技术摘要：
本发明公开了一种对组织样本进行免疫标记的方法，具体地，本发明(a)提供一标记体系，所述标记体系含有待进行免疫标记的组织样本、用于对所述组织样本进行标记的探针和缓冲液；和(b)将所述的标记体系置于电场作用下进行标记处理，从而使得所述的探针进入所述组织样本内 全部
背景技术：
研究生物医学组织在细胞和亚细胞尺度的三维空间结构，是理解其正常功能的基 础，也能为掌握器官疾病的发生和发展过程提供依据。以前对人和其它动物组织的研究主 要为解剖学尺度的研究，而在细胞和亚细胞尺度的研究则受限于解析能力的限制，通常只 能研究组织切片的结构信息。基于组织连续切片的三维重构技术研究组织则非常耗时和费 力。 近年来组织透明化技术的迅猛发展使人们获得完整生物组织的高分辨率三维结 构成为可能，目前最常用的是CLARITY技术，其通过将水凝胶(Hydrogel)的交联形成的多聚 物与组织中的生物分子(蛋白和DNA等)固定，并通过使用十二烷基硫酸钠(SDS)去掉细胞膜 等对光线具有很强散射的生物分子，能在保证组织结构不被破坏的前提下，快速将生物组 织透明化，并实现完整组织的深度(～6mm)三维成像。CLARITY技术最早应用于小鼠脑组织 的透明化和结构研究，并逐步拓展到整个小鼠中主要器官(肾脏、肝等)，展示了这种技术在 获取生物组织完整三维高分辨率结构信息方面的巨大潜在价值。 然而，将CLARITY技术用于研究完整组织三维高分辨率结构时，标记探针(特别是 抗体)从完整组织的表面到达组织内部需要很长的时间，极大的阻碍了该技术的推广和应 用。例如，对于5mm厚的完整小鼠大脑样品，一个完整免疫标记需要至少1.5月的时间才能完 成。 因此，本领域迫切需要开发一种能够极大程度的缩短组织样本的免疫荧光标记时 间，并且还能保持组织内部完整性的快速免疫标记方法。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种能够极大程度的缩短组织样本的免疫荧光标记时间，并 且还能保持组织内部完整性的快速免疫荧光标记方法。 本发明的第一方面提供了一种对组织样本进行免疫标记的方法，包括步骤： (a)提供一标记体系，所述标记体系含有待进行免疫标记的组织样本、用于对所述 组织样本进行标记的探针和缓冲液；和 (b)将所述的标记体系置于电场作用下进行标记处理，从而使得所述的探针进入 所述组织样本内部，从而对所述组织样本进行免疫标记，获得经免疫标记的组织样本。 在另一优选例中，在步骤(b)中，所述标记处理的时间为1min-5h时，较佳地， 20min-1h，更佳地，30min。 4 CN 111579769 A 说 明 书 2/6 页 在另一优选例中，在步骤(b)中，所述标记处理的温度为4-50℃，较佳地，10-40℃， 更佳地，37℃。 在另一优选例中，所述的方法还包括：(c)对所述经免疫标记的组织样本进行检 测。 在另一优选例中，在步骤(c)中，所述的检测包括荧光检测。 在另一优选例中，所述的电场具有以下特征：电压为25V，电极间距离为2.2cm,电 场强度为11.3V/cm。 在另一优选例中，所述的标记体系的pH为5-11。 在另一优选例中，所述的探针包括：抗体、核酸探针。 在另一优选例中，所述的探针带有可检测标志物。 在另一优选例中，所述的可检测标志物包括：荧光团、生色团、化学发光团。 在另一优选例中，当所述的探针为抗体时，所述标记体系的pH为5-11。 在另一优选例中，所述抗体为单克隆抗体。 在另一优选例中，所述单克隆抗体的等电位(PI)为6.4-9.0。 在另一优选例中，所述的组织样本是表达内源荧光蛋白的组织样本。 在另一优选例中，所述荧光蛋白为GFP蛋白。 在另一优选例中，所述组织样本为脑组织、胃组织、肝组织、肺组织或其组合。 在另一优选例中，所述组织样本来源于哺乳动物、人、或其组合。 在另一优选例中，所述组织样本来源于小鼠、大鼠、人、或其组合。 在另一优选例中，所述的组织样本为经透明化处理的样本。 在另一优选例中，所述样本为片状样本，具有第一主表面和第二主表面。 在另一优选例中，所述的片状样本的厚度为2-20mm，较佳地，3-18mm，更佳地，5- 10mm。 在另一优选例中，所述的片状样本的截面积为1-100cm2。 在另一优选例中，所述的电场通过位于所述样本左右两侧或上下两侧的电极施 加。 在另一优选例中，所述的电场通过位于所述样本的第一主表面和第二主表面外侧 的电极施加。 