技术摘要：
提供了一种含肽化合物，其包含肽组分，所述肽组分是从2至45个(例如，从6至15个)氨基酸的氨基酸序列，所述肽组分与一个或多个式I的化合物共价键合：其中：R1选自‑C(CH3)2OH、‑COCH3、‑C(CH3)＝CH2和‑C(CH3)2H；并且n是0、1或2，以及所述含肽化合物的区域异构体、立  全部
背景技术：
炎症典型地被表征为对例如微生物、某些抗原、受损害的细胞或物理和/或化学因 子的入侵的局部组织反应。炎性反应通常是一种保护机制，所述保护机制用于破坏、稀释或 隔离有害剂和受损伤的组织二者，以及用于引发组织治愈。 炎症可能是由物理创伤、感染、一些慢性疾病(例如，银屑病和自身免疫性疾病，诸 如类风湿性关节炎)和/或对外部刺激的化学和/或生理反应(例如，作为过敏反应的一部 分)导致的。可能涉及一系列复杂事件，其中炎症介质增加局部血管的血流量和扩张，导致 发红和发热、体液渗出(exudation  of  fluids)，通常导致局部肿胀、白细胞迁移到发炎区 域中、和疼痛。 许多病症/障碍以异常的、组织损害性的炎症为特征和/或由其引起。此类病症典 型地以激活免疫防御机制为特征，导致对宿主的危害大于益处的作用，并且通常与不同程 度的组织发红或充血、肿胀、体温过高、疼痛、瘙痒、细胞死亡、组织破坏、细胞增殖和/或功 能丧失相关。例子包括炎性肠病、类风湿关节炎、多发性硬化症、银屑病、肾小球肾炎和移植 排斥。 典型地，一系列复杂事件会导致炎性变化，诸如通过局部血管扩张导致的血流量 增加，从而导致发红和发热、白细胞和血浆的溢出，通常导致局部肿胀、感觉神经的激活(导 致一些组织疼痛)和功能丧失。这些炎性变化是由一连串细胞事件和生化事件触发的，所述 事件涉及像嗜中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞和淋巴细胞的细胞，以及诸如血管活性胺、 细胞因子、补体因子和活性氧物种的炎症介质。 除其他事项外，炎症在伤口治愈过程中起关键作用。因此，伤口和烧伤可归类为与 炎症相关的病症。本领域的传统观念是抗炎药不应被直接施用于开放性伤口，因为这将不 利于伤口治愈的进展。 孟鲁司特是口服活性非类固醇类免疫调节化合物，其经口给予至胃肠道，用于维 持治疗和预防季节性过敏症状(参见例如Hon等人,Drug  Design ,Development  and  Therapy,8,839(2014))。它主要通过阻断白三烯D4(以及白三烯C4和E4)对气道中半胱氨醛 (cysteinal)白三烯受体CysLT1的作用而起作用。 国际专利申请WO  02/34237和WO  2003/020200公开了与多肽、更特别是天然存在 的氨基酸和/或合成氨基酸的均聚物和杂聚物共价附接的活性剂。 我们以前已出乎意料地发现，在局部(例如，外用)给予例如皮肤时，孟鲁司特显示 出抗炎作用(参见未公开的国际专利申请PCT/CN  2018/094441)。我们现已发现，与某些氨 基酸序列共价偶联的孟鲁司特产生新化合物，所述新化合物在各种病症中有潜在的用途， 7 CN 111601618 A 说　明　书 2/47 页 包括外用治疗诸如炎症和伤口的皮肤病症。
技术实现要素：
根据本发明的第一方面，提供了一种含肽化合物，其包含肽组分，所述肽组分是从 2至45个氨基酸的氨基酸序列，所述肽组分与一个或多个式I的化合物共价键合： 其中： R1选自-C(CH3)2OH、-COCH3、-C(CH3)＝CH2和-C(CH3)2H；并且 n是0、1或2， 以及所述含肽化合物的区域异构体、立体异构体、以及药学上或化妆品可接受的 盐， 所述含肽化合物、区域异构体、立体异构体和盐在下文中统称为“本发明化合物”。 本发明化合物含有至少一个伯酰胺键，所述一个或多个式I的化合物通过所述伯 酰胺键与所述肽组分偶联。所述酰胺键通过使所述一个或多个式I的化合物中的一个或多 个羧酸基团与所述肽组分中的一个或多个游离-NH2基团反应形成。所述酰胺键可以在N-末 端-NH2基团处和/或通过存在于肽序列中的氨基酸中的一个或多个其他游离-NH2基团形成。 因此，优选的是，本发明化合物中的肽组分中的至少一个氨基酸包含不是N-末端 的带正电荷的基团(即，游离-NH2基团)。本发明化合物的肽组分中的氨基酸可以是天然存 在的(但不一定是蛋白原的)氨基酸和/或合成氨基酸。优选地，所述肽组分中的氨基酸是天 然存在的氨基酸。 例如，不在肽组分的N-末端处存在的至少一个氨基酸可以包括天冬酰胺(Asn)、更 优选精氨酸(Arg)、并且甚至更优选赖氨酸(Lys)。 在这方面，优选的是，存在于肽组分中的氨基酸中的优选至少约5％、更优选至少 约10％，诸如至少约15％，包括至少约20％(按数量计和/或按重量计)包括此类氨基酸(即， Asn、Arg和/或Lys)。 本发明化合物的肽组分可以是氨基酸的均聚物。可替代地，本发明化合物的肽组 分可以是两种或更多种不同氨基酸的杂聚物。优选地，本发明化合物的肽组分是两种或更 多种不同的天然存在的氨基酸(例如，至少三种不同氨基酸、优选四种不同氨基酸、最优选 至少五种不同氨基酸)的杂聚物。 可与式I的化合物偶联的肽组分包括具有已知抗微生物和/或抗炎特性的肽、或其 片段或次要变体。 8 CN 111601618 A 说　明　书 3/47 页 此类肽的片段包括全氨基酸序列的可显示出此类抗微生物和/或抗炎特性的“一 部分”。 还包括作为此类全氨基酸序列的(例如，次要)变体或其片段的氨基酸序列，其可 以通过化学方法和/或生物学方法(例如，天然存在的肽的化学修饰或通过直接合成)合成。 我们将“全氨基酸序列的(例如，次要)变体或其片段”意指为这些相应序列的变化，其在可 测量的程度上不负面影响相关全肽或其片段的必要特性。 在这方面可提及的抗微生物肽包括天蚕素，诸如天蚕素A： H-Lys-Trp-Lys-Leu-Phe-Lys-Lys-Ile-Glu-Lys-Val-Gly-Gln-Asn-Ile-Arg- Asp-Gly-Ile-Ile-Lys-Ala-Gly-Pro-Ala-Val-Ala-Val-Val-Gly-Gln-Ala-Thr-Gln-Ile- Ala-Lys-NH2(SEQ  ID  No:1)；天蚕素B： H-Lys-Trp-Lys-Val-Phe-Lys-Lys-Ile-Glu-Lys-Met-Gly-Arg-Asn-Ile-Arg-As  n-Gly-Ile-Val-Lys-Ala-Gly-Pro-Ala-Ile-Ala-Val-Leu-Gly-Glu-Ala-Lys-Ala-Leu-NH2 (SEQ  ID  No:2)和/或 LL-37： H-Leu-Leu-Gly-Asp-Phe-Phe-Arg-Lys-Ser-Lys-Glu-Lys-Ile-Gly-Lys-Glu-P  he-Lys-Arg-Ile-Val-Gln-Arg-Ile-Lys-Asp-Phe-Leu-Arg-Asn-Leu-Val-Pro-Arg-Th  r- Glu-Ser-NH2(SEQ  ID  No:3)。 可提及的抗炎肽包括作为贻贝粘附蛋白(MAP)(也称为紫贻贝(Mytilus  edulis) 足蛋白(mefp))的片段的氨基酸序列，所述贻贝粘附蛋白是由诸如紫贻贝、厚壳贻贝 (Mytilus  coruscus)和翡翠贻贝(Perna  viridis)的海洋贝类物种分泌的蛋白质，包括来 源于贻贝的11种已鉴定的独立粘附蛋白亚型，包括胶原蛋白pre-COL-P、pre-COL-D和pre- COL-NG；贻贝足基质蛋白PTMP(近端丝基质蛋白)和DTMP(远端丝基质蛋白)；以及mfp蛋白 mfp-2(有时称为“mefp-2”，下文可互换使用)、mfp-3/mefp-3、mfp-4/mefp-4、mfp-5/mefp- 5、mfp-6/mefp-6、以及最优选mfp-1/mefp-1(参见例如Zhu等人,Advances  in  Marine  Science,32,560(2014)和Gao等人,Journal  of  Anhui  Agr.Sci.,39,19860(2011))。 mefp-1的重要部分由70至90个串联的以下十肽重复组成：Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr- Hyp-Hyp-Thr-DOPA-Lys(SEQ  ID  No:4；参见Waite,Int.J.Adhesion  and  Adhesives,7,9 (1987))。这种十肽序列可以作为天然存在的MAP的低分子量衍生物被分离，或者可以是合 成的，例如，如Yamamoto在J.Chem.Soc.,Perkin  Trans.1,613(1987)中所述。还参见Dalsin 等人,J.Am.Chem.Soc.,125,4253(2003)。 在这方面，可用于本发明化合物的肽组分包含一个至四个(优选三个，并且更优选 两个)上述十肽序列重复单元、或最优选一个上述十肽序列、或这些选项中的任何一项的变 体(如上文所定义)。 还提供了如上文所定义的含肽化合物，其中肽组分中的氨基酸中的至少约5％、诸 如至少约10％(按数量计)含有芳族基团，诸如酪氨酸和/或3,4-二羟基苯丙氨酸(DOPA)。可 替代地，肽链中的氨基酸均不含芳族基团，即，所述氨基酸均不是酪氨酸和/或DOPA。 进一步优选的是，本发明化合物内的肽组分在氨基酸序列中包含在5与30之间个 氨基酸，诸如在6与20之间个氨基酸，包括在7与15之间个(例如，至多12个，诸如10个)氨基 酸。 9 CN 111601618 A 说　明　书 4/47 页 在这方面可提及的本发明化合物包括其中肽组分具有以下氨基酸序列的那些： X-Pro-Y-Z(SEQ  ID  No:5)， 其中： X代表1至2个氨基酸残基的链，所述氨基酸残基各自独立地选自Ala和Lys； Y选自Ser和pSer； Z代表1(例如2，诸如3)至7个氨基酸残基的链，所述氨基酸残基各自独立地选自 Tyr、pTyr、Hyp(即，3Hyp或4Hyp)、Thr、pThr、DOPA和Lys；并且 所述Ala和/或Lys残基中的至少一个与一个或多个式I的化合物键合，如上文所定 义。 可提及的特定氨基酸序列是Ala-Pro-Ser-Hyp-Hyp-Thr(SEQ  ID  No:6)。 可提及的本发明的优选化合物包括其中肽组分具有以下氨基酸序列的那些： G1-Lys-Pro-G2-T-Hyp-G3-Lys(SEQ  ID  No:7)， 其中： G1不存在或代表Ala； G2选自Ser和pSer； T选自DOPA，或更优选Tyr和pTyr； Hyp选自3Hyp和4Hyp； G3代表1至4(例如，1至3)个氨基酸残基的链，所述氨基酸残基各自独立地选自 Tyr、pTyr、3Hyp、4Hyp、Thr、pThr和DOPA；并且 所述Lys残基中的至少一个和/或当存在时所述Ala残基与一个或多个如上文所定 义的式I的化合物键合。 可提及的肽组分包括具有以下氨基酸序列的那些： Lys-Pro-G2-T-Hyp-G3-Lys(SEQ  ID  No:8)， 其中G2、T、Hyp和G3是上面定义的，其中G2更优选为Ser并且G3更优选为Tyr或尤其 是DOPA。 然而，进一步优选的是： G1代表Ala； G2代表Ser； T代表Tyr； G3代表1至4(例如，1至3)个氨基酸残基，所述氨基酸残基各自独立地选自Tyr、 3Hyp、4Hyp和Thr，例如，氨基酸链由-V1-Thr-Tyr-V2-表示，其中V1与Hyp键合并且V2与Lys键 合，并且V1和V2独立地不存在或代表一个或两个Hyp基团。 在这方面，序列-V1-Thr-Tyr-V2可以以递增的优先顺序由以下部分序列表示： -Hyp-Thr-Tyr- -Hyp-Thr-Tyr-Hyp-或 -Thr-Tyr-Hyp-。 因此，优选的肽组分包括具有以下氨基酸序列的那些： Ala-Lys-Pro-G2-T-Hyp-Hyp-Thr-G4-Lys(SEQ  ID  No:9)， 其中G2、T和Hyp是上面定义的，并且G4选自Tyr、pTyr、3Hyp、4Hyp、Thr、pThr和DOPA， 10 CN 111601618 A 说　明　书 5/47 页 其中G2更优选为Ser，T更优选为Tyr，并且G4更优选Tyr或DOPA。 优选的肽组分还包括具有以下氨基酸序列的那些： Ala-Lys-Pro-G2-T-Hyp-Thr-G4-Hyp-Lys(SEQ  ID  No:10)， 其中G2、T、Hyp和G4是上面定义的，其中G4更优选为DOPA或尤其是Tyr。 优选的肽组分包括具有以下氨基酸序列的那些： Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-DOPA-Lys(SEQ  ID  No:4)； Ala-Lys-Pro-pSer-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-DOPA-Lys(SEQ  ID  No:11)； Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-Tyr-Lys(SEQ  ID  No:12)； Ala-Lys-Pro-pSer-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-Tyr-Lys(SEQ  ID  No:13)； Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-DOPA-Lys(SEQ  ID  No:14)；和 Lys-Pro-Ser-pTyr-Hyp-DOPA-Lys(SEQ  ID  No:15)。 在以上氨基酸序列列表中，Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-Tyr-Lys(SEQ  ID  No:12)是最优选的。 