技术摘要：
本发明属于医药生物技术领域，公开了一种上消化道肿瘤标志物——UGT3A2基因及其编码的蛋白，分别利用RT‑PCR、免疫组织化学技术检测食管癌、贲门癌、胃癌组织中UGT3A2基因的表达，并与配对的癌旁正常组织相比较，UGT3A2基因在癌组织中的表达显著高于配对的癌旁正常组织 全部
背景技术：
上消化道肿瘤不仅是世界上，也是我国的高发肿瘤，食管癌、贲门癌、胃癌是上消 化道最常见的恶性肿瘤，全球食管癌和胃癌的发病率分别位于第七位和第五位，肿瘤相关 死亡率分别位于第六位和第三位。在我国，食管癌和胃癌的发病率和死亡率均位于恶性肿 瘤的前列。自20世纪80年代以来，贲门腺癌的发病率在世界范围内呈现明显的上升趋势。我 国是贲门腺癌的发病率高和死亡率高的国家之一。贲门癌的早年研究曾被归为食管癌或胃 癌，近年，西方国家将食管胃结合部上下5cm内发生的腺癌归类为食管胃交界部或结合部腺 癌，并进一步根据解剖部位分为3类，即，第一类为：食管远端腺癌，食管胃交界部上1～5cm； 第二类为：贲门腺癌，食管胃交界部上1cm至交界部下2cm；第三类为：贲门下胃腺癌，食管胃 交界部下2～5cm。中国人以Ⅱ型为主(>97％)，Ⅰ型极少见(<2％)，Ⅲ型亦较少。王立东等关 于河南省高发区贲门腺癌发生部位分析的研究表明，有95％以上的贲门癌发生在交界线上 下约2cm范围内。因此，本专利中所指的贲门癌均为第二类——即贲门腺癌(Gastric cardia adenocarcinoma，GCA)。陈万青等通过对食管癌高发区上消化道肿瘤的流行调查发 现，在食管癌高发的同时，伴有贲门癌的高发。综上所述，食管癌、贲门癌、胃癌是我国常见 的上消化道恶性肿瘤，尤其是在我国食管癌高发区。 上消化道肿瘤起病隐匿，早期症状不明显，早期检出率低，确诊时，病期已较晚，侵 袭范围广，恶性程度高，已严重影响了病人接受根治性治疗的可能性以及治疗效果。上消化 道肿瘤的预后与确诊时疾病的进程密切相关，早发现、早诊断、早治疗对提高上消化道肿瘤 患者的生存至关重要。因此，对高危人群定期检查有利于降低患者的死亡率，提高长期存活 率。因此，急需找到一种敏感性高、特异性强的上消化道相关分子标志物，并利用这些指标 作为临床诊断、预后判断和个体化治疗的依据。目前发现的有关上消化道的分子指标极少， 被临床接受应用的则更少，分子指标对上消化道肿瘤患者的辅助诊断仍处于初步探索阶 段。因此，本领域亟需可用于上消化道肿瘤辅助诊断的分子标志物。 因此，找到新的上消化道肿瘤相关的肿瘤标志物，能够做到的早期诊断、早期治 疗，对提高患者的生存率、改善患者生存质量至关重要。本发明人所在研究团队发现UGT3A2 基因与上消化道肿瘤的发生发展有关。目前，关于UGT3A2基因在肿瘤相关领域的实验性报 道还是一片空白，特别是上消化道肿瘤研究领域。
技术实现要素：
针对现有技术存在的问题和不足，本发明的目的之一在于提供一种用于上消化道 肿瘤辅助诊断的标志物；本发明的目的之二在于提供一种UGT3A2基因或其编码的蛋白的检 3 CN 111593124 A 说 明 书 2/17 页 测试剂在制备用于上消化道肿瘤辅助诊断产品中的应用；本发明的目的之三在于提供一种 UGT3A2基因的表达抑制剂在制备治疗上消化肿瘤的药物中的应用。 本发明首先提供了一种可用于消化道肿瘤辅助诊断的分子标志物，所述分子标志 物为UGT3A2基因和/或UGT3A2基因的表达产物。所述UGT3A2基因的表达产物包括UGT3A2 mRNA和UGT3A2蛋白。