技术摘要：
本发明公开人参皂苷M1用于制造供治疗亨丁顿舞蹈症(HD)的药物的用途；以及用于治疗HD的医药组合物，包括人参皂苷M1及医药上可接受的载体。
背景技术：
丁顿舞蹈症(HD)是由亨丁顿基因中异常的CAG三核苷酸重复扩增所引起的一种体 染色体显性遗传神经退化性疾病。该疾病在临床上表现为渐进式不自主运动障碍、痴呆及 最终死亡。至今为止，目前尚无有效的HD治疗方法。 已知人参的主要活性成分人参皂苷具有多种药理活性，例如抗肿瘤、抗疲劳、抗过 敏及抗氧化活性。人参皂苷具有基本结构，由具有17个碳原子排列成四环的性脂烷 (gonane)类固醇核组成。人参皂苷在体内金属化，而最近的一些研究表明，人参皂苷代谢 物，而不是天然存在的人参皂苷，很容易被人体吸收并充当活性成分。一些人参皂苷已被报 导对某些神经退化性疾病和衰老疾病具有益效用。其中，人参皂苷M1，也称为化合物K(CK)， 经由人类肠道细菌的绞股蓝皂苷途径(gypenoside pathway)，人参皂苷M1已知为原人参二 醇型(protopanaxadiol-type)人参皂苷的一种代谢产物。迄今为止，并无先前技术参考文 献报导了人参皂苷M1在HD治疗中的效用
技术实现要素：
在本发明中，不可预期地发现人参皂苷M1能有效减轻亨丁顿舞蹈症(HD)的一或多 种症状。因此，本发明提供了一种治疗个体HD的新方法。 因此，本发明提供一种于有需要的个体治疗亨丁顿舞蹈症(HD)的方法，包含向个 体投予有效量的人参皂苷M1。 在一些具体实施例中，该个体表现突变HTT蛋白，特别是突变HTT蛋白在个体的神 经元中累积。 在一些具体实施例中，人参皂苷M1以一含量投予使有效于(i)降低活性含氧物 (ROS)的形成及/或(ii)降低细胞毒性，特别是在个体的神经元中，及/或(iii)改善运动协 调性，(iv)延长寿命，及/或(v)降低个体的纹状体中mHtt聚集体的形成。 在一些具体实施例中，人参皂苷M1通过肠胃外或肠内途径投予。 下面的描述中阐述了本发明的一或多个具体实施例的细节。由以下对若干具体实 施例的详细描述以及由所附申请专利范围，本发明的其他特征或优点将显而易见。 附图说明 为了说明本发明的目的，在图式中显示出具体实施例。然而应理解，本发明不限于 3 CN 111601604 A 说 明 书 2/11 页 所示的较佳具体实施例。在图式中： 图1A-1B显示人参皂苷M1显著降低mHtt表现细胞中的细胞毒性。(图1A)用30μM人 参皂苷M1或载体(0.1％DMSO)处理STHdhQ7和STHdhQ109细胞24小时。通过MTT还原测定法定 量STHdhQ7和STHdhQ109细胞的存活率。(图1B)用1-30μM人参皂苷M1或载体(0.1％DMSO)处 理STHdhQ109细胞24小时。通过MTT还原测定法定量STHdhQ109细胞的存活率。结果表示为一 式三份样品的平均值±SEM。多组将使用单因子变异数分析(ANOVA)接着是事后的学生-纽 曼-科尔斯检定(Student-Newman-Keuls test)而进行分析。p值<0.05将被认为是显著的。 ap<0.05：STHdhQ7和STHdhQ109细胞之间(图1A)，或与未处理(载体处理的)STHdhQ7细胞比 较(图1B)。bp<0.05：与未处理(载体处理的)STHdhQ109细胞相比。 图2显示人参皂苷M1显著降低STHdhQ109细胞中的ROS的产生。在10μM细胞内ROS指 示剂H DCFDA存在下，用1-30μM人参皂苷M1或载体(0.1％DMSO)处理STHdhQ1092 细胞1小时。通 过使用荧光板读数器侦测荧光强度来测量细胞ROS含量。结果表示为一式三份样品的平均 值±SEM。多组将使用单因子变异数分析(ANOVA)接着是事后的学生-纽曼-科尔斯检定而进 行分析。p值<0.05将被认为是显著的。ap<0.05：与未处理(载体处理的)STHdhQ109细胞相比。 图3显示人参皂苷M1显著降低STHdhQ109细胞中AMPK的磷酸化程度。