技术摘要：
本发明公开了一种鲨鱼软骨粉替代品及其制备方法，属于海洋生物技术领域。本申请以鲨鱼软骨粉和鲟鱼骨为原料，集成生物酶解技术、混菌微生物发酵技术、现代生物分离技术，研制开发出具有突出免疫增强的鲨鱼软骨粉替代品，其中生物酶解技术采用的复合酶系为木瓜蛋白酶、 全部
背景技术：
鲨鱼是世界上最古老、最长寿的深海海洋生物之一，在地球上已生存了四亿年之 久，它具有完善免疫系统，生命力极强，几乎不被疾病感染，即使受到外伤，伤口也能很快复 原，鲨鱼患癌症的几率约为1/百万。我国鲨鱼药用始见于《本草经集注》，其软骨主要由软骨 细胞和含有胶原纤维及大量蛋白多糖和细胞外基质构成，从鲨鱼软骨中提取的多糖在临床 上主要用于治疗神经痛、偏头痛、腹腔手术后疼痛等。在欧、美、日等发达国家，鲨鱼软骨多 糖作为保健食品或保健药品长期应用于防治冠心病、心绞痛、心肌梗死等疾病，无明显的毒 副作用。近年来研究表明鲨鱼软骨中除富含钙、磷、镁等矿物质外，还含有多种粘多糖及硫 酸软骨素，具有显著的抗凝血、降血脂、抗病毒和抗肿瘤等功用，是不可多得的天然食品资 源。由于鲨鱼软骨粉具备促进人体软骨再生，抑制新生血管的天然功效，因此鲨鱼软骨粉是 一种优良的免疫增强原料。近年来，鲨鱼翅骨粉保健食品开发得到快速发展，但因为鲨鱼资 源量的制约，其在医药、食品等领域的广发应用受到制约。目前尚未发现鲨鱼软骨粉替代品 的技术报道，本发明为解决上述技术问题，提供一种鲨鱼软骨粉替代品及其制备方法。
技术实现要素：
为了克服上述现有技术的不足，实现鲨鱼软骨粉等海洋生物资源的功能活性物质 高效提取及广泛应用，本申请提供一种鲨鱼软骨粉替代品的制备方法，集成现代生物分离 技术、生物酶解技术、混菌微生物发酵技术、海洋生物资源营养调配技术，研制开发出高免 疫增强能力的鲨鱼软骨粉替代品，满足保健、医疗、食品等领域对鲨鱼软骨粉替代品的应用 需求，该工艺制备硫酸软骨素产品得率高，具有较高的抗氧化能力和显著的抗肿瘤功效，可 广泛应用于医养食品中。 本发明通过下述技术方案实现上述技术效果： 一种鲨鱼软骨粉替代品的制备方法，具体包括如下步骤： （1）预处理：将鲨鱼软骨粉和鲟鱼骨粉碎过100目筛，加入氢氧化纳溶液和氧化纳溶液， 于温度为40～50℃的条件下提取12～13h，过滤获得滤液，然后调整滤液的pH值为7.6～ 7.9； （2）复合酶解：向步骤（1）中的滤液中加入鲨鱼软骨粉质量比1～2%的复合酶制剂，在40 ～60℃的条件下酶解4～6h； （3）发酵液制备：向酶解液中加入酶解液质量比2%葡萄糖、0.15～0.20%(NH4)2SO4、0.10 ～0.15% KH2PO4、0.1%MgSO4，制备液体发酵培养基； （4）灭菌：在121℃条件下灭菌15min； （5）好氧发酵：向发酵液中加入发酵液质量比2～3%的复合微生物菌剂，在28～35℃条 3 CN 111567758 A 说 明 书 2/6 页 件下好氧发酵12～24h； （6）过滤：发酵结束后过滤除去菌体及不溶性固形物； （7）浓缩干燥：将步骤（6）过滤后的发酵液进行和干燥，获得鲨鱼软骨粉替代品。 上述步骤（1）中鲨鱼软骨粉和鲟鱼骨的质量比为1:3～5。 上述步骤(1)中所述氢氧化纳溶液的浓度为1～1.5%，所述氧化纳溶液的浓度为5 ～6%，所述的氢氧化纳溶液和氧化纳溶液的加入量均为鲨鱼软骨和鲟鱼骨重量和的2.5～ 3.5倍。 上述步骤(2)中所述复合酶制剂为木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶和胃蛋白酶 的中的一种或几种的混合物。 