所述UGT3A2基因(全名UDP glycosyltransferase family 3 member A2)，为编码UGT3A2蛋白的多核苷酸序列，其GenBank的登录号为NM_174914.4。所述UGT3A2 蛋白(UDP-glucuronosyltransferase 3A2)，其GenBank登录号为NP_777574.2。 通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测UGT3A2基因在上消化道肿瘤(食管鳞癌、贲门 腺癌、胃腺癌)癌组织和配对的癌旁正常组织中表达情况，发现UGT3A2 mRNA在食管鳞癌癌 组织中的表达高于配对的癌旁正常组织，UGT3A2 mRNA在贲门腺癌癌组织中的表达高于配 对的癌旁正常组织，UGT3A2 mRNA在胃腺癌癌组织中的表达高于配对的癌旁正常组织，说明 UGT3A2基因在上消化道肿瘤(食管鳞癌、贲门腺癌、胃腺癌)组织中均有不同程度的表达上 调。 通过免疫组织化学法检测UGT3A2蛋白在上消化道肿瘤(食管鳞癌、贲门腺癌、胃腺 癌)癌组织和配对的癌旁正常组织中表达情况，发现UGT3A2蛋白在食管鳞癌癌组织中的阳 性表达率显著高于配对的癌旁正常组织，UGT3A2蛋白在贲门腺癌癌组织中的阳性表达率显 著高于配对的癌旁正常组织，UGT3A2蛋白在胃腺癌癌组织中的阳性表达率显著高于配对的 癌旁正常组织。 通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测食管癌患者、贲门腺癌患者、胃腺癌患者和正 常人血清中UGT3A2蛋白的表达情况，发现食管鳞癌患者、贲门腺癌患者、胃腺癌患者血清中 UGT3A2的含量均显著高于正常人群，具有显著差异。 本发明还提供了一种UGT3A2基因或其编码的蛋白的检测试剂在制备用于上消化 道肿瘤辅助诊断产品中的应用。 根据上述的应用，优选地，所述检测试剂用于检测样本中UGT3A2基因的表达水平； 更加优选地，所述检测试剂用于检测样本中UGT3A2 mRNA和UGT3A2蛋白的表达水平。 根据上述的应用，优选地，所述产品通过RT-PCR、实时定量PCR、原位杂交、 northern blotting、高通量测序平台、免疫组织化学或酶联免疫吸附检测样本中UGT3A2基 因的表达水平。 根据上述的应用，优选地，所述产品中含有扩增UGT3A2基因的特异性引物、与 UGT3A2基因核苷酸序列杂交的探针或与UGT3A2蛋白特异性结合的抗体。 根据上述的应用，优选地，扩增UGT3A2基因的特异性引物序列具体如下： UGT3A2扩增的正向引物的核苷酸序列为：5'-GCAGGAGGCAACAGCACAT-3'(SEQ ID NO.1)； UGT3A2扩增的反向引物的核苷酸序列为：5'-ATGGAGCCCAAGGTCACAA-3'(SEQ ID NO.2)。 根据上述的应用，优选地，所述抗体为多克隆抗体或单克隆抗体。 根据上述的应用，优选地，所述上消化道肿瘤包括食管癌、贲门癌、胃癌。更加优选 地，所述食管癌为食管鳞癌，所述贲门癌为贲门腺癌，所述胃癌为胃腺癌。 根据上述的应用，优选地，所述样本为组织、血清或细胞。 4 CN 111593124 A 说 明 书 3/17 页 根据上述的应用，优选地，所述产品为芯片、制剂或试剂盒。 本发明还提供了一种UGT3A2基因的表达抑制剂在制备治疗上消化肿瘤的药物中 的应用。 