用10或30μM人 参皂苷M1或载体(0.1％DMSO)处理STHdhQ7和STHdhQ109细胞24小时。通过西方墨点法测量 AMPK的磷酸化程度。西方墨点法结果表示三个不同的实验，直方图显示定量表示为这三个 实验的平均值±SEM。多组将使用单因子变异数分析(ANOVA)接着是事后的学生-纽曼-科尔 斯检定而进行分析。p值<0.05将被认为是显著的。ap<0.05：STHdhQ7和STHdhQ109细胞之间。bp< 0.05：与未处理(载体处理的)STHdhQ109细胞相比。 图4显示人参皂苷M1显著降低STHdhQ109细胞中ATM的磷酸化程度。用10或30μM人 参皂苷M1或载体(0.1％DMSO)处理STHdhQ7和STHdhQ109细胞24小时。通过西方墨点法测量ATM 的磷酸化程度。西方墨点法结果表示三个不同的实验，直方图显示定量表示为这三个实验 的平均值±SEM。多组将使用单因子变异数分析(ANOVA)接着是事后的学生-纽曼-科尔斯检 定而进行分析。p值<0.05将被认为是显著的。ap<0 .05：STHdhQ7和STHdhQ109细胞之间。bp< 0.05：与未处理(载体处理的)STHdhQ109细胞相比。 图5显示人参皂苷M1显著降低STHdhQ109细胞中γH2AX的表现量。用10或30μM人参 皂苷M1或载体(0.1％DMSO)处理STHdhQ7和STHdhQ109细胞24小时。通过西方墨点法测量γ H2AX的表现量。西方墨点法结果表示三个不同的实验，直方图显示定量表示为这三个实验 的平均值±SEM。多组将使用单因子变异数分析(ANOVA)接着是事后的学生-纽曼-科尔斯检 定而进行分析。p值<0.05将被认为是显著的。ap<0 .05：STHdhQ7和STHdhQ109细胞之间。bp< 0.05：与未处理(载体处理的)STHdhQ109细胞相比。 图6显示人参皂苷M1显著降低STHdhQ109细胞中p53的磷酸化程度。用10或30μM人 参皂苷M1或载体(0.1％DMSO)处理STHdhQ7和STHdhQ109细胞24小时。通过西方墨点法测量p53 的磷酸化程度。西方墨点法结果表示三个不同的实验，直方图显示定量表示为这三个实验 的平均值±SEM。多组将使用单因子变异数分析(ANOVA)接着是事后的学生-纽曼-科尔斯检 定而进行分析。p值<0.05将被认为是显著的。ap<0 .05：STHdhQ7和STHdhQ109细胞之间。bp< 0.05：与未处理(载体处理的)STHdhQ109细胞相比。 图7显示口服投予人参皂苷M1显著增加HD疾病小鼠的运动协调性。R6/2HD疾病小 4 CN 111601604 A 说 明 书 3/11 页 鼠从7周龄开始每天口服投予人参皂苷M1(以体重计的30mg/kg)或载体持续4周。野生型健 康对照小鼠每日口服投予载体。使用旋转棒装置测定来评估运动协调性。结果表示为平均 值±SEM。多组通过单因子变异数分析(ANOVA)接着是事后的学生-纽曼-科尔斯检定而进行 分析。ap<0.05：在WT和R6/2-载体小鼠之间。bp<0.05：与R6/2-载体小鼠相比。 图8显示口服投予人参皂苷M1显著延长HD疾病小鼠的寿命。R6/2HD疾病小鼠从7周 龄开始每天口服投予人参皂苷M1(以体重计的30mg/kg)或载体持续4周。野生型健康对照小 鼠每日口服投予载体。测定小鼠的寿命。结果表示为平均值±SEM。多组通过单因子变异数 分析(ANOVA)接着是事后的学生-纽曼-科尔斯检定而进行分析。ap<0.05：在WT和R6/2-载体 小鼠之间。bp<0.05：与R6/2-载体小鼠相比。 图9显示口服投予人参皂苷M1减少HD疾病小鼠的纹状体中mHtt聚集体的形成。野 生型健康对照小鼠和R6/2HD疾病小鼠从7周龄开始每天口服投予人参皂苷M1(以体重计的 30mg/kg)或载体持续4周。通过滤器延迟测定法(filter retardation assay)分析在纹状 体裂解物中mHtt聚集物的量。