优选的，上述步骤(2)中所述复合酶制剂为木瓜蛋白酶和胃蛋白酶的混合，其质量 比为2:1。 优选的，上述步骤（3）中发酵液配制过程中添加0.5～1%的几丁聚糖。 上述步骤（5）中所述复合微生物为地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的混合菌，其接 种量量比为2:3。 上述复合微生物菌剂种子液制备方法为：在无菌条件下，采用LB培养基在28～32 ℃条件下培养24h，分别制得液体地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌种子液，要求种子液的有效 活菌数≥109cfu/mL；然后将二种芽孢杆菌的种子液按比例混合。 本发明提供一种鲨鱼软骨粉替代品的制备方法，所得鲨鱼软骨粉替代品免疫增强 功效优于鲨鱼软骨粉，可广泛的应用于医疗、食品和保健产品中。 本发明提供一种鲨鱼软骨粉替代品的制备方法，与现有技术相比，具有以下显著 优势： （1）本申请利用好氧菌（地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌）共同发酵酶解液，充分利用微生 物间的协同作用，提升鲨鱼软骨粉替代品的免疫增强功效；多菌种混合发酵不仅提高了鲨 鱼软骨粉替代品的得率，而且通过微生物间的发酵作用提升了鲨鱼软骨粉替代品的免疫增 强能力； （2）实验结果表明本申请在发酵液中添加一定量的几丁聚糖可以显著提升鲨鱼软骨粉 替代品的营养保健活性； （3）本发明采用酶解和混菌微生物发酵制备鲨鱼软骨粉替代品，显著提升了鲨鱼软骨 粉替代品的提取率和产品营养保健功效，实验结果表明在此工艺条件制备的鲨鱼软骨粉替 代品较直接食用鲨鱼软骨粉免疫增强功效显著提升，丰富了鲨鱼软骨粉类产品原料来源， 具有广阔的市场应用价值。
本发明公开了一种鲨鱼软骨粉替代品及其制备方法，属于海洋生物技术领域。本申请以鲨鱼软骨粉和鲟鱼骨为原料，集成生物酶解技术、混菌微生物发酵技术、现代生物分离技术，研制开发出具有突出免疫增强的鲨鱼软骨粉替代品，其中生物酶解技术采用的复合酶系为木瓜蛋白酶、 全部
背景技术：
鲨鱼是世界上最古老、最长寿的深海海洋生物之一，在地球上已生存了四亿年之 久，它具有完善免疫系统，生命力极强，几乎不被疾病感染，即使受到外伤，伤口也能很快复 原，鲨鱼患癌症的几率约为1/百万。我国鲨鱼药用始见于《本草经集注》，其软骨主要由软骨 细胞和含有胶原纤维及大量蛋白多糖和细胞外基质构成，从鲨鱼软骨中提取的多糖在临床 上主要用于治疗神经痛、偏头痛、腹腔手术后疼痛等。在欧、美、日等发达国家，鲨鱼软骨多 糖作为保健食品或保健药品长期应用于防治冠心病、心绞痛、心肌梗死等疾病，无明显的毒 副作用。近年来研究表明鲨鱼软骨中除富含钙、磷、镁等矿物质外，还含有多种粘多糖及硫 酸软骨素，具有显著的抗凝血、降血脂、抗病毒和抗肿瘤等功用，是不可多得的天然食品资 源。由于鲨鱼软骨粉具备促进人体软骨再生，抑制新生血管的天然功效，因此鲨鱼软骨粉是 一种优良的免疫增强原料。近年来，鲨鱼翅骨粉保健食品开发得到快速发展，但因为鲨鱼资 源量的制约，其在医药、食品等领域的广发应用受到制约。目前尚未发现鲨鱼软骨粉替代品 的技术报道，本发明为解决上述技术问题，提供一种鲨鱼软骨粉替代品及其制备方法。
技术实现要素：