在另一优选例中，所述探针进入组织样本内部的时间为20min-1h，较佳地，30- 50min，更佳地，30-40min。 在另一优选例中，所述探针进入组织样本内部的时间比传统方法缩短了800倍。 在另一优选例中，所述的免疫标记为免疫荧光标记。 在另一优选例中，所述的方法为非诊断性和非治疗性的体外方法。 本发明第二方面提供了一种对组织样本进行免疫标记的装置，所述装置包括： 用于放置所述组织样本的容器；其中，所述容器用于盛放一标记体系，所述标记体 系含有待进行免疫标记的组织样本、用于对所述组织样本进行标记的探针和缓冲液； 用于产生电场的电极对，其中，所述电极对位于所述组织样本的左右两侧或上下 两侧，从而产生驱动所述探针进入所述的组织样本内部的电场；和 电源，所述电源与所述电极对电连接。 5 CN 111579769 A 说 明 书 3/6 页 在另一优选例中，所述容器为圆形。 在另一优选例中，所述容器的直径为1-10cm，较佳地，3-4cm，更佳地，3.5cm。 在另一优选例中，所述电极直径为0.1-1mm，较佳地，0.2-0 .8mm，更佳地，0.3- 0.6mm；所述电极的长度为2-15cm，较佳地，4-10cm，更佳地，5-9cm。 本发明第三方面提供了一种对组织样本进行免疫标记的试剂盒，所述试剂盒含 有： 第一容器，所述容器中含有待进行免疫标记的组织样本； 第二容器，所述容器中含有对所述组织样本进行标记的探针； 第三容器，所述容器中含有缓冲液，所述缓冲液的pH为5-11； 第四容器，所述容器中含有电极板、电源插头，形成一个电场强度(V/cm)为5-15的 电场。 标签或说明书，所述标签或说明书注明所述试剂盒用于对组织样本进行免疫标 记。 应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具 体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。 附图说明 图1显示了IgG在电场作用下的运动情况。 图2显示了在组织凝胶复合物中IgG的荧光定量结果。 图3显示了电场的免疫染色后Thy1-YFP小鼠脑片的YFP信号情况。 图4显示了电场的Thy1-YFP小鼠脑片的anti-YFP免疫染色结果。
本发明公开了一种对组织样本进行免疫标记的方法，具体地，本发明(a)提供一标记体系，所述标记体系含有待进行免疫标记的组织样本、用于对所述组织样本进行标记的探针和缓冲液；和(b)将所述的标记体系置于电场作用下进行标记处理，从而使得所述的探针进入所述组织样本内 全部
背景技术：
研究生物医学组织在细胞和亚细胞尺度的三维空间结构，是理解其正常功能的基 础，也能为掌握器官疾病的发生和发展过程提供依据。以前对人和其它动物组织的研究主 要为解剖学尺度的研究，而在细胞和亚细胞尺度的研究则受限于解析能力的限制，通常只 能研究组织切片的结构信息。基于组织连续切片的三维重构技术研究组织则非常耗时和费 力。 近年来组织透明化技术的迅猛发展使人们获得完整生物组织的高分辨率三维结 构成为可能，目前最常用的是CLARITY技术，其通过将水凝胶(Hydrogel)的交联形成的多聚 物与组织中的生物分子(蛋白和DNA等)固定，并通过使用十二烷基硫酸钠(SDS)去掉细胞膜 等对光线具有很强散射的生物分子，能在保证组织结构不被破坏的前提下，快速将生物组 织透明化，并实现完整组织的深度(～6mm)三维成像。CLARITY技术最早应用于小鼠脑组织 的透明化和结构研究，并逐步拓展到整个小鼠中主要器官(肾脏、肝等)，展示了这种技术在 获取生物组织完整三维高分辨率结构信息方面的巨大潜在价值。 然而，将CLARITY技术用于研究完整组织三维高分辨率结构时，标记探针(特别是 抗体)从完整组织的表面到达组织内部需要很长的时间，极大的阻碍了该技术的推广和应 用。例如，对于5mm厚的完整小鼠大脑样品，一个完整免疫标记需要至少1.5月的时间才能完 成。 因此，本领域迫切需要开发一种能够极大程度的缩短组织样本的免疫荧光标记时 间，并且还能保持组织内部完整性的快速免疫标记方法。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种能够极大程度的缩短组织样本的免疫荧光标记时间，并 且还能保持组织内部完整性的快速免疫荧光标记方法。 