本发明公开人参皂苷M1用于制造供治疗亨丁顿舞蹈症(HD)的药物的用途；以及用于治疗HD的医药组合物，包括人参皂苷M1及医药上可接受的载体。
背景技术：
丁顿舞蹈症(HD)是由亨丁顿基因中异常的CAG三核苷酸重复扩增所引起的一种体 染色体显性遗传神经退化性疾病。该疾病在临床上表现为渐进式不自主运动障碍、痴呆及 最终死亡。至今为止，目前尚无有效的HD治疗方法。 已知人参的主要活性成分人参皂苷具有多种药理活性，例如抗肿瘤、抗疲劳、抗过 敏及抗氧化活性。人参皂苷具有基本结构，由具有17个碳原子排列成四环的性脂烷 (gonane)类固醇核组成。人参皂苷在体内金属化，而最近的一些研究表明，人参皂苷代谢 物，而不是天然存在的人参皂苷，很容易被人体吸收并充当活性成分。一些人参皂苷已被报 导对某些神经退化性疾病和衰老疾病具有益效用。其中，人参皂苷M1，也称为化合物K(CK)， 经由人类肠道细菌的绞股蓝皂苷途径(gypenoside pathway)，人参皂苷M1已知为原人参二 醇型(protopanaxadiol-type)人参皂苷的一种代谢产物。迄今为止，并无先前技术参考文 献报导了人参皂苷M1在HD治疗中的效用
技术实现要素：
在本发明中，不可预期地发现人参皂苷M1能有效减轻亨丁顿舞蹈症(HD)的一或多 种症状。因此，本发明提供了一种治疗个体HD的新方法。 因此，本发明提供一种于有需要的个体治疗亨丁顿舞蹈症(HD)的方法，包含向个 体投予有效量的人参皂苷M1。 在一些具体实施例中，该个体表现突变HTT蛋白，特别是突变HTT蛋白在个体的神 经元中累积。 在一些具体实施例中，人参皂苷M1以一含量投予使有效于(i)降低活性含氧物 (ROS)的形成及/或(ii)降低细胞毒性，特别是在个体的神经元中，及/或(iii)改善运动协 调性，(iv)延长寿命，及/或(v)降低个体的纹状体中mHtt聚集体的形成。 在一些具体实施例中，人参皂苷M1通过肠胃外或肠内途径投予。 下面的描述中阐述了本发明的一或多个具体实施例的细节。由以下对若干具体实 施例的详细描述以及由所附申请专利范围，本发明的其他特征或优点将显而易见。 附图说明 为了说明本发明的目的，在图式中显示出具体实施例。然而应理解，本发明不限于 3 CN 111601604 A 说 明 书 2/11 页 所示的较佳具体实施例。在图式中： 图1A-1B显示人参皂苷M1显著降低mHtt表现细胞中的细胞毒性。(图1A)用30μM人 参皂苷M1或载体(0.1％DMSO)处理STHdhQ7和STHdhQ109细胞24小时。通过MTT还原测定法定 量STHdhQ7和STHdhQ109细胞的存活率。(图1B)用1-30μM人参皂苷M1或载体(0.1％DMSO)处 理STHdhQ109细胞24小时。通过MTT还原测定法定量STHdhQ109细胞的存活率。结果表示为一 式三份样品的平均值±SEM。多组将使用单因子变异数分析(ANOVA)接着是事后的学生-纽 曼-科尔斯检定(Student-Newman-Keuls test)而进行分析。p值<0.05将被认为是显著的。 ap<0.05：STHdhQ7和STHdhQ109细胞之间(图1A)，或与未处理(载体处理的)STHdhQ7细胞比 较(图1B)。bp<0.05：与未处理(载体处理的)STHdhQ109细胞相比。 图2显示人参皂苷M1显著降低STHdhQ109细胞中的ROS的产生。在10μM细胞内ROS指 示剂H DCFDA存在下，用1-30μM人参皂苷M1或载体(0.1％DMSO)处理STHdhQ1092 细胞1小时。通 过使用荧光板读数器侦测荧光强度来测量细胞ROS含量。结果表示为一式三份样品的平均 值±SEM。多组将使用单因子变异数分析(ANOVA)接着是事后的学生-纽曼-科尔斯检定而进 行分析。p值<0.05将被认为是显著的。ap<0.05：与未处理(载体处理的)STHdhQ109细胞相比。 图3显示人参皂苷M1显著降低STHdhQ109细胞中AMPK的磷酸化程度。