根据上述的应用，优选地，所述UGT3A2基因的表达抑制剂包括特异靶向UGT3A2基 因的sgRNA，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.3～SEQ ID NO.5任一所示。 其中，sgRNA1：AATCATATCAAGTTATCAGT(SEQ ID NO.3)； sgRNA2：CAGAGGTCGAGCAAAATCAA(SEQ ID NO.4)； sgRNA3：GCAGCGAGTGCTTCTTCTAG(SEQ ID NO.5)。 本发明还提供了一种构建稳定敲除UGT3A2基因的细胞系的方法，包括以下步骤： (1)在核苷酸序列如SEQ ID NO .3～SEQ ID NO .5任一所示的sgRNA的5'端加上 CACCG得到正向寡核苷酸，根据在sgRNA核苷酸序列合成sgRNA的DNA互补链，并在DNA互补链 的5'端加上AAAC得到反向寡核苷酸，将正向寡核苷酸和反向寡核苷酸变性、退火、形成双 链； (2)将步骤(1)制备的双链与Cas9载体连接，得到Cas9单载体质粒； (3)将步骤(2)获得的Cas9单载体质粒进行慢病毒包装及检测，获得慢病毒重组表 达载体； (4)将步骤(3)制备的慢病毒重组表达载体在体外感染肿瘤细胞系(食管鳞癌细胞 系或胃腺癌细胞系)，筛选稳转细胞，获得稳定敲除UGT3A2基因的细胞株。 本发明还提供了一种利用上述方法构建的稳定敲除UGT3A2基因的食管鳞癌细胞 系和稳定敲除UGT3A2基因的胃腺癌细胞系。 与现有技术相比，本发明取得的积极有益效果为： (1)本发明提供了一种新的上消化道肿瘤标志物——UGT3A2基因和/或UGT3A2基 因的表达产物，UGT3A2在癌组织中的阳性表达率显著高于配对的癌旁正常组织，通过检测 样品(组织、血清或细胞)中UGT3A2基因表达产物的表达水平，可以对上消化道肿瘤(食管鳞 癌、贲门腺癌、胃腺癌)进行辅助诊断，为临床医生对上消化道肿瘤的诊断提供参考依据。 (2)本发明首次提出了UGT3A2基因和肿瘤细胞的增殖，侵袭和转移相关，UGT3A2能 够促进肿瘤细胞的增生、侵袭及转移、抑制肿瘤细胞凋亡，可以作为新的上消化道肿瘤治疗 靶点。本发明提供的特异靶向UGT3A2基因的sgRNA导向序列，该sgRNA导向序列利用CRISP- Cas9技术可以高效的抑制或敲除靶细胞中UGT3A2表达，诱导肿瘤细胞的凋亡，降低肿瘤细 胞的侵袭和转移能力等，进而抑制肿瘤细胞的生长，在肿瘤的治疗中具有重要意义。 附图说明 图1为UGT3A2 mRNA在食管鳞癌癌组织和配对的癌旁正常组织中的表达结果图。 图2为UGT3A2蛋白在食管鳞癌配对的癌旁正常食管鳞状上皮组织的免疫组织化学 染色显微图。 图3为UGT3A2蛋白在食管鳞癌癌组织的免疫组织化学染色显微图。 图4为ELISA检测食管鳞癌、贲门腺癌、胃腺癌、正常对照人群血清中UGT3A2蛋白含 量结果图，图中，ESCC表示食管鳞癌，GCA表示贲门腺癌，GAC表示胃腺癌。 图5为检测食管鳞癌组和正常对照组中UGT3A2的ROC曲线图。 5 CN 111593124 A 说 明 书 4/17 页 图6为UGT3A2 mRNA在贲门腺癌组织和配对的癌旁正常组织中的表达结果图。 图7为UGT3A2蛋白在贲门腺癌配对的癌旁正常腺上皮组织的免疫组织化学染色显 微图。 图8为UGT3A2蛋白在贲门腺癌癌组织的免疫组织化学染色显微图。 图9为检测贲门腺癌组和正常对照组中UGT3A2的ROC曲线图。 图10为UGT3A2 mRNA在胃腺癌癌组织和配对的癌旁正常组织中的表达结果图。 