进一步优选的肽组分包括具有以下氨基酸序列的那些： Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-pThr-DOPA-Lys(SEQ  ID  No:16)和 Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-pThr-Tyr-Lys(SEQ  ID  No:17)。 进一步优选的肽组分包括具有以下氨基酸序列的那些： Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-DOPA-Hyp-Lys(SEQ  ID  No:18)； Ala-Lys-Pro-pSer-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-DOPA-Hyp-Lys(SEQ  ID  No:19)； Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-Tyr-Hyp-Lys(SEQ  ID  No:20)； Ala-Lys-Pro-pSer-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-Tyr-Hyp-Lys(SEQ  ID  No:21)； Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Thr-DOPA-Hyp-Lys(SEQ  ID  No:22)； Ala-Lys-Pro-pSer-Tyr-Hyp-Thr-DOPA-Hyp-Lys(SEQ  ID  No:23)； Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Thr-Tyr-Hyp-Lys(SEQ  ID  No:24)； Ala-Lys-Pro-pSer-Tyr-Hyp-Thr-Tyr-Hyp-Lys(SEQ  ID  No:25)； Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-pThr-DOPA-Hyp-Lys(SEQ  ID  No:26)；和 Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-pThr-Tyr-Hyp-Lys(SEQ  ID  No:27)。 在以上氨基酸序列列表中，Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Thr-Tyr-Hyp-Lys(SEQ  ID  No:24)是最优选的。 进一步优选的肽组分包括具有以下氨基酸序列的那些： Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-DOPA(SEQ  ID  No:28)； Ala-Lys-Pro-pSer-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-DOPA(SEQ  ID  No:29)； Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-Tyr(SEQ  ID  No:30)； Ala-Lys-Pro-pSer-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-Tyr(SEQ  ID  No:31)； Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-DOPA(SEQ  ID  No:32)； Lys-Pro-Ser-pTyr-Hyp-DOPA(SEQ  ID  No:33)； Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-pThr-DOPA(SEQ  ID  No:34)； Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-pThr-Tyr(SEQ  ID  No:35)； Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-DOPA-Hyp(SEQ  ID  No:36)； 11 CN 111601618 A 说　明　书 6/47 页 Ala-Lys-Pro-pSer-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-DOPA-Hyp(SEQ  ID  No:37)； Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-Tyr-Hyp(SEQ  ID  No:38)； Ala-Lys-Pro-pSer-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-Tyr-Hyp(SEQ  ID  No:39)； Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Thr-DOPA-Hyp(SEQ  ID  No:40)； Ala-Lys-Pro-pSer-Tyr-Hyp-Thr-DOPA-Hyp(SEQ  ID  No:41)； Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Thr-Tyr-Hyp(SEQ  ID  No:42)； Ala-Lys-Pro-pSer-Tyr-Hyp-Thr-Tyr-Hyp(SEQ  ID  No:43)； Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-pThr-DOPA-Hyp(SEQ  ID  No:44)； Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-pThr-Tyr-Hyp(SEQ  ID  No:45)； Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp(SEQ  ID  No:46)；和 Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp(SEQ  ID  No:47)。 技术人员应意识到，可在给予后形成的本发明化合物的代谢物包括在本发明的范 围内。 具体地，包含具有氨基酸序列SEQ  ID  No:28至SEQ  ID  No:47的肽组分的本发明化 合物可以形成为在C-末端处包含相关氨基酸的本发明的相应化合物的代谢产物，所述代谢 物可以是在给予后从本发明的其他化合物上裂解的。 例如，包含具有氨基酸序列SEQ  ID  No:30、SEQ  ID  No:46和SEQ  ID  No:47的肽组 分的本发明化合物可以形成为包含具有氨基酸序列SEQ  ID  No:12的肽组分的本发明化合 物的代谢物。类似地，包含具有氨基酸序列SEQ  ID  No:42和SEQ  ID  No:47的肽组分的本发 明化合物可以形成为包含具有氨基酸序列SEQ  ID  No:24的肽组分的本发明化合物的代谢 物。 然而，包含具有氨基酸序列SEQ  ID  No:28至SEQ  ID  No:47的肽组分的本发明化合 物本身也是本发明化合物，并且可以与本文所述和/或以下例示的其他本发明化合物完全 相同的方式制造、配制和给予患者。 为避免疑义，如本文所用，Pro代表脯氨酸，Ala代表丙氨酸，Ser代表丝氨酸，并且 pSer代表磷酸丝氨酸，Tyr代表酪氨酸，pTyr代表磷酸酪氨酸，Hyp代表羟基脯氨酸(3Hyp代 表3-羟基脯氨酸，并且4Hyp代表4-羟基脯氨酸)。Thr代表苏氨酸，pThr代表磷酸苏氨酸(或 磷酰基苏氨酸)。并且Lys、Ala和DOPA是如上文所定义的。包含游离羟基的氨基酸(例如， Ser、Tyr和Thr)的膦酸化衍生物包含-OP(＝O)(OH)2基团而不是-OH。 一个或多个式I的化合物可以通过一个或多个例如Ala或Lys部分(包括通过N-末 端Ala或Lys部分和/或C-末端Lys部分)与上述肽组分连接。 在本发明化合物中，三个式I的化合物、优选两个式I的化合物、并且更优选一个式 I的化合物可以与上述肽组分共价键合。 有利的是，本发明化合物的肽组分包含至少一个氨基酸残基，所述至少一个氨基 酸残基含有至少一个游离-NH2基团。含有至少一个游离-NH2基团的具体氨基酸残基包括 Asn、Gln、优选Arg、以及最优选Lys。例如，当肽组分是G1-Lys-Pro-G2-T-Hyp-G3-Lys(SEQ  ID  No:7)序列时，所述Lys残基中的至少一个具有游离-NH2基团(即，所述Lys残基中的至少一 个不与式I的化合物基团共价键合)。 在其中两个或更多个(例如，三个、优选两个)式I的化合物与肽组分共价键合的本 12 CN 111601618 A 说　明　书 7/47 页 发明化合物的例子中，优选的是，所述肽组分包含至少一个氨基酸残基，所述至少一个氨基 酸残基包含至少一个游离-NH2基团。例如，肽组分包含至少一个不与式I的化合物共价键合 的Lys残基。 不希望受理论束缚，据信肽组分中存在游离-NH2基团(例如，当可存在的一个或多 个Lys残基不与式I的化合物共价键合时)对本发明化合物的溶解度(例如，水溶解度)是有 益的。 式I的化合物含有双键，并且因此可以作为围绕所述双键的E(反式(entgegen))和 Z(顺式(zusammen))几何异构体存在。所有此类异构体及其混合物包括在本发明的范围内。 为避免疑义，式I的化合物中的 指示，7-氯喹啉环可以顺式(作为Z几何异构体)或反式 (作为E几何异构体)跨越双键定位至中心1,3-二取代的苯环。优选地，所述7-氯喹啉环反式 跨越双键定位至中心1,3-二取代的苯环上，即，E几何异构体。 可提及的具体的式I的化合物包括其中R1选自-C(CH3)2OH、-COCH3和-C(CH3)＝CH2 的那些。 优选的式I的化合物包括其中R1为-C(CH3)2OH和/或n为0的那些(例如，孟鲁司特)。 为避免疑义，孟鲁司特具有以下化学结构： 式I的其他化合物包括其中R1为-C(CH3)＝CH2和/或n为0的那些(例如，孟鲁司特苯 乙烯)。 为避免疑义，孟鲁司特苯乙烯具有以下化学结构： 可提及的其他式I的化合物包括其中R1为-C(CH3)2H和/或n为0的那些(例如，氢化 孟鲁司特苯乙烯)。 为避免疑义，氢化孟鲁司特苯乙烯具有以下化学结构： 13 CN 111601618 A 说　明　书 8/47 页 本发明化合物，无论是呈盐的形式还是其他形式，包括在肽组分的氨基酸(例如， Hyp和Tyr部分)内的区域异构体，以及此类区域异构体的混合物。例如，Tyr的定义中不仅包 括酪氨酸(4-羟基苯丙氨酸)，而且还包括2-和3-羟基苯丙氨酸，并且Hyp的定义中包括4-羟 基脯氨酸(4Hyp)、3-羟基脯氨酸(3Hyp)和5-羟基脯氨酸(5Hyp)。更优选的是，Hyp残基为4- 羟基脯氨酸。 另外，除了本发明化合物的肽组分中的氨基酸的标准中心碳原子(通常但非排他 性地呈L-构型)之外，序列中的某些氨基酸还包含另外的手性碳原子。所有此类立体异构体 及其混合物(包括外消旋混合物)包括在本发明的范围内。就此而言，Hyp的定义内包括反 式-4-羟基-L-脯氨酸、顺式-4-羟基-L-脯氨酸、反式-3-羟基-L-脯氨酸、顺式-3-羟基-L-脯 氨酸、反式-5-羟基-L-脯氨酸和顺式-5-羟基-L-脯氨酸，但是我们优选的是，用于本发明化 合物的Hyp是4-羟基-L-脯氨酸。类似地，可形成本发明化合物的一部分的式I的化合物的单 独对映体包括在本发明的范围内。 本发明化合物可以呈盐的形式。可提及的盐包括药学上可接受的和/或化妆品可 接受的盐，诸如药学上和/或化妆品可接受的酸加成盐和碱加成盐。此类盐可以通过常规方 式形成，例如通过以下方式形成：使本发明化合物与一或多当量的适当的酸或碱任选地在 溶剂中或在盐不溶的介质中反应，接着使用标准技术(例如，在真空中，通过冷冻干燥或通 过过滤)除去所述溶剂或所述介质。盐也可以通过例如使用合适的离子交换树脂将呈盐形 式的活性成分的抗衡离子与另一种抗衡离子交换来制备。 优选的盐包括例如乙酸盐、盐酸盐、硫酸氢盐、马来酸盐、甲磺酸盐、甲苯磺酸盐、 碱土金属盐(诸如钙和镁)、或碱金属盐(诸如钠和钾盐)。最优选地，本发明化合物可以呈乙 酸盐的形式。 本发明化合物可以通过常规技术制备。例如，本发明化合物可以通过将一个或多 个式I的化合物与肽组分偶联来制造，例如如下文所述。本发明化合物(及其肽组分)可以使 用适当的试剂和反应条件由可用的起始材料来合成。在这方面，技术人员尤其可以参考 “Comprehensive  Organic  Synthesis”,B.M.Trost和I.Fleming,Pergamon  Press,1991。可 使用的其他参考文献包括“Heterocyclic  Chemistry”,J.A.Joule,K.Mills和G.F.Smith, 第3版 ,由Chapman&Hall出版 ,“Comprehensive  Heterocyclic  Chemistry  II”, A .R .Katritzky ,C .W .Rees和E.F .V .Scriven ,Pergamon  Press ,1996以及“Science  of  Synthesis”,第9-17卷(Hetarenes  and  Related  Ring  Systems) ,Georg  Thieme  Verlag, 2006。 14 CN 111601618 A 说　明　书 9/47 页 如果需要，本发明的组分的肽组分可以通过标准肽合成技术使用标准氨基酸偶联 技术以及标准偶联试剂和溶剂来制造，例如如下文所述。 