技术摘要：
本发明公开了一种江西铅山红芽芋试管球茎胚性愈伤组织诱导的方法，属于愈伤组织培养技术领域。本发明以江西铅山红芽芋诱导的试管球茎作为外植体，经过两次预处理后将试管球茎切片并进行包埋，得到试管球茎切片包埋珠，然后将该包埋珠接种到不同营养成分的固体培养基上 全部
背景技术：
红芽芋是江西省铅山县传统优势产品，种植历史悠久。江西铅山红芽芋皮色鲜艳， 顶芽红色，肉质细嫩，易煮烂而不糊，营养丰富，含多种微量元素，是芋中之珍品，一直是国 内外市场上紧俏的抢手货，是铅山县的拳头产品。近十余年来，这一优势产业发展迅速，已 成为铅山县农民增收致富的主导产业，铅山县也成为江西省最大的红芽芋生产基地，2007 年3月被中国绿色食品委员会和农业部命名为“红芽芋全国绿色食品标准化生产基地县”。 目前，随着生产不断发展，植株无性繁殖积累病毒逐渐增多，江西铅山红芽芋品种 普遍出现早衰现象，病害严重，产量和品质下降。因而，优良品种的选育已成为江西铅山红 芽芋生产急需解决的问题。 愈伤组织培养是一种常见的组织培养形式，经过愈伤组织培养能够产生完整植 株。愈伤组织培养，一方面可研究植物生长发育及分化的机制、遗传变异规律,对植物遗传 育种具有特殊意义；另一方面可用于大规模工厂化生产有用化合物,或用于细胞培养筛选 工业、农业、医药生产上有用的无性系,或用于原生质体培养中的原生质体来源等。实践证 明,愈伤组织培养不仅是一种植物快繁的新手段,同时也是植物改良,种质保存和有用化合 物生产的理想途径。 现有技术中，对于江西铅山红芽芋的组织培养虽然已有较多研究，但在利用外植 体诱导愈伤组织方面的研究较少，且存在愈伤组织诱导困难，得到的江西铅山红芽芋胚性 愈伤组织诱导率及再生率低的问题。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种江西铅山红芽芋试管球茎胚性愈伤组织诱导的方法，以 解决上述现有技术存在的问题，使江西铅山红芽芋胚性愈伤组织诱导率及再生率显著提 高。 为实现上述目的，本发明提供了如下方案： 本发明提供一种江西铅山红芽芋试管球茎胚性愈伤组织诱导的方法，包括以下步 骤： (1)一次预处理：选取江西铅山红芽芋诱导的试管球茎作为外植体，无菌条件下置 于含壳寡糖和石墨烯量子点的MS培养液中浸泡； (2)二次预处理：无菌条件下，将步骤(1)中预处理后的江西铅山红芽芋诱导的试 管球茎，置于含壳寡糖和碳纳米管的MS培养液浸泡； (3)包埋：将经过2次预处理的江西铅山红芽芋试管球茎切片，无菌条件下与含海 藻酸钠和蔗糖的无钙离子改良MS培养液混合均匀，将混合液滴入含有壳寡糖、石墨烯量子 3 CN 111567404 A 说 明 书 2/6 页 点、碳纳米管、CaCl2和蔗糖的MS培养液中进行包埋，形成江西铅山红芽芋试管球茎切片包 埋珠； (4)无菌条件下，将江西铅山红芽芋试管球茎切片包埋珠接种在MS KT 1mg/L NAA 0.2mg/L 0.3-0.5g/L石墨烯量子点 0.05g/L壳寡糖固体培养基上黑暗培养； (5)无菌条件下，将培养后的江西铅山红芽芋试管球茎切片包埋珠接种在MS KT 1mg/L NAA 0.2mg/L 0.3-0.5g/L碳纳米管 0.05g/L壳寡糖固体培养基上再次进行黑暗培 养； (6)培养完成后，无菌条件下，将江西铅山红芽芋试管球茎切片从包埋珠中剥离出 来，接种在MS KT 2mg/L NAA 0.5mg/L 2,4-D 0 .3mg/L 0 .3-0 .5g/L石墨烯量子点 0.3- 0.5g/L碳纳米管 0.05g/L壳寡糖固体培养基上进行黑暗培养，即可诱导出江西铅山红芽芋 试管球茎切片的胚性愈伤组织。 