技术摘要：
本发明提供了一种利用桔梗花药培养诱导愈伤组织的方法，包括以下步骤：采集未开放花蕾，低温预处理24h‑48h，消毒，接种在培养基上；培养基为MS培养基，添加蔗糖、琼脂、激素；花药愈伤组织诱导期间进行黑暗培养。本发明的方法愈伤组织起动早，诱导率高，愈伤组织体积  全部
背景技术：
桔梗Platycodon  grandiflorum  (  Jacq.  )  A.  DC.  属于桔梗科、桔梗属多年生 双子叶草本植物，为我国的大宗药材，需求量大，是一种药、食、赏兼用植物。桔梗根部入药， 其主要活性成分是皂苷，具有镇咳、抗炎、降血压、降血糖、减肥、抗肿瘤、提高人体免疫力等 广泛的药理活性。 桔梗主要采用种子或无性扦插繁殖，但种子繁殖存在生产周期长，  产量低，种子 发芽率不高，扦插枝条成活率又很低，严重限制了生产的发展。 组织培养技术在桔梗品种改良、种质保存、快速繁殖、基因转移等多方面得到广泛 应用。桔梗组织在离体培养条件下，体细胞染色体更易发生各种变异，基因突变的频率也大 为提高，这极大丰富了桔梗遗传资源，为药用植物改良开辟了新的途径。利用组织培养快繁 技术可为桔梗栽培提供足量优质种苗；另外开展桔梗组织培养技术的研究，还可为桔梗其 他方面的研究提供各种符合要求的材料。桔梗的茎尖、茎段和叶片离体材料均可诱导分化 再生植株。 李玉芬、弭晓菊利用组织培养技术对桔梗不同外植体根、茎、叶进行愈伤组织诱导 及植株再生过程研究，成功地诱导桔梗产生愈伤组织并获得了分化苗。发现外植体根、茎、 叶愈伤组织诱导的频率不同，并筛选出最佳的愈伤组织诱导的培养基及苗分化培养基。朱 玉灵等对桔梗的茎尖、茎段、叶片进行离体培养和植株再生试验研究。舒娈、高山林的实验 结果表明，桔梗试管苗可以较容易地诱导出愈伤组织，并且愈伤组织保持着较强的再分化 能力。杨耀文、钱子刚等用上胚轴作为外植体进行桔梗组织培养的研究。向邓云以下胚珠、 茎尖、茎段和根尖为外植体对桔梗愈伤组织诱导及不定芽形成进行了研究。结果表明在MS    2.4-D  3.0mg/L    6-BA  0.2mg/L的培养基上，下胚轴愈伤组织可形成丛生芽，不定芽分 化能力较强；根尖愈伤组织芽分化能力次之；茎尖和茎段愈伤组织无芽分化。 桔梗花属于两性花，据文献报道和套袋自交试验表明，在自然状态下桔梗的自交 结实率低，结实主要靠异花授粉。桔梗的遗传育种研究进展缓慢，通过花药培养得到单倍体 植株，再经染色体加倍得到纯合体，从中选出的优良纯系后代不分离,表现整齐一致,可缩 短育种年限。在诱导频率较高时，单倍体能在植株上较充分地显现重组的配子类型，可提供 新的遗传资源和选择材料。 愈伤组织是进行植物快速繁殖、原生质体制备、转基因研究中一个重要载体，可为 其倍性育种、组培快繁、体细胞杂交、无性系变异以及遗传转化提供良好的试验材料，最终 为桔梗的遗传改良提供重要基础。以往对桔梗不同外植体根、茎、叶进行愈伤组织诱导研 究。桔梗花药大，数量多、开花期较长，为其进行花药培养提供了充分的材料，但国内外未见 利用桔梗进行花药培养的相关报告。 3 CN 111543317 A 说　明　书 2/6 页
技术实现要素：
为解决现有技术的不足，本发明提供了一种利用桔梗花药培养诱导愈伤组织的方 法  。 本发明采用以下技术方案： 本发明提供了一种利用桔梗花药培养诱导愈伤组织的方法，包括以下步骤：晴天午后 采集未开放花蕾，用湿纱布包好，装入封口袋中黑暗环境下4  ℃低温预处理24h-48h，将花 蕾用自来水加吐温20冲洗20  min，75%乙醇浸泡30  s，1%升汞消毒8-10  min，在超净工作台 无菌条件下用无菌水冲洗3-5遍，解剖镜下剥取花药，接种在培养基上；所述培养基为MS培 养基，添加蔗糖30  g/L、琼脂6  g/L、激素，pH值为5.8，120-125℃下灭菌20  min；所述激素为 6-BA和/或2,4-D、NAA，所述6-BA浓度为0  mg .L-1-2.0  mg .L-1；所述2,4-D浓度为0  mg .L-1- 2.0  mg.L-1；所述NAA浓度为0  mg.L-1-0.2  mg.L-1；花药愈伤组织诱导期间进行黑暗培养，温 度为25±1  ℃。 本发明提供的方法可在白花桔梗花药培养中应用。 本发明提供的方法在白花桔梗花药培养中应用时，所述激素为1.0  mg .L-1  6-BA  和  2.0  mg.L-1  2,4-D  。 本发明提供的方法在白花桔梗花药培养中应用时，所述低温预处理的时间为48h 。 本发明提供的方法可在紫花桔梗花药培养中应用。 本发明提供的方法在紫花桔梗花药培养中应用时，所述激素为1.0  mg.L-1  6-BA  、  1.0  mg.L-1  2,4-D  和  0.2  mg.L-1  NAA  。 本发明提供的方法在紫花桔梗花药培养中应用时，所述低温预处理的时间为24- 48h  。 本发明的有益效果为：本发明提供了一种利用桔梗花药培养诱导愈伤组织的方 法，本发明的方法愈伤组织起动早，诱导率高，愈伤组织体积大，质地紧密。本发明为桔梗花 药培养、单倍体育种、诱变育种等提供了基础。 附图说明 图1是图示低温预处理的不同时间对愈伤组织诱导的影响。