图11为UGT3A2蛋白在胃腺癌配对的癌旁正常胃腺上皮组织的免疫组织化学染色 显微图。 图12为UGT3A2蛋白在胃腺癌癌组织的免疫组织化学染色显微图。 图13为检测胃腺癌组和正常对照组中UGT3A2的ROC曲线图。 图14为合成用于转染的GV393的载体图。 图15为UGT3A2 mRNA在食管鳞癌细胞系EC9706、Eca-109、TE-1和食管正常粘膜上 皮SHEE的表达结果图。 图16为UGT3A2 mRNA在胃腺癌细胞系AGS、MGC80-3、SGC-7901和胃正常粘膜上皮细 胞GES-1的表达结果图。 图17为稳定敲除UGT3A2基因的食管鳞癌细胞系(TE1-sg)、胃腺癌细胞系(MGC80- 3-sg)的细胞增殖检测结果图；其中，A为稳定敲除UGT3A2基因的食管鳞癌细胞系TE1-sg；B 为稳定敲除UGT3A2基因的胃腺癌细胞系MGC80-3-sg。 图18为稳定敲除UGT3A2基因的食管鳞癌细胞系(TE1-sg)、胃腺癌细胞系(MGC80- 3-sg)的凋亡检测结果图。 图19为稳定敲除UGT3A2基因的食管鳞癌细胞系(TE1-sg)、胃腺癌细胞系(MGC80- 3-sg)的克隆形成检测结果图。 图20为稳定敲除UGT3A2基因的食管鳞癌细胞系(TE1-sg)、胃腺癌细胞系(MGC80- 3-sg)的Celigo划痕检测结果图。 图21为稳定敲除UGT3A2基因的食管鳞癌细胞系(TE1-sg)、胃腺癌细胞系(MGC80- 3-sg)的Transwell小室迁移检测结果图。 图22为稳定敲除UGT3A2基因的食管鳞癌细胞系(TE1-sg)、胃腺癌细胞系(MGC80- 3-sg)的Transwell小室侵袭检测结果图。
本发明属于医药生物技术领域，公开了一种上消化道肿瘤标志物——UGT3A2基因及其编码的蛋白，分别利用RT‑PCR、免疫组织化学技术检测食管癌、贲门癌、胃癌组织中UGT3A2基因的表达，并与配对的癌旁正常组织相比较，UGT3A2基因在癌组织中的表达显著高于配对的癌旁正常组织 全部
背景技术：
上消化道肿瘤不仅是世界上，也是我国的高发肿瘤，食管癌、贲门癌、胃癌是上消 化道最常见的恶性肿瘤，全球食管癌和胃癌的发病率分别位于第七位和第五位，肿瘤相关 死亡率分别位于第六位和第三位。在我国，食管癌和胃癌的发病率和死亡率均位于恶性肿 瘤的前列。自20世纪80年代以来，贲门腺癌的发病率在世界范围内呈现明显的上升趋势。我 国是贲门腺癌的发病率高和死亡率高的国家之一。贲门癌的早年研究曾被归为食管癌或胃 癌，近年，西方国家将食管胃结合部上下5cm内发生的腺癌归类为食管胃交界部或结合部腺 癌，并进一步根据解剖部位分为3类，即，第一类为：食管远端腺癌，食管胃交界部上1～5cm； 第二类为：贲门腺癌，食管胃交界部上1cm至交界部下2cm；第三类为：贲门下胃腺癌，食管胃 交界部下2～5cm。中国人以Ⅱ型为主(>97％)，Ⅰ型极少见(<2％)，Ⅲ型亦较少。王立东等关 于河南省高发区贲门腺癌发生部位分析的研究表明，有95％以上的贲门癌发生在交界线上 下约2cm范围内。因此，本专利中所指的贲门癌均为第二类——即贲门腺癌(Gastric cardia adenocarcinoma，GCA)。陈万青等通过对食管癌高发区上消化道肿瘤的流行调查发 现，在食管癌高发的同时，伴有贲门癌的高发。综上所述，食管癌、贲门癌、胃癌是我国常见 的上消化道恶性肿瘤，尤其是在我国食管癌高发区。 