进一步地，所述步骤(1)中，MS培养液中的壳寡糖浓度为0.05g/L，石墨烯量子点的 浓度为0.3-0.5g/L，所述浸泡时间为48h。 进一步地，所述步骤(2)中，MS培养液中壳寡糖的浓度为0.05g/L，碳纳米管的浓度 为0.3-0.5g/L，所述浸泡时间为48h。 进一步地，所述步骤(3)中，无钙离子改良MS培养液中海藻酸钠所占质量体积比为 3％，蔗糖浓度为0.2mol/L。 进一步地，步骤(3)中所述MS培养液中壳寡糖浓度为0.05g/L、石墨烯量子点浓度 为0.03-0 .05g/L、碳纳米管浓度为0.03-0 .05g/L、CaCl2浓度为0.1mol/L、蔗糖浓度为 0.2mol/L。 进一步地，步骤(3)中所述江西铅山红芽芋试管球茎切片包埋珠的粒径大小为 1.9-2.1cm。 进一步地，所述步骤(3)中包埋时间为40-50min。 进一步地，所述步骤(4)和步骤(5)中，黑暗培养的培养温度为25±2℃，培养时间 为15d。 进一步地，所述步骤(6)中，黑暗培养的培养温度为25±2℃，培养时间为50-60d。 本发明公开了以下技术效果： 本发明以江西铅山红芽芋诱导的试管球茎作为外植体，经过两次预处理后将试管 球茎切片并进行包埋，得到试管球茎切片包埋珠，然后将该包埋珠接种到不同营养成分的 固体培养基上进行培养；其中，石墨烯量子点和碳纳米管能够大量吸附营养物质，进而促进 壳寡糖和激素对愈伤组织的诱导作用。 本发明诱导出的江西铅山红芽芋试管球茎切片的胚性愈伤组织诱导率可以高达 95％以上，且胚性愈伤组织再生率可以实现100％。
本发明公开了一种江西铅山红芽芋试管球茎胚性愈伤组织诱导的方法，属于愈伤组织培养技术领域。本发明以江西铅山红芽芋诱导的试管球茎作为外植体，经过两次预处理后将试管球茎切片并进行包埋，得到试管球茎切片包埋珠，然后将该包埋珠接种到不同营养成分的固体培养基上 全部
背景技术：
红芽芋是江西省铅山县传统优势产品，种植历史悠久。江西铅山红芽芋皮色鲜艳， 顶芽红色，肉质细嫩，易煮烂而不糊，营养丰富，含多种微量元素，是芋中之珍品，一直是国 内外市场上紧俏的抢手货，是铅山县的拳头产品。近十余年来，这一优势产业发展迅速，已 成为铅山县农民增收致富的主导产业，铅山县也成为江西省最大的红芽芋生产基地，2007 年3月被中国绿色食品委员会和农业部命名为“红芽芋全国绿色食品标准化生产基地县”。 目前，随着生产不断发展，植株无性繁殖积累病毒逐渐增多，江西铅山红芽芋品种 普遍出现早衰现象，病害严重，产量和品质下降。因而，优良品种的选育已成为江西铅山红 芽芋生产急需解决的问题。 愈伤组织培养是一种常见的组织培养形式，经过愈伤组织培养能够产生完整植 株。愈伤组织培养，一方面可研究植物生长发育及分化的机制、遗传变异规律,对植物遗传 育种具有特殊意义；另一方面可用于大规模工厂化生产有用化合物,或用于细胞培养筛选 工业、农业、医药生产上有用的无性系,或用于原生质体培养中的原生质体来源等。实践证 明,愈伤组织培养不仅是一种植物快繁的新手段,同时也是植物改良,种质保存和有用化合 物生产的理想途径。 现有技术中，对于江西铅山红芽芋的组织培养虽然已有较多研究，但在利用外植 体诱导愈伤组织方面的研究较少，且存在愈伤组织诱导困难，得到的江西铅山红芽芋胚性 愈伤组织诱导率及再生率低的问题。