技术人员应理解，可以在以上所述用于制备本发明化合物的方法之后或期间，通 过本领域技术人员熟知的方法将如本文所定义的取代基及其上的取代基修饰一次或多次。 此类方法的例子包括取代、还原、氧化、脱氢、烷基化、脱烷基化、酰化、水解、酯化、醚化、卤 化和硝化。在反应顺序期间中的任何时间，前体基团可以被改变为不同的此类基团，或本发 明化合物中定义的基团。技术人员还可以参考“Comprehensive  Organic  Functional  Group  Transformations”,A.R .Katritzky ,O .Meth-Cohn和C.W.Rees ,Pergamon  Press , 1995和/或“Comprehensive  Organic  Transformations”,R.C.Larock,Wiley-VCH,1999。 本发明化合物可以从其反应混合物中分离出，并且如果需要，可以使用如本领域 技术人员已知的常规技术进行纯化。因此，如本文所述的用于制备本发明化合物的方法可 以包括分离并且任选地纯化本发明化合物(作为最终步骤)。 本领域技术人员应意识到，在上文和下文所述方法中，可能需要通过保护基团来 保护中间体化合物的官能团。官能团的保护和脱保护可以在上述方案中的反应之前或之后 进行。 可以根据本领域技术人员熟知的和如下文所述的技术来施加和除去保护基团。例 如，可以使用标准脱保护技术将本文所述的受保护的化合物/中间体化学地转化为未受保 护的化合物。所涉及的化学类型将决定保护基团的需要和类型，以及实现合成的顺序。保护 基团的使用完整地描述于“Protective  Groups  in  Organic  Synthesis”,第3版 , T.W.Greene&P.G.M.Wutz,Wiley-Interscience(1999)，将其内容通过引用并入本文。 本发明化合物是有用的，因为它们具有药理活性。因此，本发明化合物可用作人类 药和动物药。因此，尽管它们也可以用作化妆品和/或用作医疗装置的一部分，但是它们被 指示作为药物(和/或在兽医科学中)。 尽管本发明化合物本身可以具有药理活性，但是可以存在或可以制备本发明化合 物的某些药学上可接受的(例如，“受保护的”)衍生物，所述衍生物可不具有此类活性，但是 所述衍生物可以被给予并且之后被代谢或化学地转化以形成本发明化合物。此类化合物 (其可具有一些药理活性，前提是此类活性明显低于其代谢/转化的活性化合物的活性)因 此可以被描述为本发明化合物的“前药”。 如本文所用，对前药的提及将包括在给予后预定时间内以实验上可检测的量形成 本发明化合物的化合物。本发明化合物的所有前药都包括在本发明的范围内。 本发明化合物特别可用于治疗炎症。 “炎症的治疗”包括对身体的任何器官(包括软组织、关节、神经、血管系统、内脏器 官、尤其是粘膜表面、以及特别是皮肤)中的炎症(无关原因)的治疗，并且还包括所有此类 炎性障碍或病症，和/或以炎症(例如，作为症状)为特征的障碍或病症。 炎性病症可以(并且典型地)以免疫防御机制的激活为特征，所述激活产生对宿主 的危害大于益处的作用。此类病症通常与不同程度的组织发红或充血、肿胀、水肿、体温过 高、疼痛(包括隐痛(aching))、体液渗出、瘙痒(瘙痒症)、细胞死亡和组织破坏、细胞增殖、 和/或功能丧失。 可提及的炎症包括动脉炎、糖尿病、代谢综合征、玫瑰痤疮、哮喘和过敏、强直性脊 15 CN 111601618 A 说　明　书 10/47 页 柱炎、慢性阻塞性肺病、痛风性关节炎、炎性肠病(诸如克罗恩病和溃疡性结肠炎)、多发性 硬化症、骨关节炎、胰腺炎、前列腺炎、银屑病性关节炎、类风湿性关节炎、肌腱炎、粘液囊 炎、干燥综合征、系统性红斑狼疮、葡萄膜炎、荨麻疹、血管炎、肥大细胞增多症、糖尿病性血 管并发症、偏头痛、动脉粥样硬化和相关的心血管障碍。可提及的以炎症为特征的疾病状态 是慢性阻塞性肺病(COPD)。可提及的另外的以炎症为特征的疾病状态是炎性肠病，包括克 罗恩病以及尤其是溃疡性结肠炎。 可更尤其提及的炎性病症包括皮肤或粘膜(包括口腔粘膜、鼻粘膜、眼粘膜、阴道 粘膜、子宫颈粘膜和/或肛门直肠粘膜，更特别是口腔粘膜或鼻粘膜)的炎症，诸如由感染 (诸如病毒感染和/或细菌感染)引起的炎症，或过敏性/特应性病症(诸如鼻炎(例如，过敏 性鼻炎)、咽炎、牙周炎、牙龈炎、干眼症、结膜炎(例如，过敏性结膜炎)、皮炎、荨麻疹 (urticaria)(荨麻疹(hives))和食物过敏)；以及其他炎性病症，诸如疱疹、药疹、多形性日 光疹、晒伤、皮肤癌的早期表现(红斑样皮肤病变)、病理性脱发(包括在皮肤移植后)、化疗 皮疹、银屑病、多形性红斑、毛囊炎、湿疹和外耳炎。可提及的疾病状态是多形性日光疹。 更特别地，化合物可用于治疗以炎症为特征和/或与炎症相关的某些病症。此类病 症可以包括伤口(包括擦伤(划痕)、切口(包括手术切口)、撕裂、穿刺、撕脱、瘀伤和结疤)和 烧伤(包括在烧伤后由外科手术(诸如皮肤移植)引起的炎症)和其他病症，诸如痔疮。伤口 可以是急性的或慢性的，和/或可以由如本文所定义的一种或多种炎性障碍引起。 皮肤或粘膜的伤口可能是由对膜表面的内部或外部物理损伤引起的，或者可能是 由潜在的生理障碍引起的(即，是其症状)。 物理(例如“开放性”)伤口可能是由以下引起的：锋利的物体(割口、切口、穿刺)或 钝的物体/机械力(撕裂、擦伤、撕脱)、物理打击(瘀伤)、热或化学物(烧伤和水疱)、紫外线 (晒伤)、寒冷(冻疮或冻伤)。伤口可以是浅表的(仅损害表皮和/或真皮)，或者可以是完整 厚度的伤口(在表皮和/或真皮下方的损害)。在严重的情况下，可能损害皮下和/或粘膜下 组织，诸如肌肉、骨、关节、以及甚至内脏器官。 本发明化合物可用于缓解与炎症和/或伤口相关的疼痛(包括隐痛)。具体地，本发 明化合物可用于缓解操作性疼痛和/或非操作性疼痛。技术人员应理解，术语“操作性疼痛” (即，手术疼痛)是指与出于医疗保健目的而进行的医学研究和治疗相关的急性疼痛。术语 “非操作性”是指与炎症和/或伤口相关的一般性疼痛(例如，与牙溃疡、烧伤和/或疤痕相关 的疼痛)，并且不是特定医学干预的结果。 本发明化合物不仅可用于治疗与伤口本身和治愈过程相关的炎症、疼痛(包括隐 痛)和/或瘙痒症(瘙痒)，它们还可用于预防体液从伤口渗出、感染风险、以及还有对由炎症 和/或伤口治愈过程引起的生理反应(诸如结疤和黑色素沉着)的预防。 结疤是炎症和/或伤口治愈的结果，并且是作为此类炎症/治愈的结果的纤维组织 形成的通用术语。 本发明化合物还可用于抑制黑色素沉着的产生，所述黑色素沉着的产生可能是或 可能不是由炎症和/或伤口治愈引起的。本发明化合物还可用于抑制与黑色素沉着相关的 障碍，诸如黄褐斑、雀斑、黑变病、面颊皮疹和其他色素沉着症，伴有黑素瘤的皮肤癌，以及 由暴露于阳光引起的色素沉着症或皮肤疾病(像痤疮)。 伤口也可能作为(例如，炎性)疾病或障碍的结果而引起。此类伤口可以包括皮肤 16 CN 111601618 A 说　明　书 11/47 页 和粘膜的水疱和/或溃疡。这些是通常长期持续且难以治疗的常见病症。皮肤组织可能经常 被损害，去除，液化，感染和/或坏死。溃疡可能对健康导致继发性结果(特别是如果它们变 成受感染的话)，难以治愈并且治疗昂贵。它们还可能给患者造成显著的心理压力和经济损 失，从而影响总体幸福感和生活品质二者。 在替代方案中，其中发现本发明化合物特别有用的炎性皮肤病症或疾病包括银屑 病、痤疮、湿疹和皮炎，尤其是过敏性皮炎/特应性皮炎，以及在如以例如鼻炎(尤其是过敏 性鼻炎)痔疮、慢性阻塞性肺病和溃疡性结肠炎为特征的粘膜炎症的治疗中。 银屑病是一种慢性炎性皮肤疾病，具有复发的趋势(一些患者在其整个一生中都 无法治愈)。银屑病的临床表现主要包括红斑和鳞屑。它可以在全身发生，但更常在头皮和 四肢上被观察到。 痤疮是一种滤泡性(毛囊皮脂单位)慢性炎性皮肤疾病，其发生与像皮脂分泌过 多、毛囊皮脂管道阻塞(包括封闭性粉刺和开放性粉刺)、细菌感染和炎性反应的主要因素 密切相关，其倾向于在青年时期发生，以在面部的多形性皮肤病变为特征。因此，术语痤疮 包括普通痤疮和玫瑰痤疮(即，酒渣鼻)。 湿疹是由多种内部和外部因素引起的具有强烈瘙痒的皮肤炎性反应。它具有三个 阶段：急性、亚急性和慢性。在急性阶段，有渗出物产生的趋势，而慢性阶段包括浸润和肥 大。皮肤病变通常瘙痒并且容易复发。 皮炎是一种常见的皮肤疾病，所述皮肤疾病以粗糙、发红、瘙痒、湿疹和干燥为特 征。如果不迅速治疗，由皮炎引起的小块、顽固性溃疡和色素沉着斑可能发展为基底细胞 癌、鳞状细胞癌和恶性黑色素瘤。皮炎可能是由各种内部和外部感染或非感染因素引起的， 所述因素包括物质(接触性皮炎)或过敏(过敏性/特应性皮炎)。还包括脂溢性皮炎(脂溢性 湿疹)和所有形式的类固醇依赖性皮炎(包括光敏感性皮脂溢疹、口周皮炎、玫瑰痤疮样皮 炎、类固醇-玫瑰痤疮、类固醇诱导的玫瑰痤疮、医源性玫瑰痤疮、类似类固醇性皮炎的玫瑰 痤疮、外用皮质类固醇诱导的玫瑰痤疮样皮炎、以及更特别是面部皮质类固醇瘾性皮炎 (FCAD)或面部皮质类固醇依赖性皮炎(FCDD)，如以在长期用(包括不受控制的使用、滥用或 误用)外用皮质类固醇治疗后在面部区域的潮红、红斑、毛细血管扩张、萎缩、丘疹和/或脓 疱为特征 ；参见例如X i a o等人 ,J .D e r m a t o l . ,4 2 ,6 9 7 ( 2 0 1 5 ) 和L u等人 , Clin.Exp.Dermatol.,35,618(2009))。 鼻炎是在鼻内部的粘膜的刺激和炎症。鼻炎的常见症状包括鼻塞、流鼻涕、打喷嚏 和鼻后滴漏。最常见的一种鼻炎是由过敏原引起的过敏性鼻炎，所述过敏原诸如花粉、灰 尘、霉菌、或某些动物的皮肤剥屑(flakes  of  skin)。已出人意料地发现，即使当本发明化 合物被经鼻(即，至鼻粘膜)给予时，用本发明化合物治疗的患有过敏性鼻炎的患者也会经 历眼部瘙痒的缓解。 痔疮是由在直肠和肛门内部或周围存在的痔疮血管的炎症引起的肿胀。症状包括 大便通过后出血(即，受伤)，痔疮脱垂，粘液排出以及在肛门区域中的瘙痒、痛、发红和肿 胀。痔疮被认为是腹部压力升高的结果，例如，作为便秘或腹泻的结果。 慢性阻塞性肺病(COPD)是一组导致呼吸困难的肺病症的名称，所述肺病症包括肺 气肿(对肺泡的损害)和慢性支气管炎(长期的气道炎症)。当肺发炎、受损害和变窄时，发生 COPD。对肺的损害通常是不可逆的并且导致进出肺的空气流动的伤害。COPD的症状包括呼 17 CN 111601618 A 说　明　书 12/47 页 吸急促、排痰性咳嗽、频繁的胸部感染和持续喘息。所述疾病的最常见原因是吸烟，尽管其 他危险因素包括高水平的空气污染和职业性暴露于粉尘、化学物和烟雾。 本发明化合物可在减轻由包括本文一般和具体提及的那些在内的各种病症引起 的红斑、发红和肿胀、水肿、水疱和大疱性类天疱疮方面具有积极作用，并且可抑制皮下组 织液的渗出，并且抑制由此类炎性病症引起的瘙痒和疼痛。 可提及的其他炎性病症包括： (a)粘膜炎症，诸如口腔粘膜炎、口疮溃疡、中耳炎、喉炎、气管炎、食道炎、胃炎、肠 炎和小肠结肠炎(包括杆菌痢疾、慢性阿米巴痢疾、血吸虫病、非特异性溃疡性结肠炎和局 限性肠炎)、子宫颈炎和子宫颈内膜炎、子宫内膜炎、由吸入性损伤等引起的炎症、以及与癌 症和感染(例如，病毒感染，诸如普通感冒或流感)相关的粘膜炎症，它们影响粘膜表面，诸 如在口腔、鼻咽、耳、喉咙、气管、胃肠道、子宫颈等中的那些。 (b)与例如骨折相关的整形外科炎症，骨和关节的化脓性感染，由风湿性骨病引起 的炎症，以及化脓性骨髓炎(急性、慢性、局部、硬化性、创伤后)、化脓性关节炎；骨肿瘤(骨 瘤、骨样骨瘤、软骨瘤)、骨囊肿、破骨细胞瘤、原发性骨肉瘤(骨肉瘤、软骨肉瘤、骨纤维肉 瘤、尤因氏肉瘤、非霍奇金淋巴瘤、骨髓瘤、脊索瘤)、转移性骨肿瘤、骨的肿瘤样病变(骨囊 肿、动脉瘤性骨囊肿、嗜酸性肉芽肿、纤维异常增生)；以及风湿性关节炎。 (c)神经炎症，诸如周围性多发性神经炎、面部神经炎、周围性神经炎、皮下神经 炎、尺神经炎、肋间神经炎等。 (d)皮下和粘膜下软组织炎症，诸如肌炎，韧带炎，肌腱炎，脂膜炎囊膜炎，淋巴结 炎，腹股沟淋巴腺炎，扁桃体炎，滑膜炎，筋膜炎，以及由肌肉、韧带、筋膜、肌腱、滑膜、脂肪、 关节囊和淋巴组织的损伤、挫伤或撕裂引起的软组织炎症。 (e)血管炎症，诸如过敏性白细胞碎裂性血管炎、过敏性皮肤血管炎、结节性多动 脉炎、血栓性血管炎、肉芽肿性血管炎、淋巴细胞性血管炎、血液组成异常的血管炎、和风湿 性血管炎，以及与由过敏性白细胞碎裂性血管炎、结节性多动脉炎、血栓性血管炎、肉芽肿 性血管炎、淋巴细胞性血管炎、血液组成异常的血管炎、和风湿性血管炎引起的血管癌相关 的血管炎症。 (f)诸如心脏、胃、肠、肺、肝、脾、肾、胰腺、膀胱、卵巢和前列腺的内脏的炎症，包括 但不限于心包炎、心肌炎、心内膜炎、肺炎、肝炎、脾炎、肾炎、胰腺炎、膀胱炎、卵巢炎、前列 腺炎和对胃溃疡的治疗。 (g)眼和周围区域的炎症，诸如结膜炎、角膜炎(例如，急性上皮角膜炎、硬币状角 膜炎、间质性角膜炎、盘状角膜炎、神经营养性角膜炎、粘膜斑性角膜炎、单纯疱疹角膜炎、 带状疱疹角膜炎、细菌性角膜炎、真菌性角膜炎、棘阿米巴性角膜炎、盘尾丝虫性角膜炎 (onchocercal  keratitis)、浅层点状角膜炎、溃疡性角膜炎、暴露性角膜炎、光性角膜炎和 隐形眼镜急性红眼)、视神经炎等。 (h)牙龈和口腔的炎症，诸如牙周炎、牙龈炎、牙溃疡等。 (i)与风湿病相关的炎症，诸如风湿性血管炎、类风湿性关节炎、风湿性骨病、强直 性脊柱炎、滑囊炎、克罗恩病、痛风、感染性关节炎、幼年特发性关节炎、骨关节炎、骨质疏松 症、风湿性多肌痛、多肌炎、银屑病性关节炎、硬皮病、干燥综合征、脊椎关节病、系统性红斑 狼疮、肌腱炎等。 18 CN 111601618 A 说　明　书 13/47 页 本发明化合物还可用于治疗呼吸系统的某些特定疾病，诸如肺囊性纤维化、普通 型间质性肺炎、过敏性肺炎、石棉沉着症、肺气肿、肺源性心脏病、肺栓塞等。