本发明的第一方面提供了一种对组织样本进行免疫标记的方法，包括步骤： (a)提供一标记体系，所述标记体系含有待进行免疫标记的组织样本、用于对所述 组织样本进行标记的探针和缓冲液；和 (b)将所述的标记体系置于电场作用下进行标记处理，从而使得所述的探针进入 所述组织样本内部，从而对所述组织样本进行免疫标记，获得经免疫标记的组织样本。 在另一优选例中，在步骤(b)中，所述标记处理的时间为1min-5h时，较佳地， 20min-1h，更佳地，30min。 4 CN 111579769 A 说 明 书 2/6 页 在另一优选例中，在步骤(b)中，所述标记处理的温度为4-50℃，较佳地，10-40℃， 更佳地，37℃。 在另一优选例中，所述的方法还包括：(c)对所述经免疫标记的组织样本进行检 测。 在另一优选例中，在步骤(c)中，所述的检测包括荧光检测。 在另一优选例中，所述的电场具有以下特征：电压为25V，电极间距离为2.2cm,电 场强度为11.3V/cm。 在另一优选例中，所述的标记体系的pH为5-11。 在另一优选例中，所述的探针包括：抗体、核酸探针。 在另一优选例中，所述的探针带有可检测标志物。 在另一优选例中，所述的可检测标志物包括：荧光团、生色团、化学发光团。 在另一优选例中，当所述的探针为抗体时，所述标记体系的pH为5-11。 在另一优选例中，所述抗体为单克隆抗体。 在另一优选例中，所述单克隆抗体的等电位(PI)为6.4-9.0。 在另一优选例中，所述的组织样本是表达内源荧光蛋白的组织样本。 在另一优选例中，所述荧光蛋白为GFP蛋白。 在另一优选例中，所述组织样本为脑组织、胃组织、肝组织、肺组织或其组合。 在另一优选例中，所述组织样本来源于哺乳动物、人、或其组合。 在另一优选例中，所述组织样本来源于小鼠、大鼠、人、或其组合。 在另一优选例中，所述的组织样本为经透明化处理的样本。 在另一优选例中，所述样本为片状样本，具有第一主表面和第二主表面。 在另一优选例中，所述的片状样本的厚度为2-20mm，较佳地，3-18mm，更佳地，5- 10mm。 在另一优选例中，所述的片状样本的截面积为1-100cm2。 在另一优选例中，所述的电场通过位于所述样本左右两侧或上下两侧的电极施 加。 在另一优选例中，所述的电场通过位于所述样本的第一主表面和第二主表面外侧 的电极施加。 在另一优选例中，所述探针进入组织样本内部的时间为20min-1h，较佳地，30- 50min，更佳地，30-40min。 在另一优选例中，所述探针进入组织样本内部的时间比传统方法缩短了800倍。 在另一优选例中，所述的免疫标记为免疫荧光标记。 在另一优选例中，所述的方法为非诊断性和非治疗性的体外方法。 本发明第二方面提供了一种对组织样本进行免疫标记的装置，所述装置包括： 用于放置所述组织样本的容器；其中，所述容器用于盛放一标记体系，所述标记体 系含有待进行免疫标记的组织样本、用于对所述组织样本进行标记的探针和缓冲液； 用于产生电场的电极对，其中，所述电极对位于所述组织样本的左右两侧或上下 两侧，从而产生驱动所述探针进入所述的组织样本内部的电场；和 电源，所述电源与所述电极对电连接。 5 CN 111579769 A 说 明 书 3/6 页 在另一优选例中，所述容器为圆形。 在另一优选例中，所述容器的直径为1-10cm，较佳地，3-4cm，更佳地，3.5cm。 在另一优选例中，所述电极直径为0.1-1mm，较佳地，0.2-0 .8mm，更佳地，0.3- 0.6mm；所述电极的长度为2-15cm，较佳地，4-10cm，更佳地，5-9cm。 本发明第三方面提供了一种对组织样本进行免疫标记的试剂盒，所述试剂盒含 有： 第一容器，所述容器中含有待进行免疫标记的组织样本； 第二容器，所述容器中含有对所述组织样本进行标记的探针； 第三容器，所述容器中含有缓冲液，所述缓冲液的pH为5-11； 第四容器，所述容器中含有电极板、电源插头，形成一个电场强度(V/cm)为5-15的 电场。 标签或说明书，所述标签或说明书注明所述试剂盒用于对组织样本进行免疫标 记。 应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具 体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。 附图说明 图1显示了IgG在电场作用下的运动情况。 图2显示了在组织凝胶复合物中IgG的荧光定量结果。 图3显示了电场的免疫染色后Thy1-YFP小鼠脑片的YFP信号情况。 图4显示了电场的Thy1-YFP小鼠脑片的anti-YFP免疫染色结果。