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种江西铅山红芽芋试管球茎胚性愈伤组织诱导的方法，以 解决上述现有技术存在的问题，使江西铅山红芽芋胚性愈伤组织诱导率及再生率显著提 高。 为实现上述目的，本发明提供了如下方案： 本发明提供一种江西铅山红芽芋试管球茎胚性愈伤组织诱导的方法，包括以下步 骤： (1)一次预处理：选取江西铅山红芽芋诱导的试管球茎作为外植体，无菌条件下置 于含壳寡糖和石墨烯量子点的MS培养液中浸泡； (2)二次预处理：无菌条件下，将步骤(1)中预处理后的江西铅山红芽芋诱导的试 管球茎，置于含壳寡糖和碳纳米管的MS培养液浸泡； (3)包埋：将经过2次预处理的江西铅山红芽芋试管球茎切片，无菌条件下与含海 藻酸钠和蔗糖的无钙离子改良MS培养液混合均匀，将混合液滴入含有壳寡糖、石墨烯量子 3 CN 111567404 A 说 明 书 2/6 页 点、碳纳米管、CaCl2和蔗糖的MS培养液中进行包埋，形成江西铅山红芽芋试管球茎切片包 埋珠； (4)无菌条件下，将江西铅山红芽芋试管球茎切片包埋珠接种在MS KT 1mg/L NAA 0.2mg/L 0.3-0.5g/L石墨烯量子点 0.05g/L壳寡糖固体培养基上黑暗培养； (5)无菌条件下，将培养后的江西铅山红芽芋试管球茎切片包埋珠接种在MS KT 1mg/L NAA 0.2mg/L 0.3-0.5g/L碳纳米管 0.05g/L壳寡糖固体培养基上再次进行黑暗培 养； (6)培养完成后，无菌条件下，将江西铅山红芽芋试管球茎切片从包埋珠中剥离出 来，接种在MS KT 2mg/L NAA 0.5mg/L 2,4-D 0 .3mg/L 0 .3-0 .5g/L石墨烯量子点 0.3- 0.5g/L碳纳米管 0.05g/L壳寡糖固体培养基上进行黑暗培养，即可诱导出江西铅山红芽芋 试管球茎切片的胚性愈伤组织。 进一步地，所述步骤(1)中，MS培养液中的壳寡糖浓度为0.05g/L，石墨烯量子点的 浓度为0.3-0.5g/L，所述浸泡时间为48h。 进一步地，所述步骤(2)中，MS培养液中壳寡糖的浓度为0.05g/L，碳纳米管的浓度 为0.3-0.5g/L，所述浸泡时间为48h。 进一步地，所述步骤(3)中，无钙离子改良MS培养液中海藻酸钠所占质量体积比为 3％，蔗糖浓度为0.2mol/L。 进一步地，步骤(3)中所述MS培养液中壳寡糖浓度为0.05g/L、石墨烯量子点浓度 为0.03-0 .05g/L、碳纳米管浓度为0.03-0 .05g/L、CaCl2浓度为0.1mol/L、蔗糖浓度为 0.2mol/L。 进一步地，步骤(3)中所述江西铅山红芽芋试管球茎切片包埋珠的粒径大小为 1.9-2.1cm。 进一步地，所述步骤(3)中包埋时间为40-50min。 进一步地，所述步骤(4)和步骤(5)中，黑暗培养的培养温度为25±2℃，培养时间 为15d。 进一步地，所述步骤(6)中，黑暗培养的培养温度为25±2℃，培养时间为50-60d。 本发明公开了以下技术效果： 本发明以江西铅山红芽芋诱导的试管球茎作为外植体，经过两次预处理后将试管 球茎切片并进行包埋，得到试管球茎切片包埋珠，然后将该包埋珠接种到不同营养成分的 固体培养基上进行培养；其中，石墨烯量子点和碳纳米管能够大量吸附营养物质，进而促进 壳寡糖和激素对愈伤组织的诱导作用。 本发明诱导出的江西铅山红芽芋试管球茎切片的胚性愈伤组织诱导率可以高达 95％以上，且胚性愈伤组织再生率可以实现100％。