在特发性肺纤 维化中可提及的特定疾病状态。 特发性肺纤维化是一种弥漫性且致命性的肺间质疾病，其病理特征包括肺泡上皮 损害、肺成纤维细胞的大量增殖、细胞外基质的过度沉积，最终导致不可逆的肺组织损害。 在所述疾病的后期，患有特发性肺纤维化的受试者经历呼吸衰竭和死亡。已发现，本发明化 合物可用于治疗特发性肺纤维化和/或减轻与所述疾病相关的症状。 本发明化合物特别可用于治疗以下肺和/或纤维化病症(无论是否在本文中其他 方面提及)：肺纤维化、肾纤维化、肝纤维化、矽肺、急性支气管炎、慢性支气管炎、气管支气 管炎、支气管哮喘、哮喘持续状态(status  asthmatics)、支气管扩张、上呼吸道感染(包括 普通感冒和流感)、过敏性气道炎症、细菌性肺炎、病毒性肺炎、支原体性肺炎、立克次氏体 (reckettsia)、放射性肺炎、肺炎球菌(包括葡萄球菌、链球菌和革兰氏阴性杆菌)肺炎、肺 念珠菌病(包括曲霉菌病、毛霉菌病、组织胞浆菌病、放线菌病和诺卡氏菌病)、肺真菌病、隐 球菌病、肺脓肿、过敏性肺炎(吕弗琉综合征(Leoffer’s  syndrome))、外源性过敏性肺泡 炎、肺嗜酸粒细胞增多症 (p u l m o n a r y  e o s i n o p h i a ) (嗜酸性粒细胞增多 (eosinophilosis))、阻塞性肺气肿、肺水肿、肺结核、呼吸性碱毒症(酸毒症)、急性肺损伤、 间质性肺病、积脓症、肺纤维瘤和肺心病。 其中发现本发明化合物有用的具体粘膜障碍和疾病例如包括肛门直肠疾病，诸如 腹泻、痔疮、脓肿、瘘管、裂痕、肛门瘙痒、肛窦炎、疣和直肠脱垂；炎性肠病，包括克罗恩病以 及特别是溃疡性结肠炎；妇科疾病，诸如子宫颈炎、阴道炎、骨盆疼痛和障碍；以及牙病，诸 如牙周炎。 通过增加SOD(超氧化物歧化酶)的产生并且降低脂质氧化，本发明化合物可以进 一步具有抗氧化作用。因此可以认为本发明化合物具有抗氧化特性。 本发明化合物还可以具有退热特性，所述退热特性允许治疗发烧和/或减轻其症 状；例如，通过降低受试者的体温，这导致发烧降低。因此，本发明化合物和包含它们的配制 品可以被认为是退热药。 根据本发明的另外方面，提供了一种治疗炎症、炎性障碍、和/或以炎症(例如，作 为症状)为特征的障碍/病症的方法，所述方法包括向需要这种治疗的患者给予本发明化合 物。 为避免疑义，在本发明的上下文中，术语“治疗”、“疗法”和“治疗方法”包括对有需 要的患者进行的治疗性或姑息性治疗以及对易患炎症和/或炎性障碍的患者进行的预防性 治疗和/或诊断。 本发明化合物可以进一步具有抗病毒特性，如与任何病毒感染或疾病的任何症状 (诸如疼痛和/或炎症)的治疗相反，所述抗病毒特性允许在本质上治疗病毒感染，即，通过 干扰病毒在宿主内的复制来治疗病毒感染或病毒性疾病。此类抗病毒特性还可允许预防此 类感染或疾病的发作、保护宿主细胞免受(例如，进一步)病毒感染、预防或停止病毒感染或 疾病的传播(在单个宿主内，或从一个宿主到新宿主)、或预防病毒在宿主中潜伏后的重新 激活。 根据本发明的另外方面，提供了一种治疗病毒感染的方法，所述方法包括向需要 19 CN 111601618 A 说　明　书 14/47 页 这种治疗的患者给予本发明化合物或其盐。 可提及的病毒感染包括以下家族中的病毒引起的那些：腺病毒科(例如，腺病毒)、 乳头瘤病毒科(例如，人乳头瘤病毒)、多瘤病毒科(例如，BK病毒；JC病毒)、疱疹病毒科(例 如，1型单纯疱疹；2型单纯疱疹；水痘带状疱疹病毒；埃-巴二氏病毒；人巨细胞病毒；8型人 疱疹病毒)、痘病毒科(例如，天花)、嗜肝DNA病毒科(例如，乙型肝炎病毒)、细小病毒科(例 如，细小病毒B19)、星状病毒科(例如，人星状病毒)、杯状病毒科(例如，诺瓦克病毒 (norovirus)；诺沃克病毒(Norwalk  virus))、小RNA病毒科(例如，柯萨奇病毒、甲型肝炎病 毒；脊髓灰质炎病毒；鼻病毒)、冠状病毒科(例如，严重急性呼吸道综合征病毒)、黄病毒科 (例如，丙型肝炎病毒；黄热病病毒；登革热病毒；西尼罗河病毒；蜱传脑炎病毒)、逆转录病 毒科(例如，人免疫缺陷病毒；HIV)、披膜病毒科(例如，风疹病毒)、沙粒病毒科(例如，拉沙 病毒)、布尼亚病毒科(例如，汉他病毒(hantavirus)；克里米亚-刚果出血热病毒；汉坦病毒 (Hantaan  virus))、丝状病毒科(例如，埃博拉病毒；马尔堡病毒；拉夫病毒(Ravn  virus))、 正粘病毒科(例如，流感病毒，包括甲型流感病毒(例如，H1N1和H3N2病毒)、乙型流感病毒或 丙型流感病毒)、副粘病毒科(例如，麻疹病毒；腮腺炎病毒；副流感病毒、呼吸道合胞病毒)、 弹状病毒科(例如，狂犬病病毒)、肝炎病毒科(例如，戊型肝炎病毒)、呼肠孤病毒科(例如， 轮状病毒；环状病毒；科罗拉多蜱传热病毒(coltivirus)；班纳病毒(Banna  virus))、以及 未指定家族的病毒，诸如D型肝炎病毒。 可更特别提及的病毒包括1型单纯疱疹和2型单纯疱疹病毒、人乳头瘤病毒、流感 病毒和副流感病毒。 本发明化合物可以进一步具有抗细菌和/或细菌抑制特性，如与任何细菌感染或 疾病的任何症状(诸如疼痛和/或炎症)的治疗相反，所述特性可允许在本质上治疗细菌感 染，即，通过干扰细菌在宿主中的生长或增殖来治疗细菌感染或细菌性疾病。因此，本发明 化合物可以被认为是杀细菌剂和/或优选细菌抑制剂。 此类抗细菌特性还可允许预防此类感染或疾病的发作、保护宿主细胞免受(例如， 进一步)细菌感染、预防或停止细菌感染或疾病的传播(在单个宿主内，或从一个宿主到新 宿主)、或预防细菌在宿主中潜伏后的重新激活。 根据本发明的另外方面，提供了一种治疗细菌感染的方法，所述方法包括向需要 这种治疗的患者给予本发明化合物或其盐。 如本文所公开的，本发明化合物可以进一步具有抗癌特性，如与癌症的任何症状 (诸如疼痛和/或炎症)的治疗相反，所述抗癌特性可允许在本质上治疗癌症，即，与通过干 扰癌症来治疗癌症。此类抗癌特性还可以包括预防此类疾病的发作，例如通过治疗炎症并 且从而预防此类发作。 根据本发明的另一方面，提供了一种治疗癌症的方法，所述方法包括向需要这种 治疗的患者给予本发明化合物或其盐。 可提及的具体癌症包括由口腔粘膜炎、鼻炎、中耳炎、结膜炎、咽炎、喉炎、气管炎、 食道炎、胃炎、小肠结肠炎、子宫颈炎、子宫内膜炎、红斑样皮肤病变等引起的口腔癌、鼻咽 癌、中耳癌、结膜癌、喉咙癌、气管癌、食道癌、胃癌、肠癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、皮肤癌等。 可提及的具体皮肤癌是基底细胞癌。 “患者”包括爬虫类患者、鸟类患者以及优选哺乳动物(特别是人类)患者。 20 CN 111601618 A 说　明　书 15/47 页 根据本发明，本发明化合物优选以呈包含一种或多种药学上可接受的剂型的一种 或多种化合物的药物制剂的形式局部地或全身地，例如口服、静脉内或动脉内(包括通过血 管内和其他血管周围装置/剂型(例如，支架))、肌内、皮肤、皮下、透粘膜(例如，舌下或经 颊)、经直肠、阴道内、透皮、经鼻、经肺(例如，经气管或经支气管)，优选外用地，或通过任何 其他肠胃外途径给予。 [0200] 当待治疗的病症是鼻炎或由气道的病毒感染(例如上呼吸道感染，诸如普通感冒 和流感)引起的炎症时，通过吸入(例如，经鼻)给予是特别有用的。 [0201] 当待治疗的病症是COPD或IPF时，经肺给予是特别有用的。外用给药形式可以通过 产生包含活性成分的喷雾剂来增强，例如通过使用粉末气雾剂或通过水雾的方式使用适当 的雾化技术或设备(诸如喷雾器)来增强。 [0202] 当待治疗的病症是痔疮或溃疡性结肠炎时，经肛门直肠给予是特别有用的，使用 适当的递送手段，诸如待注射的泡沫溶液或栓剂。 [0203] 还可以借助本领域技术人员已知的标准延迟或延长释放包衣技术，通过肠胃外并 且特别是通过经口递送来实现至下胃肠道的给予。具体地，可以靶向上肠或下肠的不同部 分。例如，也可以通过最初经口或肠胃外给予的靶向结肠的药物递送装置来实现结肠给予。 [0204] 本发明化合物的优选递送方式包括以适合于施用至皮肤和/或适当的粘膜表面的 适当的(例如，药学上可接受的和外用可接受的)媒介物和/或可商购的配制品外用至炎症 部位(例如，粘膜(包括口腔粘膜和/或鼻粘膜、肺、肛门直肠区域和/或结肠)，或更优选皮 肤)，但还可以包括口服、静脉内、皮肤或皮下、经鼻、肌内、腹膜内或经肺递送。 [0205] 本发明化合物通常将以一种或多种例如与(例如，药学上可接受的)佐剂、稀释剂 或载体混合的药物配制品的形式给予，所述形式可以适当考虑预期的给予途径(例如，外用 至相关粘膜(包括肺)或优选皮肤)和标准药用或其他(例如，美容)实践来选择。此类药学上 可接受的载体可以是对活性化合物化学惰性的，并且在使用条件下可以无有害副作用或毒 性。此类药学上可接受的载体还可以赋予活性成分的立即释放或调节释放。 [0206] 合适的药物配制品可以是可商购的，或者在其他方面根据文献中描述的技术来制 备，所述文献例如Remington  The  Science  and  Practice  of  Pharmacy ,第22版 , Pharmaceutical  Press(2012)and  Martindale–The  Complete  Drug  Reference,第38版, Pharmaceutical  Press(2014)及其中提及的文件，将所述文件的相关公开内容合并通过引 用特此并入。在其他方面，技术人员可以使用常规技术非创造性地实现包含本发明化合物 的合适配制品的制备。 [0207] 本发明化合物可以呈诸如乳液、悬浮液和/或溶液的水性配制品(例如，(任选)缓 冲的水性配制品(例如，溶液)，诸如含生理盐水的配制品(例如，溶液)、含磷酸盐的配制品 (例如，溶液)、含乙酸盐的配制品(例如，溶液)或含硼酸盐的配制品(例如，溶液))或冻干粉 末的形式。 [0208] 可以将活性成分进一步和/或在替代方案中与适当的赋形剂组合以制备： [0209] ·凝胶配制品(对于所述凝胶配制品，合适的凝胶基质材料包括纤维素衍生物、卡 波姆和海藻酸盐、西黄蓍胶、明胶、果胶、角叉菜胶、结冷胶、淀粉、黄原胶、阳离子瓜尔胶、琼 脂、非纤维素多糖、糖类(诸如葡萄糖)、甘油、丙二醇、乙烯基聚合物、丙烯酸树脂、聚乙烯 醇、羧乙烯基聚合物、以及特别是透明质酸)； 21 CN 111601618 A 说　明　书 16/47 页 [0210] ·洗剂(对于所述洗剂，合适的基质材料包括纤维素衍生物、甘油、非纤维素多糖、 不同分子量的聚乙二醇、和丙二醇)； [0211] ·糊剂或软膏(对于所述糊剂或软膏，合适的糊剂基质材料包括甘油、凡士林、石 蜡、不同分子量的聚乙二醇等)； [0212] ·乳膏或泡沫(对于所述乳膏或泡沫，合适的赋形剂(例如，发泡剂)包括羟丙基甲 基纤维素、明胶、不同分子量的聚乙二醇、十二烷基硫酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚磺酸钠、玉米 麸质粉和丙烯酰胺)； [0213] ·粉末气雾剂(对于所述粉末气雾剂，合适的赋形剂包括甘露醇、甘氨酸、糊精、右 旋糖、蔗糖、乳糖、山梨糖醇和聚山梨酸酯，例如，干粉吸入剂)；和/或 [0214] ·用于口服使用或用于吸入的液体，例如水(气雾剂)喷雾剂(对于所述液体，合适 的赋形剂包括粘度调节剂，诸如透明质酸、糖类(诸如葡萄糖和乳糖)、乳化剂、缓冲剂、醇、 水、防腐剂、甜味剂、调味剂等)； [0215] ·可注射溶液或悬浮液(所述可注射溶液或悬浮液可以是水性的或是其他方面 的，并且对于所述可注射溶液或悬浮液，合适的赋形剂包括溶剂和助溶剂、增溶剂、润湿剂、 悬浮剂、乳化剂、增稠剂、螯合剂、抗氧化剂、还原剂、抗微生物防腐剂、缓冲剂和/或pH调节 剂、填充剂、保护剂和紧张性调节剂)。 [0216] 适当时，此类配制品还可以包含保湿剂，诸如丙三醇、甘油、聚乙二醇、海藻糖、丙 三醇、矿脂、石蜡油、硅油、透明质酸及其盐(例如，钠盐和钾盐)、辛酸(octanoic/caprylic) 甘油三酯等；和/或抗氧化剂，诸如维生素和谷胱甘肽；和/或pH调节剂，诸如酸、碱和pH缓冲 剂。此外，可以包含表面活性剂/乳化剂，诸如十六烷醇(鲸蜡醇)、脂肪酸(例如，硬脂酸)、十 二烷基硫酸钠(月桂基硫酸钠)、脱水山梨糖醇酯(例如，脱水山梨糖醇硬脂酸酯、脱水山梨 糖醇油酸酯等)、单酰基甘油酯(诸如单硬脂酸甘油酯)聚乙氧基化醇、聚乙烯醇、多元醇酯、 聚氧乙烯烷基醚(例如，聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯)、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、乙氧基化脂 肪酸酯、聚氧甘油酯、月桂基二甲基氧化胺、胆汁盐(例如，脱氧胆酸钠、胆酸钠)、磷脂、N,N- 二甲基十二烷基胺-N-氧化物、十六烷基三甲基溴化铵、泊洛沙姆、卵磷脂、固醇(例如，胆固 醇)、糖酯、聚山梨酸酯等；防腐剂，诸如苯氧基乙醇、乙基己基甘油等；以及增稠剂，诸如丙 烯酰基二甲基牛磺酸酯/VP共聚物。具体地，特别是在乳膏配制品中，可以包含硬脂酸、单硬 脂酸甘油酯、十六烷醇、脱水山梨糖醇硬脂酸酯、鲸蜡醇、辛酸/癸酸甘油酯等。 [0217] 本发明化合物以及包含它们的(例如，药物)配制品(例如，如上所述的水溶液、凝 胶、乳膏、软膏、洗剂、泡沫、糊剂和/或干粉)可以进一步与适当的基质材料组合以制备用于 施用在生物表面(诸如皮肤或粘膜表面)上的敷料或治疗性贴剂。因此，可以使用此类配制 品浸渍基质材料，诸如纱布、非织造布或丝质纸(silk  paper)。可替代地，治疗性贴剂可以 是例如创可贴、面膜、眼膜、手膜、脚膜等。 [0218] 凡士林可用于将此类敷料施用至伤口，但我们还已发现，可以将基于PEG(例如， PEG  400)的软膏与基质材料组合以制备敷料，而无需使用凡士林。 [0219] 本发明化合物可以通过悬浮液、干粉或溶液的方式吸入给予。合适的吸入装置包 括加压计量剂量吸入器(pMDI)(所述加压计量剂量吸入器可以是手动致动的或呼吸致动 的，并且可以用或不用标准间隔器装置来进行使用)、干粉吸入器(DPI)(所述干粉吸入器可 以是单剂量的、多剂量的和动力辅助的)、以及软雾吸入器(SMI)或喷雾器(其中以比使用 22 CN 111601618 A 说　明　书 17/47 页 pMDI递送的喷雾剂慢的速度递送在细雾中的气雾剂)。 [0220] 在pMDI中，本发明化合物可以作为分布在推进剂(例如，与赋形剂一起的HFA，所述 赋形剂诸如甘露醇、乳糖、山梨糖醇等)中的微粒化颗粒的加压悬浮液或作为乙醇溶液被给 予以便每次致动递送一个或多个在约20μL与约100μL之间的计量剂量。可以通过手动(例 如，按压)或通过吸入(呼吸致动)来进行致动，其中涉及由弹簧驱动的流量触发系统。 [0221] 在DPI中，本发明化合物可以以在胶囊内的微粉化药物颗粒(尺寸在约1μm与约5μm 之间)(单独地或与较大粒度的无活性赋形剂(例如，甘露醇)共混)的形式给予，所述胶囊可 以预装载或手动装载到装置中。从DPI吸入可以解聚药物颗粒并且将其在气道内分散。 [0222] 在SMI中，本发明化合物可以作为溶液储存在装载到装置中的盒内。弹簧可以将剂 量释放到微型泵中，使得当按钮被按压时释放所述剂量，从而释放出药物溶液的喷射流。 [0223] 也可以使用各种喷雾器来给予呈气雾化溶液的细雾的形式的本发明化合物。喷雾 器可以包括呼吸增强型射流喷雾器(其中，在压缩机的辅助下，空气流移动经过射流(jet)， 使药物溶液被气雾化)；呼吸致动型射流喷雾器(其中，在患者吸入后，在压缩机的辅助下， 空气流移动经过管，使药物溶液被气雾化)；超声喷雾器(其中压电晶体振动，通过加热导致 气雾化，从而导致喷雾)；振动网喷雾器(其中压电晶体使网板振动，导致气雾化以给出非常 细的液滴，而在喷雾过程中溶液的温度不显著变化)。 [0224] 根据本发明的另外方面，提供了一种用于制备如本文所定义的药物组合物/配制 品的方法，所述方法包括使如上文所定义的本发明化合物与如上文所定义的一种或多种药 学上可接受的赋形剂关联。 [0225] 还可以在治疗中使本发明化合物与一种或多种生长因子组合，所述生长因子选自 血小板型生长因子(包括血小板衍生的生长因子，PDGF)；骨肉瘤衍生的生长因子(ODGF)、表 皮生长因子(EGF)、转化生长因子(TGFα和TGFβ)、成纤维细胞生长因子(αFGF、βFGF)、胰岛素 样生长因子(IGF-I、IGF-II)、神经生长因子(NGF)、白介素型生长因子(IL-1、IL-1、IL-3)、 促红细胞生成素(EPO)、和集落刺激因子(CSF)。 [0226] 根据本发明的另外方面，提供了一种(例如，药物)组合物，其包含本发明化合物和 一种或多种药学上可接受的赋形剂，诸如佐剂、稀释剂或载体。优选的配制品适合于局部施 用至例如粘膜(包括口腔粘膜和/或鼻粘膜、肺、肛门直肠区域和/或结肠)或更优选皮肤，并 且因此包含外用可接受的佐剂、稀释剂或载体。 [0227] 因此，进一步提供了适合于、适于和/或包装并且呈现用于外用给药(例如，至粘 膜，包括口腔粘膜和/或鼻粘膜、肺、肛门直肠区域和/或结肠，或优选至皮肤)的包含本发明 化合物的药物组合物，以及此类配制品在通过将所述配制品直接外用给药(例如，至粘膜， 包括口腔粘膜和/或鼻粘膜、肺、肛门直肠区域和/或结肠，或优选至皮肤)的方式治疗包含 炎症的障碍、炎性障碍和/或以炎症(例如，作为症状)为特征的病症中的用途。 [0228] 关于本发明的这个方面，为避免疑义，包含本发明化合物的外用配制品可用于本 文所述任何和所有病症，包括(如上文提及、定义或描述的)在任何和所有炎性障碍的治疗 中和/或在任何和所有的以炎症为特征的障碍的治疗中治疗炎症。类似地，可提及的包含本 发明化合物的外用配制品包括本文提及、定义或描述的那些中的任何和全部。将本文相关 公开内容的任何和全部通过引用与本发明的此方面结合特此并入。 [0229] 包含本发明化合物的外用(例如，基于液体或基于(例如，水性)溶液的配制品可以 23 CN 111601618 A 说　明　书 18/47 页 特别用于伤口恢复，并且可以减轻与伤口本身和伤口治愈过程相关的疼痛(包括隐痛)以及 特别是瘙痒症/瘙痒。包含本发明化合物的此类外用配制品可以特别用于预防和/或抑制体 液从伤口渗出，特别是在急性炎症阶段，例如在遭受烧伤或伤口后的最初48小时内。这可以 预防感染和其他生理反应的风险。包含本发明化合物的此类外用配制品还可以特别用于预 防和/或抑制结疤和黑色素沉着(见上)，无论是否与伤口或其他方面相关。 [0230] 活性成分的给予可以是连续的或间歇的。给予方式还可以通过给予的时机和频率 来确定，但是在炎症的治疗性治疗的情况下还取决于病症的严重程度。 [0231] 取决于障碍和待治疗的患者以及给予途径，可以以不同的治疗有效剂量向有此需 要的患者给予本发明化合物。 [0232] 类似地，配制品中活性成分的量将取决于病症的严重程度以及待治疗的患者，但 是可以由技术人员确定。 [0233] 在任何情况下，医疗从业者或其他技术人员将能够常规确定实际剂量，所述实际 剂量将是最适合于个体患者的，这将取决于病症的严重程度和给予途径。本文提及的剂量 是平均情况的例示；当然可存在其中较高或较低的剂量范围是理所当然的并且它们在本发 明的范围内的单独情况。 [0234] 可以每天在一次与四次之间(例如，三次)给予剂量。 [0235] 在所有情况下以游离(非盐)化合物计算，本发明化合物在水溶液产品中的适当浓 度可以为约0.01mg/mL(例如，约0.1mg/mL)至约15.0mg/mL。 [0236] 在所有情况下以游离(非盐)化合物计算，本发明化合物的适当外用剂量在约0.05 μg至约50μg/cm2处理面积，诸如约0.1μg(例如，约0.5μg)至约20μg/cm2处理面积，包括约1μg 至约10μg/cm2处理面积，诸如约5μg/cm2处理面积的范围内。 [0237] 用于经鼻给予(例如，通过吸入)的本发明化合物的适当剂量在约0.01μg至约 2000mg，例如在约0.1μg至约500mg之间或在1μg至约100mg之间的范围内。可提及的用于经 鼻给予的具体剂量包括在约10μg至约1mg之间，特别是约0.1mg(即，约100μg)的剂量。已经 发现在与鼻通道和粘膜的炎症相关的病症(诸如鼻炎(例如，过敏性鼻炎))的治疗中，每天 经鼻给予约0.1mg本发明化合物是特别有效的。 [0238] 用于经肺给予(例如，通过吸入)的本发明化合物的适当剂量在约0.01μg至约 2000mg，例如在约0.1μg至约500mg之间或在1μg至约100mg之间的范围内。可提及的用于经 肺给予的具体剂量包括在约10μg至约10mg之间，特别是约0.6mg(即，60μg)至6mg的剂量(例 如用于治疗COPD或特发性肺纤维化)。 [0239] 我们优选的是，包含本发明化合物的配制品的pH值在约1.0至约9.0(例如，约3.0 至约8.0)的范围内。 [0240] 在任何情况下，在本发明的上下文中，给予哺乳动物，特别是人的剂量应足以在合 理的时间范围内在哺乳动物中产生治疗反应(如上文所述)。本领域技术人员应认识到，确 切剂量和组成以及最适当的递送方案的选择也将尤其受以下影响：配制品的药理特性，所 治疗病症的性质和严重程度，和接受者的身体状况和精神敏锐度，以及待治疗的患者的年 龄、状况、体重、性别和反应，和疾病的阶段/严重程度，以及患者之间的遗传差异。 [0241] 在本文所述用途和方法中，本发明化合物还可与一种或多种可用于治疗炎症和/ 或炎性障碍的活性成分(其他抗炎剂)组合。因此，此类患者也可能(和/或已经)正在接受基 24 CN 111601618 A 说　明　书 19/47 页 于给予一种或多种此类其他活性成分的疗法，我们将所述疗法意指为在用本发明化合物治 疗之前、同时和/或之后接受处方剂量的一种或多种本文提及的那些活性成分。 [0242] 可在炎症的治疗中与本发明化合物组合使用的此类抗炎剂包括可用于治疗炎症 和/或以炎症作为其症状之一为特征的疾病的治疗剂。取决于待治疗的病症，此类抗炎剂可 以包括NSAID、白三烯受体拮抗剂(例如，孟鲁司特本身)、皮质类固醇、止痛剂和某些酶(诸 如胰蛋白酶)，例如如下文所述。也可以将本发明化合物与白三烯B4(LTB4)组合。 [0243] 在此上下文中，本发明化合物还可以与一种或多种贻贝粘附蛋白(MAP)组合用于 治疗炎症，所述贻贝粘附蛋白包括可能来源于自贻贝物种(诸如紫贻贝(Mytilus  edulis) (蓝贻贝))的任何粘附蛋白，包括来源于或可能来源于贻贝的全长蛋白质，包括所有亚型， 诸如胶原蛋白pre-COL-P、pre-COL-D和pre-COL-NG、贻贝足基质蛋白PTMP和DTMP，以及更优 选mfps或mefps(诸如mefp-2、mefp-3、mefp-4、mefp-5、mefp-6，以及尤其mefp-1)，并且包括 这些蛋白质(诸如mefps)中的任何的混合物或组合。天然存在的MAP可以例如通过混合吸附 色谱法(参见中国专利号ZL200710179491.0)、通过羧甲基离子交换色谱法(参见中国专利 号ZL200710179492.5)和/或通过盐析和透析(中国专利号ZL200910087567.6)来制备。MAP 的商业来源包括USUN  Bio  Co.(中国；作为MAP 出售)、BD  Biosciences (美国)、Kollodis(韩国)和Biopolymer(瑞典)。可替代地，可以使用已知的重组DNA方法来 生产MAP。 [0244] MAP的衍生物(例如，药学上可接受的衍生物)也可以与本发明化合物组合，并且包 括分子量例如在约500Da至约2,000Da的范围内(例如，约1,500Da，诸如约1,200Da，包括约 800Da)的化合物。此类衍生物还可以包括包含与在天然存在的MAP中已鉴定的序列相同的 或作为其(例如，次要)变体(如上文所定义)的氨基酸序列的其他化合物，并且所述其他化 合物可以通过化学方法和/或生物学方法(例如，天然存在的MAP的化学修饰或直接合成)来 合成。 [0245] 例如，如上文所讨论，分离的具有以下序列的十肽化合物： [0246] Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-DOPA-Lys(mefp-1十肽，SEQ  ID  No:4)；和 [0247] Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-Tyr-Lys(SEQ  ID  No:12) [0248] 是可与本发明化合物组合的药学上可接受的低分子量MAP衍生物。 [0249] 可与本发明化合物组合的其他优选试剂包括LTB4(用于治疗伤口和烧伤)、孟鲁司 特(通常用于治疗炎症)和胰蛋白酶(用于治疗与例如病毒感染相关的粘膜炎症)。 [0250] 本发明化合物还可以与其他治疗剂组合，所述其他治疗剂在被给予时已知会产生 作为副作用的炎症。 [0251] 当本发明化合物可以以这种方式与其他治疗剂“组合”时，可以在相同配制品中一 起给予或者在不同配制品中分开(同时或顺序地)给予活性成分。 [0252] 此类组合产品提供用于本发明化合物与其他治疗剂的组合给予，并且因此可以呈 现为单独的配制品，其中这些配制品中的至少一种包含本发明化合物并且至少一种包含其 他治疗剂，或者可以呈现(即，配制)为组合制剂(即，呈现为包含本发明化合物和其他治疗 剂的单一配制品)。 [0253] 因此，进一步提供了： [0254] (1)一种药物配制品，其包含本发明化合物；另一种抗炎剂，或已知会产生作为副 25 CN 111601618 A 说　明　书 20/47 页 作用的炎症的药剂；以及药学上可接受的赋形剂(例如，佐剂、稀释剂或载体)，所述配制品 在下文中被称为“组合制剂”；和 [0255] (2)一种试剂盒，其包括以下组分： [0256] (A)包含与药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体混合的本发明化合物的药物配制 品；和 [0257] (B)包含与药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体混合的另一种抗炎剂或已知会产 生作为副作用的炎症的药剂的药物配制品， [0258] 所述组分(A)和(B)各自以适合于和彼此组合给予的形式提供。 [0259] 在本发明的另外方面，提供了一种用于制备如上文所定义的组合制剂的方法，所 述方法包括使本发明化合物、其他抗炎剂或已知会产生作为副作用的炎症的药剂、和至少 一种(例如，药学上可接受的)赋形剂关联。 [0260] 在本发明的另外方面，提供了一种用于制备如上文所定义的试剂盒的方法，所述 方法包括使组分(A)和(B)关联。如本文所用，对关联的提及将意指使两种组分适合于和彼 此组合给予。 [0261] 因此，关于通过使两种组分彼此“关联”的如上文所定义的用于制备试剂盒的方 法，我们包括，所述试剂盒的两种组分可以： [0262] (i)作为单独的配制品(即，彼此独立)来提供，所述单独的配制品随后被放在一起 以用于在组合疗法中彼此组合使用；或者 [0263] (ii)一起包装并且呈现为“组合包”的单独组分以用于在组合疗法中彼此组合使 用。 [0264] 因此，进一步提供了一种试剂盒，其包括： [0265] (I)本文所定义的组分(A)和(B)之一；以及 [0266] (II)将所述组分与这两种组分中的另一种组合使用的说明。 [0267] 为了提供重复剂量，本文所述试剂盒可以包括多于一种包含适当量/剂量的本发 明化合物的配制品，和/或多于一种包含适当量/剂量的另一种抗炎剂的配制品。