上消化道肿瘤起病隐匿，早期症状不明显，早期检出率低，确诊时，病期已较晚，侵 袭范围广，恶性程度高，已严重影响了病人接受根治性治疗的可能性以及治疗效果。上消化 道肿瘤的预后与确诊时疾病的进程密切相关，早发现、早诊断、早治疗对提高上消化道肿瘤 患者的生存至关重要。因此，对高危人群定期检查有利于降低患者的死亡率，提高长期存活 率。因此，急需找到一种敏感性高、特异性强的上消化道相关分子标志物，并利用这些指标 作为临床诊断、预后判断和个体化治疗的依据。目前发现的有关上消化道的分子指标极少， 被临床接受应用的则更少，分子指标对上消化道肿瘤患者的辅助诊断仍处于初步探索阶 段。因此，本领域亟需可用于上消化道肿瘤辅助诊断的分子标志物。 因此，找到新的上消化道肿瘤相关的肿瘤标志物，能够做到的早期诊断、早期治 疗，对提高患者的生存率、改善患者生存质量至关重要。本发明人所在研究团队发现UGT3A2 基因与上消化道肿瘤的发生发展有关。目前，关于UGT3A2基因在肿瘤相关领域的实验性报 道还是一片空白，特别是上消化道肿瘤研究领域。
技术实现要素：
针对现有技术存在的问题和不足，本发明的目的之一在于提供一种用于上消化道 肿瘤辅助诊断的标志物；本发明的目的之二在于提供一种UGT3A2基因或其编码的蛋白的检 3 CN 111593124 A 说 明 书 2/17 页 测试剂在制备用于上消化道肿瘤辅助诊断产品中的应用；本发明的目的之三在于提供一种 UGT3A2基因的表达抑制剂在制备治疗上消化肿瘤的药物中的应用。 本发明首先提供了一种可用于消化道肿瘤辅助诊断的分子标志物，所述分子标志 物为UGT3A2基因和/或UGT3A2基因的表达产物。所述UGT3A2基因的表达产物包括UGT3A2 mRNA和UGT3A2蛋白。所述UGT3A2基因(全名UDP glycosyltransferase family 3 member A2)，为编码UGT3A2蛋白的多核苷酸序列，其GenBank的登录号为NM_174914.4。所述UGT3A2 蛋白(UDP-glucuronosyltransferase 3A2)，其GenBank登录号为NP_777574.2。 通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测UGT3A2基因在上消化道肿瘤(食管鳞癌、贲门 腺癌、胃腺癌)癌组织和配对的癌旁正常组织中表达情况，发现UGT3A2 mRNA在食管鳞癌癌 组织中的表达高于配对的癌旁正常组织，UGT3A2 mRNA在贲门腺癌癌组织中的表达高于配 对的癌旁正常组织，UGT3A2 mRNA在胃腺癌癌组织中的表达高于配对的癌旁正常组织，说明 UGT3A2基因在上消化道肿瘤(食管鳞癌、贲门腺癌、胃腺癌)组织中均有不同程度的表达上 调。 通过免疫组织化学法检测UGT3A2蛋白在上消化道肿瘤(食管鳞癌、贲门腺癌、胃腺 癌)癌组织和配对的癌旁正常组织中表达情况，发现UGT3A2蛋白在食管鳞癌癌组织中的阳 性表达率显著高于配对的癌旁正常组织，UGT3A2蛋白在贲门腺癌癌组织中的阳性表达率显 著高于配对的癌旁正常组织，UGT3A2蛋白在胃腺癌癌组织中的阳性表达率显著高于配对的 癌旁正常组织。 通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测食管癌患者、贲门腺癌患者、胃腺癌患者和正 常人血清中UGT3A2蛋白的表达情况，发现食管鳞癌患者、贲门腺癌患者、胃腺癌患者血清中 UGT3A2的含量均显著高于正常人群，具有显著差异。 