用10或30μM人 参皂苷M1或载体(0.1％DMSO)处理STHdhQ7和STHdhQ109细胞24小时。通过西方墨点法测量 AMPK的磷酸化程度。西方墨点法结果表示三个不同的实验，直方图显示定量表示为这三个 实验的平均值±SEM。多组将使用单因子变异数分析(ANOVA)接着是事后的学生-纽曼-科尔 斯检定而进行分析。p值<0.05将被认为是显著的。ap<0.05：STHdhQ7和STHdhQ109细胞之间。bp< 0.05：与未处理(载体处理的)STHdhQ109细胞相比。 图4显示人参皂苷M1显著降低STHdhQ109细胞中ATM的磷酸化程度。用10或30μM人 参皂苷M1或载体(0.1％DMSO)处理STHdhQ7和STHdhQ109细胞24小时。通过西方墨点法测量ATM 的磷酸化程度。西方墨点法结果表示三个不同的实验，直方图显示定量表示为这三个实验 的平均值±SEM。多组将使用单因子变异数分析(ANOVA)接着是事后的学生-纽曼-科尔斯检 定而进行分析。p值<0.05将被认为是显著的。ap<0 .05：STHdhQ7和STHdhQ109细胞之间。bp< 0.05：与未处理(载体处理的)STHdhQ109细胞相比。 图5显示人参皂苷M1显著降低STHdhQ109细胞中γH2AX的表现量。用10或30μM人参 皂苷M1或载体(0.1％DMSO)处理STHdhQ7和STHdhQ109细胞24小时。通过西方墨点法测量γ H2AX的表现量。西方墨点法结果表示三个不同的实验，直方图显示定量表示为这三个实验 的平均值±SEM。多组将使用单因子变异数分析(ANOVA)接着是事后的学生-纽曼-科尔斯检 定而进行分析。p值<0.05将被认为是显著的。ap<0 .05：STHdhQ7和STHdhQ109细胞之间。bp< 0.05：与未处理(载体处理的)STHdhQ109细胞相比。 图6显示人参皂苷M1显著降低STHdhQ109细胞中p53的磷酸化程度。用10或30μM人 参皂苷M1或载体(0.1％DMSO)处理STHdhQ7和STHdhQ109细胞24小时。通过西方墨点法测量p53 的磷酸化程度。西方墨点法结果表示三个不同的实验，直方图显示定量表示为这三个实验 的平均值±SEM。多组将使用单因子变异数分析(ANOVA)接着是事后的学生-纽曼-科尔斯检 定而进行分析。p值<0.05将被认为是显著的。ap<0 .05：STHdhQ7和STHdhQ109细胞之间。bp< 0.05：与未处理(载体处理的)STHdhQ109细胞相比。 图7显示口服投予人参皂苷M1显著增加HD疾病小鼠的运动协调性。R6/2HD疾病小 4 CN 111601604 A 说 明 书 3/11 页 鼠从7周龄开始每天口服投予人参皂苷M1(以体重计的30mg/kg)或载体持续4周。野生型健 康对照小鼠每日口服投予载体。使用旋转棒装置测定来评估运动协调性。结果表示为平均 值±SEM。多组通过单因子变异数分析(ANOVA)接着是事后的学生-纽曼-科尔斯检定而进行 分析。ap<0.05：在WT和R6/2-载体小鼠之间。bp<0.05：与R6/2-载体小鼠相比。 图8显示口服投予人参皂苷M1显著延长HD疾病小鼠的寿命。R6/2HD疾病小鼠从7周 龄开始每天口服投予人参皂苷M1(以体重计的30mg/kg)或载体持续4周。野生型健康对照小 鼠每日口服投予载体。测定小鼠的寿命。结果表示为平均值±SEM。多组通过单因子变异数 分析(ANOVA)接着是事后的学生-纽曼-科尔斯检定而进行分析。ap<0.05：在WT和R6/2-载体 小鼠之间。bp<0.05：与R6/2-载体小鼠相比。 图9显示口服投予人参皂苷M1减少HD疾病小鼠的纹状体中mHtt聚集体的形成。野 生型健康对照小鼠和R6/2HD疾病小鼠从7周龄开始每天口服投予人参皂苷M1(以体重计的 30mg/kg)或载体持续4周。通过滤器延迟测定法(filter retardation assay)分析在纹状 体裂解物中mHtt聚集物的量。