为了克服上述现有技术的不足，实现鲨鱼软骨粉等海洋生物资源的功能活性物质 高效提取及广泛应用，本申请提供一种鲨鱼软骨粉替代品的制备方法，集成现代生物分离 技术、生物酶解技术、混菌微生物发酵技术、海洋生物资源营养调配技术，研制开发出高免 疫增强能力的鲨鱼软骨粉替代品，满足保健、医疗、食品等领域对鲨鱼软骨粉替代品的应用 需求，该工艺制备硫酸软骨素产品得率高，具有较高的抗氧化能力和显著的抗肿瘤功效，可 广泛应用于医养食品中。 本发明通过下述技术方案实现上述技术效果： 一种鲨鱼软骨粉替代品的制备方法，具体包括如下步骤： （1）预处理：将鲨鱼软骨粉和鲟鱼骨粉碎过100目筛，加入氢氧化纳溶液和氧化纳溶液， 于温度为40～50℃的条件下提取12～13h，过滤获得滤液，然后调整滤液的pH值为7.6～ 7.9； （2）复合酶解：向步骤（1）中的滤液中加入鲨鱼软骨粉质量比1～2%的复合酶制剂，在40 ～60℃的条件下酶解4～6h； （3）发酵液制备：向酶解液中加入酶解液质量比2%葡萄糖、0.15～0.20%(NH4)2SO4、0.10 ～0.15% KH2PO4、0.1%MgSO4，制备液体发酵培养基； （4）灭菌：在121℃条件下灭菌15min； （5）好氧发酵：向发酵液中加入发酵液质量比2～3%的复合微生物菌剂，在28～35℃条 3 CN 111567758 A 说 明 书 2/6 页 件下好氧发酵12～24h； （6）过滤：发酵结束后过滤除去菌体及不溶性固形物； （7）浓缩干燥：将步骤（6）过滤后的发酵液进行和干燥，获得鲨鱼软骨粉替代品。 上述步骤（1）中鲨鱼软骨粉和鲟鱼骨的质量比为1:3～5。 上述步骤(1)中所述氢氧化纳溶液的浓度为1～1.5%，所述氧化纳溶液的浓度为5 ～6%，所述的氢氧化纳溶液和氧化纳溶液的加入量均为鲨鱼软骨和鲟鱼骨重量和的2.5～ 3.5倍。 上述步骤(2)中所述复合酶制剂为木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶和胃蛋白酶 的中的一种或几种的混合物。 优选的，上述步骤(2)中所述复合酶制剂为木瓜蛋白酶和胃蛋白酶的混合，其质量 比为2:1。 优选的，上述步骤（3）中发酵液配制过程中添加0.5～1%的几丁聚糖。 上述步骤（5）中所述复合微生物为地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的混合菌，其接 种量量比为2:3。 上述复合微生物菌剂种子液制备方法为：在无菌条件下，采用LB培养基在28～32 ℃条件下培养24h，分别制得液体地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌种子液，要求种子液的有效 活菌数≥109cfu/mL；然后将二种芽孢杆菌的种子液按比例混合。 本发明提供一种鲨鱼软骨粉替代品的制备方法，所得鲨鱼软骨粉替代品免疫增强 功效优于鲨鱼软骨粉，可广泛的应用于医疗、食品和保健产品中。 本发明提供一种鲨鱼软骨粉替代品的制备方法，与现有技术相比，具有以下显著 优势： （1）本申请利用好氧菌（地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌）共同发酵酶解液，充分利用微生 物间的协同作用，提升鲨鱼软骨粉替代品的免疫增强功效；多菌种混合发酵不仅提高了鲨 鱼软骨粉替代品的得率，而且通过微生物间的发酵作用提升了鲨鱼软骨粉替代品的免疫增 强能力； （2）实验结果表明本申请在发酵液中添加一定量的几丁聚糖可以显著提升鲨鱼软骨粉 替代品的营养保健活性； （3）本发明采用酶解和混菌微生物发酵制备鲨鱼软骨粉替代品，显著提升了鲨鱼软骨 粉替代品的提取率和产品营养保健功效，实验结果表明在此工艺条件制备的鲨鱼软骨粉替 代品较直接食用鲨鱼软骨粉免疫增强功效显著提升，丰富了鲨鱼软骨粉类产品原料来源， 具有广阔的市场应用价值。
