技术摘要：
本发明涉及一种生防制剂的制备方法，包括以下步骤：发酵保藏编号为CGMCC No.16746的雷格链霉菌(Streptomyces regensis)，得到发酵液。该方法制备的生防制剂可以用于生物防治领域，对花布灯蛾、美国白蛾、小菜蛾、亚洲玉米螟、二斑叶螨、菜青虫、甘蓝夜蛾、马铃薯瓢虫、  全部
背景技术：
放线菌是最早发现有生防作用的一类微生物，国内外相继报道放线菌中的多种链 霉菌能够产生新抗虫抗生素，阿维菌素的发现和成功开发被认为是抗生素在农业生产中应 用的第三个里程碑，是农业生产中最具潜力的抗生素。近几年报道的3000多种新抗生素中， 杀虫抗生素约占5％。发现了一些具有发展潜力的抗生素品种。但现有的抗生素普遍存在杀 虫效率低、稳定性差等问题。因此，研制开发一种高效、稳定的新型链霉菌或其生防制品对 农林业可持续发展至关重要。
技术实现要素：
鉴于现有技术所存在的问题，本发明提供一种新型的生防制剂的制备方法，通过 该方法制备的生防制剂具有杀虫活性高、杀虫谱广、遗传稳定性好等特点；具有对温度耐受 性强、杀虫活性稳定、光稳定性好、易贮存等优点，具有很好开发应用价值。 本发明解决上述技术问题的技术方案如下： 本发明提供一株链霉菌，该菌株为雷格链霉菌(Streptomyces  regensis)，其保藏 编号为CGMCC  No.16746。 在本申请中，发明人将其命名为LKY208。于2018年11月15日将该菌株保藏于中国 微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC) ,该保藏中心地址为北京市朝阳区北 辰西路1号院3号。 该菌株在高氏一号培养基上生长茂盛，气生菌丝丰茂，28℃培养1～2d时，菌落光 滑、无孢子生成，第3d开始可见气丝黄绿色、淡黄绿色、淡黄色，4d后基质颜色逐渐变为黄 色。在显微镜下观察，基内菌丝无横膜，不断裂；电镜观察结果表明孢子丝短，时常不规则， 偶见短而松散螺旋状，孢子椭圆形、柱形，表面光滑或不规则褶皱。 发明人在探索链霉菌在生物防治领域(例如花布灯蛾的生物防治)的突破时，从采 自吉林省不同地区的土壤中分离得到217株放线菌进行筛选及防治效果测定，最终获得了1 株能够有效防治花布灯蛾幼虫的拮抗菌株，将其命名为LKY208，并对其发酵液稳定性及菌 株分类地位进行了系统研究，为生物防治提供新的生防因子。发明人在研究中发现，该链霉 菌具有杀虫活性高、杀虫谱广、遗传稳定性好等特点；菌株发酵液具有对温度耐受性强、杀 虫活性稳定、光稳定性好、耐贮存等优点，具有很好开发应用价值。 本发明还提供上述链霉菌在农林害虫防治中的应用。所述害虫可以选自花布灯 蛾、美国白蛾、小菜蛾、亚洲玉米螟、二斑叶螨、菜青虫、甘蓝夜蛾、马铃薯瓢虫和桃蚜、斑须 3 CN 111593002 A 说　明　书 2/11 页 蝽中的一种或几种的组合。 本发明提供的链霉菌具有杀虫活性高、杀虫谱广和遗传稳定性好等优点。经过实 验验证，对于上述花布灯蛾、美国白蛾、小菜蛾、亚洲玉米螟、二斑叶螨、菜青虫、甘蓝夜蛾、 马铃薯瓢虫、桃蚜均具有杀虫作用。其中对鳞翅目的害虫杀虫效果很明显。对美国白蛾幼虫 的有较高的杀虫活性，48h校正死亡率为72.1％，对菜青虫和甘蓝夜蛾48h的校正死亡率分 别为43.9％和36.5％，对二斑叶螨亦具有较好的杀虫活性，48h的校正死亡率达56％；对小 菜蛾幼虫的杀虫活性仅次于花布灯蛾幼虫和美国白蛾幼虫，校正死亡率为69.5％；尤其，对 鳞翅目花布灯蛾幼虫的杀虫活性最高，48h的校正死亡率可达74.1％。 本发明还提供一种生防制剂，包括上述的链霉菌和/或上述的链霉菌的发酵液,所 述链霉菌为雷格链霉菌(Streptomyces  regensis)，其保藏编号为CGMCC  No.16746。 