技术摘要：
本发明提供一种富硒木耳中硒形态的检测方法，包括:步骤1，样品处理：富硒干木耳反复磨碎，以得到木耳粉末；步骤2，样品酶解：称取木耳粉末作为待测样品，装于离心管中，向该离心管中加入浓度不低于0.0033g/ml的蛋白水解酶溶液，以得到样品溶液，其中，待测样品与蛋白水  全部
背景技术：
作为人及动物机体必需微量元素，硒(Se)是谷胱甘肽过氧化物酶等30多种酶的活 性中心，在清除各种氧自由基的生化过程中无可替代！ 基于抗氧化功能，硒在多种人类疾病的预防和治疗中都可能发挥重要作用，如防 治克山病、大骨节病、关节炎；预防和治疗心脑血管疾病、糖尿病；增强免疫、抗衰老；防癌、 抗癌，提高放化疗效果并减轻放化疗副作用；解重金属毒等。 作为人体必需微量元素，硒(Se)的摄入不足将给人类健康带来危害，中国72％的 人口存在不同程度的硒摄入不足。美国食品与营养委员会推荐人均摄取量50-200μg/d；国 际硒学会推荐人均摄取量60μg/d；中国营养学会推荐成人摄取量60μg/d(2013年)。中国营 养学会对部分城市进行的营养膳食调查结果表明，我国成人摄硒量不足27μg/d。 中国人口摄硒不足，缘于我国为缺硒国，1094个县市土壤硒背景值调查，达到国际 公认临界值(0.1mg/kg)的只有1/3，其中含量≤0.02mg/kg的占29％。从东北三省起斜穿至 云贵高原，为一条低硒地带，占国土面积的70％。吉林省为特别严重缺硒地区！处在这条缺 硒带上，居民易患缺硒病。 对缺硒的认识，促进了我国硒强化食品开发热潮。富硒茶、富硒谷物制品、富硒豆 制品、富硒乳制品、富硒食用菌、富硒饮料和矿泉水等层出不穷。有的是以添加剂的形式在 加工环节加入食品中，有的是在有限的几个富硒地区种植食品原料，还有的非富硒地区在 栽培基质(土壤)中添加无机硒或叶面喷施硒化物意图达到农产品富硒的效果。畜禽产品强 化硒则是在饲料中添加硒化物或注射含硒药物。 目前，市面可见的富硒农产品有：富硒蒜、富硒大米、富硒小麦、富硒绿豆、富硒马 铃薯、富硒花生、富硒南瓜、富硒芝麻、富硒菜籽、富硒萝卜、富硒食用菌等。我省富硒农产品 见有富硒大米、富硒木耳、富硒苹果等。 因普遍缺硒，我国废除了GB13105-1991《食品中硒限量卫生标准》等所有食品中硒 的限量。 然而，在所有食品中无节制强化硒，将会导致国人硒摄入过量，硒在体内的安全含 量存在一个较小的范围，硒元素有益和有毒主要取决于该元素存在的化学形态和含量，因 此，建立灵敏度高、稳定性好、准确可靠的硒形态检测方法尤为重要。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明提供一种富硒黑木耳中硒形态检测方法，灵敏度高、稳定性好、 准确可靠，是测定富硒黑木耳中硒形态含量的有效方法。 根据本发明提供实施例的一种富硒黑木耳中硒形态检测方法，包括以下步骤： 步骤1，样品处理：富硒干木耳反复磨碎，以得到木耳粉末； 3 CN 111610263 A 说　明　书 2/11 页 步骤2，样品酶解：称取木耳粉末作为待测样品，装于离心管中，向该离心管中加入 浓度为0.002-0.004g/ml的蛋白水解酶溶液，以得到样品溶液，其中，待测样品与蛋白水解 酶的质量比为1：(40-80)，优选为，1:60； 步骤3，样品提取：将上述样品溶液采取超声波提取，在超声波期间，每间隔预设时 间内摇晃所述离心管； 步骤4，样品离心：将经过超声波提取的样品溶液离心，以得到上清液； 步骤5，过滤：将所述上清液通过滤膜过滤后，得到待测样液； 步骤6，仪器测定：对步骤5中得到的待测样液采用高效液相色谱法与氢化物发生- 原子荧光光谱法测定样品中的硒形态。 