器进行过滤，之后， 利用高速离心机(high  speed  centrifuge)在10000xg、4℃的条件下进行70分钟的离心分 离。再次取出离心分离的上清液并利用超高速离心机(ultracentrifuge)在100000xg、4℃ 的条件下进行90分钟的离心分离，通过去除上清液来分离留在底层的外泌体。 根据本发明的还有一实施方式，本发明提供包含从利用干扰素γ预处理的诱导多 能干细胞来源的间充质干细胞或其分离的外泌体(iMSC-exo)作为有效成分的干细胞治疗 剂。 在本说明书中，术语“干细胞治疗剂”是指包含干细胞作为有效成分的药剂学组合 物，干细胞治疗剂用于调节组织再生、器官功能恢复或免疫细胞的功能。 在本发明的一实例中，上述干细胞治疗剂为可通过间充质干细胞的多能性期待恢 复的用于预防或治疗疾病(例如，心脏、肝、关节、与神经系统或免疫相关的疾病)的药剂学 组合物。 上述干细胞治疗剂的组成成分与如上所述的本发明的包含利用干扰素γ预处理 的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞、其培养物或由此分离的外泌体的药剂学组合物、 化妆品组合物的组成成分相同，因此，为了避免本说明书过于复杂，将省略两者之间相同的 内容的记载。 发明的效果 本发明的特征及优点如下。 (a)本发明提供利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞的生 产方法、通过上述方法制备的利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞 10 CN 111601881 A 说　明　书 9/15 页 及包含其作为有效成分的用于预防或治疗皮肤疾病的药剂学组合物及用于预防或改善皮 肤疾病的化妆品组合物。 (b)本发明提供包含从利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细 胞或其培养物中分离的外泌体作为有效成分的用于预防或治疗皮肤疾病的药剂学组合物 及用于预防或改善皮肤疾病的化妆品组合物。 (c)在利用本发明的组合物的情况下，可提供具有比现有的间充质干细胞得到改 善的免疫调节功能的用于皮肤疾病的组合物及干细胞治疗剂。 附图说明 图1以图示化的方式示出利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干 细胞及来源于上述间充质干细胞的外泌体的制备过程。 图2示出诱导多能干细胞来源的间充质干细胞及利用干扰素γ预处理的诱导多能 干细胞来源的间充质干细胞的表面抗原的分析结果。 图3示出确认诱导多能干细胞来源的间充质干细胞及利用干扰素γ预处理的诱导 多能干细胞来源的间充质干细胞的吲哚胺2，3-双加氧酶表达程度的结果。 图4示出确认诱导多能干细胞来源的间充质干细胞及利用干扰素γ预处理的诱导 多能干细胞来源的间充质干细胞的细胞因子分泌量的结果。 图5a及5b示出确认从诱导多能干细胞来源的间充质干细胞分离的外泌体及从利 用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞分离的外泌体地平均大小的结 果。 图6示出确认诱导多能干细胞来源的间充质干细胞的外泌体及利用干扰素γ预处 理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞外泌体的CD63及CD9的表达的结果。 图7以图示化的方式示出特应性皮炎动物模型的制备过程。 图8示出确认对于特应性皮炎动物模型的特应性病变的利用干扰素γ预处理的诱 导多能干细胞来源的间充质干细胞及利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充 质干细胞外泌体的影响的结果。 图9示出在特应性皮炎动物模型中处理利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来 源的间充质干细胞及利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞外泌体 的皮肤临床分数结果。 图10示出在特应性皮炎动物模型中处理利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞 来源的间充质干细胞及利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞外泌 体的处理的经皮水分丢失程度。 图11示出在特应性皮炎动物模型中处理利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞 来源的间充质干细胞及利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞外泌 体的皮肤组织的变化，比例尺为200μm。 图12示出在特应性皮炎动物模型中处理利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞 来源的间充质干细胞及利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞外泌 体的血中免疫球蛋白E浓度。 图13示出在特应性皮炎动物模型中处理利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞 11 CN 111601881 A 说　明　书 10/15 页 来源的间充质干细胞及利用干扰素γ预处理的诱导多能干细胞来源的间充质干细胞外泌 体的淋巴细胞的白细胞介素17a分泌量。