本发明还提供了一种UGT3A2基因或其编码的蛋白的检测试剂在制备用于上消化 道肿瘤辅助诊断产品中的应用。 根据上述的应用，优选地，所述检测试剂用于检测样本中UGT3A2基因的表达水平； 更加优选地，所述检测试剂用于检测样本中UGT3A2 mRNA和UGT3A2蛋白的表达水平。 根据上述的应用，优选地，所述产品通过RT-PCR、实时定量PCR、原位杂交、 northern blotting、高通量测序平台、免疫组织化学或酶联免疫吸附检测样本中UGT3A2基 因的表达水平。 根据上述的应用，优选地，所述产品中含有扩增UGT3A2基因的特异性引物、与 UGT3A2基因核苷酸序列杂交的探针或与UGT3A2蛋白特异性结合的抗体。 根据上述的应用，优选地，扩增UGT3A2基因的特异性引物序列具体如下： UGT3A2扩增的正向引物的核苷酸序列为：5'-GCAGGAGGCAACAGCACAT-3'(SEQ ID NO.1)； UGT3A2扩增的反向引物的核苷酸序列为：5'-ATGGAGCCCAAGGTCACAA-3'(SEQ ID NO.2)。 根据上述的应用，优选地，所述抗体为多克隆抗体或单克隆抗体。 根据上述的应用，优选地，所述上消化道肿瘤包括食管癌、贲门癌、胃癌。更加优选 地，所述食管癌为食管鳞癌，所述贲门癌为贲门腺癌，所述胃癌为胃腺癌。 根据上述的应用，优选地，所述样本为组织、血清或细胞。 4 CN 111593124 A 说 明 书 3/17 页 根据上述的应用，优选地，所述产品为芯片、制剂或试剂盒。 本发明还提供了一种UGT3A2基因的表达抑制剂在制备治疗上消化肿瘤的药物中 的应用。 根据上述的应用，优选地，所述UGT3A2基因的表达抑制剂包括特异靶向UGT3A2基 因的sgRNA，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.3～SEQ ID NO.5任一所示。 其中，sgRNA1：AATCATATCAAGTTATCAGT(SEQ ID NO.3)； sgRNA2：CAGAGGTCGAGCAAAATCAA(SEQ ID NO.4)； sgRNA3：GCAGCGAGTGCTTCTTCTAG(SEQ ID NO.5)。 本发明还提供了一种构建稳定敲除UGT3A2基因的细胞系的方法，包括以下步骤： (1)在核苷酸序列如SEQ ID NO .3～SEQ ID NO .5任一所示的sgRNA的5'端加上 CACCG得到正向寡核苷酸，根据在sgRNA核苷酸序列合成sgRNA的DNA互补链，并在DNA互补链 的5'端加上AAAC得到反向寡核苷酸，将正向寡核苷酸和反向寡核苷酸变性、退火、形成双 链； (2)将步骤(1)制备的双链与Cas9载体连接，得到Cas9单载体质粒； (3)将步骤(2)获得的Cas9单载体质粒进行慢病毒包装及检测，获得慢病毒重组表 达载体； (4)将步骤(3)制备的慢病毒重组表达载体在体外感染肿瘤细胞系(食管鳞癌细胞 系或胃腺癌细胞系)，筛选稳转细胞，获得稳定敲除UGT3A2基因的细胞株。 本发明还提供了一种利用上述方法构建的稳定敲除UGT3A2基因的食管鳞癌细胞 系和稳定敲除UGT3A2基因的胃腺癌细胞系。 与现有技术相比，本发明取得的积极有益效果为： (1)本发明提供了一种新的上消化道肿瘤标志物——UGT3A2基因和/或UGT3A2基 因的表达产物，UGT3A2在癌组织中的阳性表达率显著高于配对的癌旁正常组织，通过检测 样品(组织、血清或细胞)中UGT3A2基因表达产物的表达水平，可以对上消化道肿瘤(食管鳞 癌、贲门腺癌、胃腺癌)进行辅助诊断，为临床医生对上消化道肿瘤的诊断提供参考依据。 (2)本发明首次提出了UGT3A2基因和肿瘤细胞的增殖，侵袭和转移相关，UGT3A2能 够促进肿瘤细胞的增生、侵袭及转移、抑制肿瘤细胞凋亡，可以作为新的上消化道肿瘤治疗 靶点。本发明提供的特异靶向UGT3A2基因的sgRNA导向序列，该sgRNA导向序列利用CRISP- Cas9技术可以高效的抑制或敲除靶细胞中UGT3A2表达，诱导肿瘤细胞的凋亡，降低肿瘤细 胞的侵袭和转移能力等，进而抑制肿瘤细胞的生长，在肿瘤的治疗中具有重要意义。 附图说明 图1为UGT3A2 mRNA在食管鳞癌癌组织和配对的癌旁正常组织中的表达结果图。 图2为UGT3A2蛋白在食管鳞癌配对的癌旁正常食管鳞状上皮组织的免疫组织化学 染色显微图。 图3为UGT3A2蛋白在食管鳞癌癌组织的免疫组织化学染色显微图。 图4为ELISA检测食管鳞癌、贲门腺癌、胃腺癌、正常对照人群血清中UGT3A2蛋白含 量结果图，图中，ESCC表示食管鳞癌，GCA表示贲门腺癌，GAC表示胃腺癌。 图5为检测食管鳞癌组和正常对照组中UGT3A2的ROC曲线图。 5 CN 111593124 A 说 明 书 4/17 页 图6为UGT3A2 mRNA在贲门腺癌组织和配对的癌旁正常组织中的表达结果图。 图7为UGT3A2蛋白在贲门腺癌配对的癌旁正常腺上皮组织的免疫组织化学染色显 微图。 图8为UGT3A2蛋白在贲门腺癌癌组织的免疫组织化学染色显微图。 图9为检测贲门腺癌组和正常对照组中UGT3A2的ROC曲线图。 图10为UGT3A2 mRNA在胃腺癌癌组织和配对的癌旁正常组织中的表达结果图。 图11为UGT3A2蛋白在胃腺癌配对的癌旁正常胃腺上皮组织的免疫组织化学染色 显微图。 图12为UGT3A2蛋白在胃腺癌癌组织的免疫组织化学染色显微图。 图13为检测胃腺癌组和正常对照组中UGT3A2的ROC曲线图。 图14为合成用于转染的GV393的载体图。 图15为UGT3A2 mRNA在食管鳞癌细胞系EC9706、Eca-109、TE-1和食管正常粘膜上 皮SHEE的表达结果图。 图16为UGT3A2 mRNA在胃腺癌细胞系AGS、MGC80-3、SGC-7901和胃正常粘膜上皮细 胞GES-1的表达结果图。 图17为稳定敲除UGT3A2基因的食管鳞癌细胞系(TE1-sg)、胃腺癌细胞系(MGC80- 3-sg)的细胞增殖检测结果图；其中，A为稳定敲除UGT3A2基因的食管鳞癌细胞系TE1-sg；B 为稳定敲除UGT3A2基因的胃腺癌细胞系MGC80-3-sg。 图18为稳定敲除UGT3A2基因的食管鳞癌细胞系(TE1-sg)、胃腺癌细胞系(MGC80- 3-sg)的凋亡检测结果图。 图19为稳定敲除UGT3A2基因的食管鳞癌细胞系(TE1-sg)、胃腺癌细胞系(MGC80- 3-sg)的克隆形成检测结果图。 图20为稳定敲除UGT3A2基因的食管鳞癌细胞系(TE1-sg)、胃腺癌细胞系(MGC80- 3-sg)的Celigo划痕检测结果图。 图21为稳定敲除UGT3A2基因的食管鳞癌细胞系(TE1-sg)、胃腺癌细胞系(MGC80- 3-sg)的Transwell小室迁移检测结果图。 图22为稳定敲除UGT3A2基因的食管鳞癌细胞系(TE1-sg)、胃腺癌细胞系(MGC80- 3-sg)的Transwell小室侵袭检测结果图。