优选地，所述步骤6中所用仪器检测条件为： 色谱条件：HamiltonPRP-X100离子交换色谱柱(250mm*4 .1mm，10μm)，流动相为 40mmol/L磷酸氢二铵，用20％甲酸调节pH值为5.8-6.0，流量1.0mL/min，进样体积100μL； 原子荧光光谱条件：负高压300V，灯总电流90mA，载气流量400mL/min，屏蔽气流量 600mL/min，原子化器高度8mm； 氢化物发生条件：碘化钾0.4％ 氢氧化钾0.35％(氧化剂)，硼氢化钾2％ 氢氧化 钾0.35％(还原剂)，盐酸7％(载流)，泵转速80r/min。碘化钾的作用在于可将硒酸还原为亚 硒酸，硼氢化钾的作用为与盐酸反应产生活性氢，将硒还原成气态氢化物，但硼氢化钾只能 与亚硒酸根反应，而不能与硒酸根反应，因此要检测硒酸，需要使用碘化钾，碘化钾的浓度 直接影响硒酸的荧光强度。 优选地，所述蛋白水解酶溶液为链酶蛋白酶溶液。 优选地，所述链酶蛋白酶溶液为将0.01g链酶蛋白酶E溶于3ml水配置而成。 优选地，所述步骤3中，将装有样品溶液的所述离心管放入超声波清洗器中，超声 提取时间为45min，每间隔10min摇晃所述离心管。 优选地，所述超声波提取时，所述清洗器中的水温设定在37℃。 优选地，所述步骤4中，将样品溶液的离心条件为，转速8000r/min，离心时间 20min。 优选地，所述步骤5中，上清液通过0.45um微孔水系滤膜过滤。 优选地，所述步骤1中，富硒干木耳反复磨碎，经过80-120目筛，以得到木耳粉末。 优选地，所述木耳粉末为黑木耳粉末。 本发明的上述技术方案的有益效果如下： 根据本申请实施例的富硒黑木耳中硒形态检测方法，建立了超声波辅助酶法提 取-原子荧光光谱法测定富硒黑木耳中5种硒形态的新方法。该方法在16min内使硒代胱氨 酸、甲基-硒代半胱氨酸、亚硒酸、硒代蛋氨酸、硒酸完全达到基线分离，5种硒形态的检出限 为硒代胱氨酸0.68μg/L、甲基-硒代半胱氨酸0.85μg/L、亚硒酸0.39μg/L、硒代蛋氨酸1.22μ g/L、硒酸23.21μg/L；线性范围0.9990-0.9999；将该方法应用于富硒黑木耳中硒形态的分 析，加标回收率为79.78％-105.26％；检测方法灵敏度高、稳定性好、准确可靠，是测定富硒 黑木耳中硒形态含量的有效方法。 4 CN 111610263 A 说　明　书 3/11 页 附图说明 图1为本发明的加入水溶液前不同料液比木耳粉末状态图； 图2为本发明的不同料液比木耳粉末加入水溶液后木耳粉末泡发状态图； 图3为本发明的不同料液比木耳粉末加入水溶液后木耳粉末泡发状态图； 图4为发明的不同料液比木耳粉末加入水溶液后间隔15min木耳粉末泡发状态图； 图5为发明的不同料液比木耳粉末加入水溶液后间隔15min木耳粉末泡发状态图； 图6为发明的不同料液比木耳粉末加入水溶液后间隔30min木耳粉末泡发状态图； 图7为发明的不同料液比木耳粉末加入水溶液后间隔30min木耳粉末泡发状态图； 图8为发明的料液比1/10木耳粉末泡发状态图； 图9为发明的料液比1/20木耳粉末泡发状态图； 图10为发明的不同料液比木耳粉末加入水溶液后间隔45min木耳粉末泡发状态 图； 图11为发明的样品溶液离心后料液比状态图； 图12为发明的5个浓度梯度的混合标准溶液，流出曲线的外标校准多普图； 图13为本发明的硒代胱氨酸标准曲线图； 图14为本发明的甲基-硒代半胱氨酸标准曲线图； 图15为本发明的亚硒酸标准曲线图； 图16为本发明的硒代蛋氨酸标准曲线图； 图17为本发明的硒酸标准曲线图。