该生防制剂具有杀虫活性高、杀虫谱广、遗传稳定性好等特点,且具有对温度耐受 性强、杀虫活性稳定、光稳定性好、耐贮存等优点，具有很好开发应用价值。 进一步，上述链霉菌的发酵液的通过以下方法制备：发酵保藏编号为CGMCC  No.16746的雷格链霉菌(Streptomyces  regensis)，得到发酵液。 本发明还提供一种上述生防制剂在害虫防治中的应用。所述害虫选自花布灯蛾、 美国白蛾、小菜蛾、亚洲玉米螟、二斑叶螨、菜青虫、甘蓝夜蛾、马铃薯瓢虫和桃蚜中的一种 或几种的组合。 本发明提供一种生防制剂的制备方法，包括以下步骤：发酵保藏编号为CGMCC  No.16746的雷格链霉菌(Streptomyces  regensis)，得到发酵液。 进一步，发酵过程中的温度为25～28℃。采用该温度有利于上述链霉菌的生长，从 而保证生物防治的效果。 进一步，还包括离心发酵液的步骤。 在实际应用时，为方便存储，也可以采用干燥的方式(例如冻干)将发酵液制备成 粉末，待使用之前，将粉末用溶剂溶解后再施用在待防治的对象上。 进一步，发酵保藏编号为CGMCC  No .16746的雷格链霉菌的方法可以包括以下步 骤：将保藏编号为CGMCC  No.16746的雷格链霉菌接种至高氏一号斜面培养基上培养，再将 培养得到的菌饼接种至发酵培养基进行培养，之后收集发酵液。 进一步，所述高氏一号斜面培养基的配方包括：每1000mL蒸馏水包括可溶性淀粉 20g，K2HPO4  0.5g，KNO3  1g，MgSO4·7H2O  0.5g，NaCl  0.5g，FeSO4·7H2O  0.01g，琼脂20g， pH7.0～7.2。 进一步，所述发酵培养基的配方包括：溶剂为水，以质量百分数计，花生饼粉 2.5％、可溶性淀粉5.0％、酵母粉0.08％、葡萄糖0.02％、(NH4)2SO4  0.08％、NaCl  0.2％、 CaCO3  0.32％，pH  7.0～7.2。 进一步，将保藏编号为CGMCC  No.16746的雷格链霉菌接种至高氏一号斜面培养基 上，28℃条件培养7d后，取菌饼接种至发酵培养基中，温度为28℃，振荡培养5d。 本发明的有益效果：采用上述方法制备的生防制剂可以用于生物防治领域，对花 布灯蛾、美国白蛾、小菜蛾、亚洲玉米螟、二斑叶螨、菜青虫、甘蓝夜蛾、马铃薯瓢虫、桃蚜进 行防治。具有杀虫活性高、杀虫谱广、遗传稳定性好等特点，对温度的耐受性强、杀虫活性稳 定、光稳定性好、耐贮存等，具有很好的开发应用价值。 4 CN 111593002 A 说　明　书 3/11 页 本发明可以提供上述生防制剂的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：将上述生 防制剂施用在需要防治的植物上。 进一步，所述植物包括被以下害虫危害的植物；所述害虫选自花布灯蛾、美国白 蛾、小菜蛾、亚洲玉米螟、二斑叶螨、菜青虫、甘蓝夜蛾、马铃薯瓢虫和桃蚜中的一种或几种 的组合。 本发明提供的生防制剂具有杀虫活性高、杀虫谱广和遗传稳定性好等优点。经过 实验验证，对于上述花布灯蛾、美国白蛾、小菜蛾、亚洲玉米螟、二斑叶螨、菜青虫、甘蓝夜 蛾、马铃薯瓢虫、桃蚜均具有杀虫作用，因此，对于由上述害虫导致的植物的病虫害具有很 好的防治效果。 附图说明 图1为温度对菌株发酵液杀虫活性的影响的结果。 图2为pH对菌株发酵液杀虫活性的影响的结果。 图3为光照对菌株发酵液杀虫活性的影响的结果。 图4为贮藏时间和温度对菌株发酵液杀虫活性的影响的结果。 图5继代培养对菌株发酵液杀虫活性的影响的结果。 图6菌株LKY208的电镜照片。 图7菌株LKY208及相关菌株的系统发育树。