技术摘要：
本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种长链非编码RNA MYC‑AS1表达Northern blot检测引物、试剂盒。所述引物的序列如SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示。本发明进一步提供了MYC‑AS1表达Northern blot检测试剂盒，为MYC‑AS1表达规律分析提供了方法和基础，在临床医学中  全部
背景技术：
肿瘤的发生归因于多种内在因素，如遗传突变，表观遗传变异以及代谢异常等。普 遍认为，主要有两类基因与肿瘤的发生密切相关，即癌基因和抑癌基因。正常细胞中，癌基 因和抑癌基因表达保持一定的平衡比例。遗传和表观遗传突变均能引起癌基因和抑癌基因 表达异常，促使正常细胞转化成癌细胞。 虽然已知遗传突变与癌症发生有关，但越来越多的证据表明，表观遗传异常也与 癌症的发生、发展和转移密切相关。抑癌基因表观遗传沉默的分子机制已被充分阐明。癌基 因在癌细胞中的异常激活，除了报道与遗传突变有关外，至今未有关于表观遗传机制的报 道。抑癌基因表观遗传沉默的发现，导致表观遗传药物引入临床治疗。如5-氮-2’-脱氧胞苷 (5-Aza-2’-deoxycytidine，AZA)及其类似物5-阿扎胞苷(5-Azacytidine)作为DNA甲基化 抑制剂用于白血病的临床治疗以及一些实体肿瘤的临床治疗研究。然而DNA甲基化抑制剂 的应用也引起了一些困惑。由于该表观遗传药物的非特异性，AZA在激活抑癌基因的同时， 是否也会激活癌基因或癌相关基因。因此，进一步揭示表观遗传药物DNA甲基化抑制剂抑癌 机制是癌症研究的另一个重要科学问题。 对反义RNA的研究中，我们意外发现不仅抑癌基因存在反义RNA，许多癌基因也存 在反义RNA。在癌细胞中，这些反义RNA处于沉默(Silencing)状态，DNA甲基化抑制剂AZA可 明显激活这些反义RNA表达，且反义RNA与对应的正义癌基因呈显著负相关关系。因此，癌细 胞中的一些癌基因可能受其反义RNA的调控，这些癌基因的激活可能归因于它们反义RNA的 表观遗传沉默，致使癌基因去抑制(Derepression)，从而导致癌基因的激活。这种全新的癌 基因的致癌表观遗传学机制，对基础研究和临床医学研究均具重大意义。癌基因衍生的反 义RNA在抑制肿瘤细胞增殖中的作用及其表观遗传学机制将逐渐被阐明，有望成为新型的 抗肿瘤药物。
技术实现要素：
本发明通过双链RNA文库测序在人8号染色体上鉴定出一条原癌基因c-myc衍生的 反义长链非编码RNA，命名为MYC-AS1。研究表明，MYC-AS1可以抑制原癌基因c-myc表达并抑 制肿瘤细胞增殖。因此，进一步了解MYC-AS1在不同肿瘤组织的表达规律显得尤为重要。本 发明的目的是提供一种长链非编码RNA  MYC-AS1表达Northern  blot检测引物、试剂盒。 本发明的目的是这样实现的，一种长链非编码RNA  MYC-AS1表达Northern  blot检 测引物，其特征在于，所述引物的序列如SEQ  ID  NO.8和SEQ  ID  NO.9所示；其中： SEQ  ID  NO.8为：5’-CGCAATCAACCTCCAACC-3’； 3 CN 111549133 A 说　明　书 2/5 页 SEQ  ID  NO.9为：5’-TAATACGACTCACTATAGGGGCCTCTTGACATTCTCCTC-3’。 一种长链非编码RNA  MYC-AS1表达Northern  blot检测试剂盒，包括DIG标记探针、 杂交液和检测液，其特征在于，用于制备DIG标记探针的特异性引物序列如SEQ  ID  NO.8和 SEQ  ID  NO.9所示；其中： SEQ  ID  NO.8为：5’-CGCAATCAACCTCCAACC-3’； SEQ  ID  NO.9为：5’-TAATACGACTCACTATAGGGGCCTCTTGACATTCTCCTC-3’。 利用所述的引物在制备MYC-AS1Northern  blot试剂盒中的应用。 通过本发明，提供了用于检测长链非编码RNAMYC-AS1表达的特异性引物，所述特 异性引物的序列如SEQ  ID  NO.8和SEQ  ID  NO.9所示。 本发明进一步公开了所述特异性引物在制备MYC-AS1Northern  blot试剂盒中的 应用。 本发明还提供了一种长链非编码RNAMYC-AS1表达Northern  blot检测试剂盒，包 括DIG标记探针、杂交液和检测液，用于制备DIG标记探针的特异性引物序列如SEQ  ID  NO.8 和SEQ  ID  NO.9所示。 本发明提供的长链非编码RNAMYC-AS1  Northern  blot检测引物、试剂盒，为检测 MYC-AS1的表达规律提供了研究方法和基础。此外，在临床医学中可用于检测肿瘤样品癌基 因的表达情况。 附图说明 图1是MYC-AS1  Northern  blot结果图。 图2是MYC-AS1在人8号染色体上的位置示意图。 图3A是MYC-AS1抑制原癌基因c-myc基因表达能力分析，RT-qPCR分析MYC-AS1表 达； 图3B是MYC-AS1抑制原癌基因c-myc基因表达能力分析，RT-qPCR分析过表达MYC- AS1对原癌基因c-myc基因表达的影响； 图3C是MYC-AS1抑制原癌基因c-myc基因表达能力分析，Western-blot分析过表达 MYC-AS1对原癌基因c-myc基因表达的影响。 图4是MYC-AS1抑制人结肠癌细胞系HCT116增殖能力分析。