如果存在 多于一种配制品(包含任一种活性化合物)，则此类配制品在化合物的剂量、一种或多种化 学组合物和/或一种或多种物理形式的方面可以相同或者也可以不同。 [0268] 关于如本文所述试剂盒，我们将“与......组合给予”意指为，在相关病症的治疗 过程中顺序地、分开地和/或同时地给予包含本发明化合物和其他抗炎剂的相应配制品。 [0269] 因此，关于根据本发明的组合产品，术语“与......组合给予”包括，组合产品的两 种组分(本发明化合物和其他抗炎剂)被一起或在时间上足够接近地给予(任选重复地)，以 使患者在相关病症的治疗过程中能够受到有益作用，所述有益作用大于在如果在相同治疗 过程中在不存在另一种组分的情况下单独给予(任选重复地)包含本发明化合物的配制品 或包含另一种药剂的配制品的情况。对组合是否提供关于具体病症以及在其治疗过程中的 更大有益作用的确定将取决于待治疗或预防的病症，但是可以由技术人员常规地实现。 [0270] 此外，在根据本发明的试剂盒的上下文中，术语“与......组合”包括，两种配制品 彼此可以在给予另一种组分之前、之后和/或同时被给予(任选重复地)。当在此上下文中使 用时，术语“同时给予”和“与......同时给予”包括，单独剂量的本发明的相关化合物和其 他抗炎剂在48小时(例如，24小时)内被彼此给予。 26 CN 111601618 A 说　明　书 21/47 页 [0271] 无论在本文何处(例如，在诸如活性成分的浓度和/或剂量、分子量或pH的量的上 下文中)使用词语“约”时，应意识到，此类变量是近似的并且因此可以相对于本文指定的数 字变化±10％，例如±5％并且优选±2％(例如，±1％)。在这方面，术语“约10％”意指例如 关于数字10的±10％，即，在9％与11％之间。 [0272] 本发明化合物具有以下优点：它们可用于多种以炎症为特征的病症，无论所述病 症是器官炎性疾病本身或者是与炎症相关的或以炎症为特征的(例如，伤口、烧伤或病毒感 染)。 [0273] 本文所述用途和方法还可以具有以下优点：在上文提及的病症的治疗中，相比于 无论用于治疗炎症、炎性障碍或以炎症作为症状为特征的障碍(包括伤口)或者其他方面的 在现有技术中已知的类似化合物或方法(治疗)，它们可以对于医师和/或患者而言更方便， 更大功效，更低毒性，具有更广泛的活性范围，更有效力，产生更少副作用，或者它/它们可 具有其他有用的药理特性。 [0274] 通过以下实施例说明本发明，其中，对于包括本发明化合物在内的各种化合物，图 1示出了在小鼠耳肿胀模型中的肿胀率；图2示出了Hyp含量(并且因此示出了恢复水平)，并 且图3示出了在急性伤口小鼠模型中，伤口组织中的血管内皮生长因子和转化生长因子-β1 的水平；图4示出了未治愈伤口率，图5示出了皮肤再生，并且图6示出了在糖尿病伤口小鼠 模型中的成纤维细胞增殖得分；图7示出了剩余伤口面积相比于初始伤口的比率，图8至图 11示出了在各种伤口治愈标志(分别为皮肤再生、成纤维细胞增殖、炎症和Masson染色)方 面的组织病理分析结果，并且图12示出了在另外的糖尿病伤口模型中不同组中的水肿水 平；图13和图17二者示出了本发明化合物对在另外的小鼠耳肿胀模型中由急性炎症引起的 水肿的作用；图14示出了在另外的急性伤口小鼠模型中的未治愈伤口率；图15示出了在小 鼠耳肿胀模型中本发明化合物与已知抗炎类固醇之间的比较；并且图16示出了在小鼠肺损 伤模型中，对于本发明的不同化合物，肺组织中的图1IL-1β含量。 实施例 [0275] 实施例1 [0276] 孟鲁司特苯乙烯-Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-Tyr-Lys(即，在N-末端处 与氨基酸SEQ  ID  No:12共价键合的孟鲁司特苯乙烯)的合成 [0277] 为了合成3mmol肽SEQ  ID  No:12，遵循以下程序。 [0278] 将Fmoc-Lys-Boc-Wang树脂(9.15g，GLS180322-41301，GL  Biochem，中国上海)装 载到玻璃反应柱中。 [0279] 将二氯甲烷(DCM，200mL；Shandong  Jinling  Chemical  Industry  Co  Ltd，中国山 东)添加到所述柱中并且允许将树脂浸泡约半小时。然后通过真空过滤除去DCM。 [0280] 将树脂用N,N-二甲基甲酰胺(DMF，200mL；Shandong  Shitaifeng  Fertilizer  Industry  Co  Ltd，中国山东)洗涤3次。 [0281] 将在DMF中的20％哌啶溶液(200mL；Shandong  Shitaifeng  Fertilizer  Industry  Co  Ltd，中国山东)作为脱保护溶液添加并且反应20分钟。然后通过真空过滤除去溶液并且 将柱用DMF洗涤六次。 [0282] 将Fmoc-Tyr(tBu)-OH(4.14g；GLS170916-36901，GL  Biochem，中国上海)和2-(1H- 27 CN 111601618 A 说　明　书 22/47 页 苯并三唑-1-基)-1 ,1 ,3 ,3-四甲基胺鎓四氟硼酸盐(TBTU，2.89g；GLS170805-00705，GL  Biochem，中国上海)添加到树脂中。将DMF(150mL)添加到反应柱中，接着添加N,N-二异丙基 乙胺(DIPEA，2.33g；Suzhou  Highfine  Biotech  Co.Ltd，中国江苏)。30分钟后在树脂中检 测到颜色反应，表明反应完成。通过真空过滤除去溶剂。 [0283] 重复上述偶联步骤以偶联相同量(按摩尔计)的剩余氨基酸：Fmoc-Thr(tBu)-OH、 Fmoc-4-Hyp(tBu)-OH、Fmoc-4-Hyp(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc- Pro-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH和Fmoc-Ala-OH。 [0284] 最后，将孟鲁司特(5.47g；MedChemExpress，MCE中国，中国上海)添加到树脂中。然 后在15分钟后排干液体并且用DMF、DCM和甲醇各分别洗涤3次。 [0285] 添加91.5mL(即，10mL/克树脂)裂解物以浸没与树脂结合的含肽化合物，所述裂解 物由95％三氟乙酸(TFA)、2.5％水和2.5％三异丙基硅烷(Tis)构成。在裂解过程中，侧链也 被脱保护。裂解后，通过过滤除去固体支持物并且在减压下浓缩滤液。用乙醚沉淀裂解的肽 并且冻干以产生600mg粗标题化合物。 [0286] 将1mg粗产物溶解于1mL乙腈和水的混合物(1:3)中，并且使用P3000A  HPLC泵和 LC3000半制备设备(制备柱型号：GS-120-10-C18-AP  30mm；Beijing  Chuangxintongheng  Science&Technology  Co.,Ltd .，中国北京)进行检测。计算适当的洗脱梯度并且使用LCMS (分析柱型号：GS-120-5-C18-BIO，4.6*250mm；检测：在220nm处的UV；溶剂A：在MeCN中的 0.1％TFA，溶剂A：在水中的0.1％TFA；流速：1.0mL/min；体积：10μL)在11.035处检测目标 峰。 [0287] 将粗化合物使用阴离子交换树脂脱盐，进行分析并且冷冻干燥。纯化后获得大约 50mg纯化的肽，将其重新测试以进行确认。 [0288] MS:m/z  866.90[M 2H]2 。 [0289] 基于可用的和本文呈现的表征数据，应理解，通过本实施例制备的化合物是以上 鉴定为标题化合物的化合物。另外，实施例1中制备的化合物是本发明化合物，其中在式I的 化合物中，n为0并且式I的化合物在N-末端处与氨基酸SEQ  ID  No:12共价键合。在任何情况 下，实施例1的化合物在下文称为“化合物A”。 [0290] 实施例2 [0291] Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-DOPA-Lys(孟鲁司特苯乙烯)(即，在C-末端 上与氨基酸SEQ  ID  No:4共价键合的孟鲁司特苯乙烯)的合成 [0292] 在Wang树脂上从Fmoc-Lys(Dde)-OH(CAS号：150629-67-7)开始，使用与上面实施 例1中所述程序类似的程序。 [0293] 添加在DMF中的25％哌啶溶液(200mL；Shandong  Shitaifeng  Fertilizer  Industry  Co  Ltd，中国山东)以除去保护性Fmoc基团。 [0294] 添加第二受保护的氨基酸Fmoc-DOPA(缩丙酮)-OH，以及TBTU和DIPEA，直至反应完 成。 [0295] 重复上述偶联步骤以偶联相同量(按摩尔计)的剩余氨基酸：Fmoc-Thr(tBu)-OH、 Fmoc-4-Hyp(tBu)-OH、Fmoc-4-Hyp(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc- Pro-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH和Fmoc-Ala-OH。 [0296] 将肽基-树脂放置于烧瓶中并且用在DMF中的2％肼一水合物(25mL/g)处理。塞住 28 CN 111601618 A 说　明　书 23/47 页 烧瓶并且将混合物在室温下静置3分钟。然后用DMF洗涤树脂。将孟鲁司特(5 .47g； MedChemExpress，MCE中国，中国上海)与TBTU和DIPEA一起添加到树脂中并且使混合物反应 1小时。 [0297] 将受保护的肽基-树脂用91.5mL裂解物(95％TFA、2.5％水和2.5％Tis的混合物) 处理1小时。裂解后，通过过滤除去固体支持物并且在减压下浓缩滤液。用乙醚沉淀裂解的 肽并且冻干以产生大约600mg粗标题化合物。 [0298] 纯化后，获得50mg纯产物。 [0299] MS:m/z  875.75[M 2H]2 。 [0300] 基于可用的和本文呈现的表征数据，应理解，通过本实施例制备的化合物是以上 鉴定为标题化合物的化合物。另外，实施例2中制备的化合物是本发明化合物，其中在式I的 化合物中，n为0并且式I的化合物在C-末端Lys上与氨基酸SEQ  ID  No:4共价键合。在任何情 况下，实施例2的化合物在下文称为“化合物B”。 [0301] 实施例3 [0302] 孟鲁司特苯乙烯-Ala-Lys-Pro-pSer-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-Tyr-Lys(即，在N-末端处 与氨基酸SEQ  ID  No:13共价键合的孟鲁司特苯乙烯)的合成 [0303] 在Wang树脂上从Fmoc-Lys(Dde)-OH(CAS号：150629-67-7)开始，使用与下面实施 例4中所述程序类似的程序。 [0304] 添加在DMF中的25％哌啶溶液(200mL；Shandong  Shitaifeng  Fertilizer  Industry  Co  Ltd，中国山东)以除去保护性Fmoc基团。 [0305] 添加第二受保护的氨基酸Fmoc-Tyr(tBu)-OH(GLS170916-36901，GL  Biochem，中 国上海)，以及ByBOP和DIPEA，直至反应完成。 [0306] 重复上述偶联步骤以偶联相同量(按摩尔计)的剩余氨基酸：Fmoc-Thr(tBu)-OH、 Fmoc-4-Hyp(tBu)-OH、Fmoc-4-Hyp(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-pSer(tBu)-OH、 Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH和Fmoc-Ala-OH。 [0307] 将肽基-树脂放置于烧瓶中并且用在DMF中的2％肼一水合物(25mL/g)处理。塞住 烧瓶并且将混合物在室温下静置3分钟。然后用DMF洗涤树脂。将孟鲁司特(1 .8g； MedChemExpress，MCE中国，中国上海)与TBTU和DIPEA一起添加到树脂中并且使混合物反应 1小时。 [0308] 添加裂解物(10mL/克树脂)以浸没与树脂结合的含肽化合物，所述裂解物由95％ 三氟乙酸(TFA)、2.5％水和2.5％三异丙基硅烷(Tis)构成。在裂解过程中，侧链也被脱保 护。裂解后，通过过滤除去固体支持物并且在减压下浓缩滤液。用乙醚沉淀裂解的肽并且冻 干以产生1.4g粗肽。 [0309] 将1mg粗产物溶解于1mL乙腈和水的混合物(1:3)中，并且使用P3000A  HPLC泵和 LC3000半制备设备(制备柱型号：GS-120-10-C18-AP  30mm；Beijing  Chuangxintongheng  Science&Technology  Co.,Ltd.，中国北京)进行检测。计算适当的洗脱梯度并且用LCMS(分 析柱型号：GS-120-5-C18-BIO，4.6*250mm)检测目标峰。 [0310] 将粗化合物使用阴离子交换树脂脱盐，进行分析并且冷冻干燥，将其重新测试以 进行确认。 [0311] 纯化后，获得98mg纯产物(从粗产物中产率为大约7％)。 29 CN 111601618 A 说　明　书 24/47 页 [0312] MS:m/z  907.3[M 2H]2 。 [0313] 基于可用的和本文呈现的表征数据，应理解，通过本实施例制备的化合物是以上 鉴定为标题化合物的化合物。另外，实施例3中制备的化合物是本发明化合物，其中在式I的 化合物中，n为0并且式I的化合物在N-末端处与氨基酸SEQ  ID  No:13共价键合。在任何情况 下，实施例3的化合物在下文称为“化合物C”。 [0314] 实施例4 [0315] Ala-Lys(孟鲁司特苯乙烯)-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-Tyr-Lys(孟鲁司特苯乙 烯)(即，经由Lys残基与氨基酸SEQ  ID  No:12共价键合的两个孟鲁司特苯乙烯分子)的合成 [0316] 为了合成1mmol肽SEQ  ID  No:12，遵循以下程序。 [0317] 将在Wang树脂上的Fmoc-Lys(Dde)-OH(CAS号：150629-67-7)(3g，GL  Biochem，中 国上海)装载到玻璃反应柱中。 [0318] 将二氯甲烷(DCM，60mL；Shandong  Jinling  Chemical  Industry  Co  Ltd，中国山 东)添加到所述柱中并且允许将树脂浸泡约半小时。然后通过真空过滤除去DCM。 [0319] 将树脂用N,N-二甲基甲酰胺(DMF，60mL；Shandong  Shitaifeng  Fertilizer  Industry  Co  Ltd，中国山东)洗涤3次。 [0320] 将在DMF中的20％哌啶溶液(30mL；Shandong  Shitaifeng  Fertilizer  Industry  Co  Ltd，中国山东)作为脱保护溶液添加并且反应20分钟。然后通过真空过滤除去溶液并且 将柱用DMF洗涤六次。 [0321] 将Fmoc-Tyr(tBu)-OH(1.4g；GLS170916-36901，GL  Biochem，中国上海)和苯并三 唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(ByBOP，1 .56g；Suzhou  Highfine  Biotech  Co .Ltd，中国江苏)添加到树脂上，接着添加DIPEA(1mL；Suzhou  Highfine  Biotech  Co.Ltd，中国江苏)。30分钟后在树脂中检测到颜色反应，表明反应完成。通过真空过滤除去 溶剂。 [0322] 重复上述偶联步骤以偶联相同量(按摩尔计)的剩余氨基酸：Fmoc-Thr(tBu)-OH、 Fmoc-4-Hyp(tBu)-OH、Fmoc-4-Hyp(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc- Pro-OH、Fmoc-Lys(Dde)-OH和Boc-Ala-OH。 [0323] 将肽基-树脂放置于烧瓶中并且用在DMF中的2％肼一水合物(25mL/g)处理。塞住 烧瓶并且将混合物在室温下静置3分钟。然后用DMF洗涤树脂。将孟鲁司特(3 .6g； MedChemExpress，MCE中国，中国上海)与TBTU和DIPEA一起添加到树脂中并且使混合物反应 1小时。 [0324] 添加裂解物(30mL；10mL/克树脂)以浸没与树脂结合的含肽化合物，所述裂解物由 95％三氟乙酸(TFA)、2.5％水和2.5％三异丙基硅烷(Tis)构成。在裂解过程中，侧链也被脱 保护。裂解后，通过过滤除去固体支持物并且在减压下浓缩滤液。用乙醚沉淀裂解的肽并且 冻干以产生1.6g粗肽。 [0325] 将1mg粗产物溶解于1mL乙腈和水的混合物(1:3)中，并且使用P3000A  HPLC泵和 LC3000半制备设备(制备柱型号：GS-120-10-C18-AP  30mm；Beijing  Chuangxintongheng  Science&Technology  Co.,Ltd.，中国北京)进行检测。计算适当的洗脱梯度并且用LCMS(分 析柱型号：GS-120-5-C18-BIO，4.6*250mm)检测目标峰。 [0326] 将粗化合物使用阴离子交换树脂脱盐，进行分析并且冷冻干燥，将其重新测试以 30 CN 111601618 A 说　明　书 25/47 页 进行确认。从1.6g粗肽中获得20mg纯化的肽(纯度为90％至95％)。 [0327] MS:m/z  762.2[M 3H]3 。 [0328] 基于可用的和本文呈现的表征数据，应理解，通过本实施例制备的化合物是以上 鉴定为标题化合物的化合物。另外，实施例4中制备的化合物是本发明化合物，其中在式I的 化合物中，n为0并且式I的化合物经由Lys残基与氨基酸SEQ  ID  No:12共价键合。在任何情 况下，实施例4的化合物在下文称为“化合物D”。 [0329] 实施例5 [0330] 小鼠耳肿胀模型I [0331] 将由Changzhou  Cvens  Experimental  Animal  Co.Ltd .提供的35只6-8周龄并且 平均体重为18-25g的健康雄性BALB/c小鼠圈养并且护理约1周，然后进行实验。圈养温度为 25℃-27℃，其中湿度为74％，12小时周期的光照与黑暗交替，并且自由获取食物和水。将小 鼠随机分为7组，如下表1所述，其中每组5只小鼠。 [0332] 每只小鼠的左耳用作自体对照。将每只小鼠的右耳通过各种不同的处理进行处 理，如下表1所概括。将20μL二甲苯(Shanghai  Aladdin  Bio-Chem  Technology  Co.,Ltd .， 中国上海)施用于每只小鼠的右耳的内侧和外侧二者。在约4分钟内，耳开始肿胀。然后，将 0.08g每种研究治疗剂或媒介物施用于每组的右耳。将小鼠放回它们的笼中。 [0333] 制造基于孟鲁司特钠的乳膏(Mon)，所述乳膏由以下组分组成：孟鲁司特钠 (200mg；Arromax  Pharmatech  Co.,Ltd，中国苏州)、硬脂酸(2g)、单硬脂酸甘油酯(2g)、十 六烷醇(2g)、甘油(5g)和氢氧化钠(0.25g)(均来自Sinopharm  Chemical  Reagent  Co.Ltd， 中国上海)；丙烯酰基二甲基牛磺酸铵/VP共聚物(0.13g；Clariant  Chemical(Guangzhou) Co .,Ltd .，中国广州)；苯氧基乙醇(0.3g)和乙基己基甘油(0.1g)(二者均来自Shanghai  Rayson  Chemicals  Co.,Ltd.，中国上海)；和纯化水(88.42g)。 [0334] 将硬脂酸、单硬脂酸甘油酯和十六烷醇混合并且在搅拌下加热至85℃直至混合物 完全熔化。将丙烯酰基二甲基牛磺酸铵/VP共聚物、纯化水和氢氧化钠在85℃搅拌下混合以 形成均匀的胶体悬浮液。然后在搅拌下将孟鲁司特钠、甘油、苯氧基乙醇和乙基己基甘油合 并直至孟鲁司特完全溶解。 [0335] 将共聚物/水混合物添加到含硬脂酸的混合物中，通过使用乳化设备快速搅拌五 分钟使其乳化。将所得乳液冷却至55℃，在混合下添加含孟鲁司特的混合物。允许将所得混 合物冷却至室温以获得成品。 [0336] 使用相同程序制造地塞米松乳膏(DEX)，不同之处在于用0 .4mg地塞米松 (Shanghai  Aladdin  Bio-Chem  Technology  Co.,LTD，中国上海)替代孟鲁司特。 [0337] 制造包含化合物A的凝胶(“A凝胶”)，所述凝胶由以下组分组成：0.5g化合物A粉末 (获得自GL  Biochem，中国上海；如上面实施例1中所述制备)、甲基纤维素(2.2g；Shandong  Guangda  Technology  Development  Co.,Ltd.，中国山东)、甘油(11g)和丙二醇11g(二者均 来自Sinopharm  Chemical  Reagent  Co.Ltd.)、和纯化水(75.3g)。 [0338] 将甲基纤维素和水混合在一起并且搅拌直至形成均匀的胶体悬浮液。然后，将化 合物A粉末、甘油和丙二醇添加到甲基纤维素/水混合物中，并且将所得混合物快速搅拌5分 钟以获得成品。 [0339] 通过与如上针对化合物A(“1凝胶”)所述相同的方法制造基于Ala-Lys-Pro-Ser- 31 CN 111601618 A 说　明　书 26/47 页 Tyr-Hyp-Hyp-Thr-Tyr-Lys的凝胶(化合物1(SEQ  ID  No:12)；1.5g；作为粉末获得自中国上 海GL  Biochem并且是通过与上面实施例1中所述方法基本相同的方法制造的，其中在末端 不偶联孟鲁司特)。 [0340] 下表1中的媒介物-1是不含活性成分的乳膏基体。下表1中的媒介物-2是不含活性 成分的凝胶基体。二者均使用如上所述相同程序制造，其中不添加活性成分。 [0341] 表1 [0342] [0343] 40分钟后通过颈脱位处死小鼠。切下左耳和右耳。使用直径为8mm的皮袋 (Electron  Microscopy  Sciences，美国宾夕法尼亚州哈特菲尔德)从两耳的相同部位取下 耳碎片。记录重量并且如下计算肿胀率： [0344] 肿胀率＝(右耳重量-左耳重量)/左耳重量×100％ [0345] 并且结果在下表2和图1中示出。 [0346] 表2 [0347] 模型 媒介物1 媒介物2 Dex乳膏 Mon乳膏 化合物1 化合物A 97.4 95％ 97％ 45％ 38％ 61.5％ 55％ 0.03 0.2 0.35 0.19 0.25 0.17 0.06 [0348] 以上结果显示，两种测试化合物均降低了二甲苯诱导的肿胀。 [0349] 实施例6 [0350] 急性伤口模型I [0351] 由Changzhou  Cvens  Experimental  Animal  Co.Ltd提供6-8周龄雄性C57BL/6小 鼠。在进行任何实验之前，将小鼠在标准条件下(在恒定温度或22±2℃下，12小时周期的光 照与黑暗交替)圈养并且用水饲喂标准小鼠饮食持续约一周。 [0352] 使用腹膜内3％水合氯醛(Sinopharm  Chemical  Reagent  Co.,Ltd .；1mL/10g体 重)诱导全身麻醉。用婴儿剃毛器剃除背部毛发并且用乳膏脱毛。擦拭皮肤区域并且用75％ 醇灭菌两次。 [0353] 使用直径为18mm的EMS皮肤活组织检查打孔器(Electron  Microscopy  Sciences， 邮政信箱550，宾夕法尼亚州哈特菲尔德工业路(Industry  Road)1560号，PA  19440)在背部 中线上制造圆形伤口。去除全厚度的皮肤并且深度到达筋膜。将伤口在不缝合的情况下敞 32 CN 111601618 A 说　明　书 27/47 页 开。 [0354] 从第0天到第7天每天一次，以50μL/伤口外用给药不同的药物。给予模型组相同量 的生理盐水。本实验中有7个组，包括56只小鼠，如下表3所示。 [0355] 购买重组人表皮生长因子(rhEGF，Shanghai  Haohai  Biological  Technology  Co.Ltd，中国上海)并且根据制造商的说明进行制备。将冻干的rhEGF粉末(100000IU/小瓶) 溶解于20mL生理盐水中以制造浓度为5000IU/mL的溶液。本实验中rhEGF的工作剂量为 1285IU/伤口。 [0356] 从GL  Biochem获得作为粉末的化合物B，并且如上面实施例2中所述制备。从GL  Biochem获得作为粉末的Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-DOPA-Lys(化合物2；SEQ  ID  No:4)，并且基本上如上面实施例2中所述制备，但是在末端不偶联孟鲁司特。将粉末在-20 ℃下储存并且以下表3所指示的浓度溶解于盐水中(L和H分别指示低剂量和高剂量)。 [0357] 表3 [0358] [0359] 羟基脯氨酸(Hyp)是一种非蛋白原的氨基酸，存在于胶原蛋白中，胶原蛋白含有按 质量计大约12％-14％的Hyp。因此，组织水解物中的Hyp含量是存在的胶原蛋白的量的直接 量度，并且伤口组织中存在的Hyp含量直接指示恢复水平。在开始处理后第4天和第7天各组 的Hyp含量在图2中示出。 [0360] 结果显示，测试化合物改善了所有处理组的Hyp含量。较低剂量的化合物2和化合 物B二者均在早期(第4天(D4))显示出作用。在第7天(D7)，较高剂量的两种测试化合物也显 示出对Hyp产生的加速作用。 [0361] 血管内皮生长因子(VEGF)和转化生长因子-β1(TGF-β1)在伤口治愈过程中起重要 作用。VEGF和TGF-β1通常在其中发生血管生成的组织中共表达。还检测伤口组织中这两种 因子的含量并且在图3中示出。 [0362] 结果显示，两种肽可以刺激VEGF和TGF-β1的产生。 [0363] 实施例7 33 CN 111601618 A 说　明　书 28/47 页 [0364] 糖尿病伤口模型I [0365] 对体重为35-45g/只小鼠的8至12周龄雄性db/db小鼠(C57BL/KsJ-db/db) (Changzhou  Cvens  Experimental  Animal  Co.Ltd .)进行采用与上面实施例6中所述方案 基本相同的方案的类似实验。 [0366] 使用直径为18mm的EMS皮肤活组织检查打孔器来制造伤口。 [0367] 从第0天到第12天每天一次，以50μL/伤口外用给药不同的药物。给予模型组相同 量的生理盐水。本实验中有7个组，包括52只小鼠，下表4中示出。 [0368] 表4 [0369] [0370] 从第0天起，每隔一天拍摄各伤口的照片。将照片扫描到计算机中并且使用ImageJ 图像分析软件(National  Institute  of  Health，美国)计算伤口面积。 [0371] 未治愈伤口面积表示为占原始伤口面积的百分比： [0372] At/A0×100％， [0373] 其中A0和At分别是指在第0天的初始面积和在测量日期(时间t)的伤口面积。 [0374] 未治愈伤口率在图4中示出。结果显示，化合物A对改善伤口恢复具有最佳作用并 且好于化合物1与孟鲁司特的组合的作用。 [0375] 分析组织学样本，并且如下估计皮肤再生得分、成纤维细胞增殖得分、胶原蛋白再 生得分(Masson得分)和炎症得分。 [0376] 在光学显微镜下观察HE和Masson染色的切片并且根据以下标准评分(1、2或3分)。 当新生皮肤覆盖面积不大于伤口面积的三分之一时，皮肤再生得分为1分；当新生皮肤覆盖 面积大于伤口面积的三分之一但小于三分之二时，得分为2分；并且当新生皮肤覆盖面积为 伤口面积的至少三分之二时，得分为3分。 [0377] 皮肤再生得分在图5中示出。 [0378] 按以下标准对成纤维细胞增殖进行评分，并且呈现于图6中。 [0379] [0380] [0381] 病理分析结果显示，化合物A和化合物1可促进皮肤再生和成纤维细胞增殖。缀合 34 CN 111601618 A 说　明　书 29/47 页 物化合物A略好，特别是在成纤维细胞增殖得分方面。 [0382] 实施例8 [0383] 糖尿病伤口模型II [0384] 对体重为35-45g/只小鼠的8至12周龄雄性db/db小鼠(C57BL/KsJ-db/db) (Changzhou  Cvens  Experimental  Animal  Co.Ltd .)进行采用与上面实施例7中所述方案 基本相同的方案的类似实验。 [0385] 以与上面实施例6和7中所述实质上相同的方式制备不同浓度的化合物A和化合物 1(如在下表5中分别指示为“A”和“1”)。将中等剂量和低剂量的孟鲁司特钠(下表5中为 “Mon”；MedChemExpress，MCE中国，中国上海)溶解于超纯水中以获得如下表5所述浓度的溶 液(L、M和H分别指示低剂量、中等剂量和高剂量)。鉴于孟鲁司特在水中的低溶解度，通过将 孟鲁司特溶解于100％乙醇中并且然后添加超纯水以形成在20％乙醇中浓度为20μg/μL的 溶液来制备高剂量孟鲁司特测试样品。 [0386] 从第0天到第12天每天一次，以50μL/伤口外用给药不同的药物，如下表5所示。对 照组没有遭受的伤口。 [0387] 表5 [0388] [0389] 给予模型组相同量的生理盐水。每组中是8只小鼠。对照组中是4只小鼠。对于对照 组，在第7天，使用在伤口产生过程中取下的皮肤碎片作为样品。 [0390] 在前12天中药物对伤口治愈的作用在下表6和图7中示出，其中显示了不同组中剩 余伤口面积占初始伤口的比率(±SD，在表6的情况下)。 [0391] 表6 35 CN 111601618 A 说　明　书 30/47 页 [0392] [0393] 数据显示，低剂量的化合物1在遭受伤口后的较早阶段引起伤口治愈并且中等剂 量的化合物A在较晚阶段引起较好的作为。 [0394] 如上面实施例7中所述分析组织学样品，不同之处在于对Masson染色样品的胶原 蛋白沉积评分标准如下。与正常组织进行比较。无清晰蓝色染色给0分；以分散状图案出现 的蓝色纤维评分为1分；如果出现更多蓝色纤维，则将其评分为2分，并且扩散的蓝色给3分。 [0395] 组织病理分析结果显示在图8至图11中，并且显示所有处理组均加速伤口治愈，尤 其是中等剂量的化合物A，其对胶原蛋白沉积显示出显著的促进作用。 [0396] 还通过组织病理分析评估不同组中的水肿水平并且结果在图12中示出。数据显 示，中等剂量的化合物A给出最佳作用。 [0397] 实施例9 [0398] 小鼠耳肿胀模型II [0399] 在35只健康雄性BALB/c小鼠上进行采用与上面实施例5中所述方案基本相同的方 案的类似实验。将小鼠随机分为7组，如下表7所述，其中每组5只小鼠。 [0400] 化合物A、B、C和D均从GL  Biochem  Ltd.获得。 [0401] 在下表7中，制备了化合物A、B、C和D的水凝胶，其由一定量的所述活性成分，以及 甲基纤维素(2.5％)、丙二醇(11％)、甘油(11％)、乙酸(pH调节剂；0至0.5g)。所有赋形剂均 从Sinopharm  Chemical  Reagent  Co.Ltd.获得。凝胶用注射用水制成。 [0402] 使用醋酸地塞米松乳膏(在10g乳膏中的5mg  DEX，Pharmaceutical  Co.Ltd.，中国 安徽)作为阳性对照。 [0403] 将40μL各种处理药物施用至每组的右耳。 [0404] 表7 36 CN 111601618 A 说　明　书 31/47 页 [0405] [0406] 结果在图13中示出。所述缀合物在消除由急性炎症引起的水肿方面均具有非常好 的作用。 [0407] 实施例10 [0408] 急性伤口模型II [0409] 对6至8周龄雄性C57BL/6小鼠进行采用与上面实施例6所述方案基本相同的方案 的类似实验， [0410] 使用直径为12mm的EMS皮肤活组织检查打孔器在背部中线上制造两个圆形伤口。 这两个圆彼此相切，并且沿上切线和下切线切开所述圆之间的皮肤。使用剪刀修剪伤口。伤 口是椭圆形的。 [0411] 从第0天到第7天每天一次，以50μL/伤口外用给药不同的药物。给予模型组相同量 的生理盐水。本实验中有10个组，包括80只小鼠，下表8中示出。 [0412] 表8 37 CN 111601618 A 说　明　书 32/47 页 [0413] [0414] 从第0天起每隔一天拍摄各伤口的照片，并且如上面实施例6中所述表示未治愈伤 口区域。 [0415] 未治愈伤口率在图14中示出。结果显示，与其他组相比，所有四种缀合物(A、B、C和 D)在促进伤口治愈方面均具有可比较的效果。 [0416] 实施例11 [0417] 乳膏配制品 [0418] 将山梨糖醇硬脂酸酯(0.6g)、聚山梨酸酯-80(1g)、十六醇(2g)、辛酸/癸酸甘油酯 (5g)、液体石蜡(4g)、单硬脂酸甘油酯(2g)和凡士林(5g)(均来自Sinopharm  Chemical  Reagent  Co.Ltd.)混合在一起，同时搅拌并且加热至85℃直至混合物完全熔化。 [0419] 将甲基纤维素(0.5g)、甘油(4g)、海藻糖(0.5g)、聚乙二醇200(4g)、苯氧基乙醇 (0.3g)和乙基己基甘油(0.1g)(均来自Sinopharm  Chemical  Reagent  Co.Ltd .)与纯化水 (69.45g)一起混合，同时搅拌并且加热至85℃以给出均匀的胶体悬浮液。 [0420] 使用乳化设备在快速搅拌下将以上获得的两种混合物与硅油(0.5g)一起混合5分 钟。将所得乳液冷却至55℃。 [0421] 将化合物A(50mg；参见上面实施例1)溶解于纯化水(1g)中，并且然后在搅拌下与 乳液混合物合并直至其均匀。允许将所得混合物冷却至室温以获得成品。 [0422] 实施例12 [0423] 喷雾剂配制品I [0424] 将羟丙基甲基纤维素(HPMC；0.1g)、羟乙基纤维素(0.1g)、葡萄糖(5g)、苯氧基醇 (0.5g)(均来自Sinopharm  Chemical  Reagent  Co.,Ltd .)和纯化水(93.25g)一起搅拌，同 时加热至85℃以提供均匀的胶体悬浮液。然后将混合物冷却至室温。 38 CN 111601618 A 说　明　书 33/47 页 [0425] 将化合物A(50mg；参见上面实施例1)溶解于1g纯化水中。将此溶液添加到胶体混 合物中。均匀混合给出成品。 [0426] 实施例13 [0427] 喷雾剂配制品II [0428] 使用与上面实施例12中所述程序实质上相同的程序通过将相同的化合物A水溶液 添加到由稍多的HPMC和羟乙基纤维素(各0.2g)以及相同量的其他组分和94.05g纯化水制 成的胶体混合物中来制备第二喷雾剂。 [0429] 实施例14 [0430] 凝胶配制品I [0431] 使用与上面实施例12和13中所述程序基本相同的程序通过将相同的化合物A水溶 液添加到由各1g的HPMC和羟乙基纤维素以及相同量的其他组分和91.45g纯化水制成的胶 体混合物中来获得此配制品。 [0432] 实施例15 [0433] 凝胶配制品II [0434] 使用与上面实施例12至14中所述程序基本相同的程序通过将相同的化合物A水溶 液添加到由0.5g  HPMC和1.5g羟乙基纤维素以及相同量的其他组分和91.45g纯化水制成的 胶体混合物中来获得第二凝胶。 [0435] 实施例16 [0436] 凝胶配制品III [0437] 使用与上面实施例12至15中所述程序实质上相同的程序获得第三凝胶。首先将甲 基纤维素(2.2g)和11g丙二醇(均来自Sinopharm  Chemical  Reagent  Co .,Ltd .)和甘油 (11g)与74.75g纯化水混合。将相同的化合物A水溶液添加到所得胶体混合物中提供成品。 [0438] 实施例17 [0439] 临床实施例I-过敏性鼻炎患者 [0440] 一名患有过敏性鼻炎的45岁女性患者具有周期性流鼻水和鼻阻塞。 [0441] 将装在鼻喷雾剂瓶中的喷雾剂配制品I(参见上面实施例12)单独地给予每个鼻 孔，每天2至3次，持续5天。 [0442] 指示患者从第一剂喷雾剂配制品开始不要使用她现有的药物(口服孟鲁司特钠和 布地奈德)。 [0443] 从第二次给予开始，流鼻水和鼻阻塞明显得到缓解。患者发现在给予新配制品过 程中，她感觉不需要口服孟鲁司特钠。已发现布地奈德在使用两个月内失去了功效。 [0444] 实施例18 [0445] 临床实施例II-烧伤患者症状缓解 [0446] 一名男性患者在从VAS为4至5的严重二度烧伤中恢复的过程中在他的上臂内侧有 严重瘙痒感。 [0447] 向伤口给予喷雾剂配制品I(参见上面实施例12)并且瘙痒在一分钟内得到缓解。 [0448] 实施例19 [0449] 临床实施例III-受伤患者症状缓解 [0450] 一名患者接受手术并且之后因手术切口感到严重疼痛。 39 CN 111601618 A 说　明　书 34/47 页 [0451] 向切口给予喷雾剂配制品I(参见上面实施例12)并且疼痛在一分钟内得到缓解。 [0452] 实施例20 [0453] 临床实施例IV-过敏性鼻炎患者 [0454] 38名患有季节性和/或持续性过敏性鼻炎的受试者参加了本研究。大多数受试者 患有疾病多年并且尝试了用包括类固醇在内的若干种药物的治疗。指示受试者从第一剂喷 雾剂配制品开始不要使用他们现有的药物。 [0455] 将装在鼻喷雾剂瓶中的喷雾剂配制品I(参见上面实施例12)单独地给予每个鼻 孔，每天2次，持续7天。 [0456] 4名受试者未完成所述研究。从其余34名受试者收集的反馈信息在下表9中示出。 [0457] 症状发生率等于具有特定症状的受试者的数量除以受试者总数量。有效率等于其 症状得到缓解的受试者的数量除以具有特定症状的受试者的总数量。 [0458] 表9 [0459] [0460] 患者发现喷雾剂配制品易于给予并且不产生刺激。鼻壅塞连同持续打喷嚏和眼睛 瘙痒得到迅速缓解。使用喷雾剂7天后，由临床医生检查16名受试者。50％的患者显示出更 小鼻甲肿胀，68.75％具有更少鼻腔分泌物，并且43％表现出降低的粘膜水肿。没有副作用 的报告。 [0461] 实施例21 [0462] 临床实施例V-通过雾化吸入缓解喉咙痛 [0463] 一名80岁白种人男性具有与普通感冒的发作相关的感觉。症状包括喉咙瘙痒和隐 痛，以及鼻壅塞。将5mL喷雾剂配制品I(参见上面实施例12)装载到便携式喷雾器(Feellife  Medical  INC，中国深圳)中。将喷雾器的吸嘴放置到嘴中并且然后打开装置。持续处理大约 10分钟。吸入仅进行一次。在第二天早上，所有感冒症状消失。 [0464] 实施例22 [0465] 临床实施例VI-烧伤患者的手术疼痛缓解 [0466] 一名大的深度二度烧伤覆盖其全部背部的患者住院在北京积水潭医院(Beijing  Jishuitan  Hospital)烧伤科。他受到针对严重烧伤的处理并且在每次更换其敷料时都遭 受被他描述为无法忍受的手术疼痛的疼痛，其中VAS为7至9。 [0467] 将装在喷雾剂瓶中的喷雾剂配制品I(参见上面实施例12)直接喷雾到烧伤伤口的 表面上。5分钟后，移除敷料并且换上新敷料。根据临床医生的评估，在使用喷雾剂后，手术 疼痛减轻约三分之二。 [0468] 实施例23 40 CN 111601618 A 说　明　书 35/47 页 [0469] 临床实施例VII-激光外科手术患者的手术疼痛缓解 [0470] 在本研究中测试两名受试者。受试者接受了通过点阵激光处理进行的皮肤色素沉 着去除外科手术。 [0471] 将装在喷雾剂瓶中的喷雾剂配制品I(参见上面实施例12)喷雾到手术区域的表面 上。10分钟后，开始激光手术。根据临床医生的评估，在使用喷雾剂后，手术疼痛减轻约三分 之一。 [0472] 对于接受此类激光外科手术的受试者，在处理后经历大约30分钟的灼痛也是正常 的。然而，在本研究中，受试者之后没有感到任何灼痛。 [0473] 实施例24 [0474] 临床实施例VIII-发烧和咳嗽缓解 [0475] 一名5岁男孩得了感冒并且发展为厉害的咳嗽。他的体温在夜间达到38℃并且他 抱怨有喉咙痛。 [0476] 将装在喷雾剂瓶中的喷雾剂配制品I(参见上面实施例12)作为口服喷雾剂每天给 予4次。发烧和喉咙痛的症状在第二天消失。3天后咳嗽消失。 [0477] 实施例25 [0478] 临床实施例IX-接触性皮炎缓解 [0479] 一名53岁女性在其脖子上具有接触性皮炎。在佩戴金属项链时出现皮疹和瘙痒。 [0480] 将装在喷雾剂瓶中的喷雾剂配制品I(参见上面实施例12)喷雾到患处。5分钟内瘙 痒感得到缓解。服用2剂后(晚上一剂并且第二天早晨一剂)，所有症状均消失。 [0481] 实施例26 [0482] 临床实施例X-感冒缓解 [0483] 患者是42岁女性和她的10岁儿子。他们都得了感冒，遭受喉咙痛和流鼻涕。 [0484] 装在喷雾剂瓶中的喷雾剂配制品I(参见上面实施例12)作为口服喷雾剂给予。服 用2剂后(晚上一剂并且第二天早晨一剂)，所有症状都消失。 [0485] 实施例27 [0486] 临床实施例XI-过敏性皮肤障碍 [0487] 一名具有敏感性皮肤的27岁女性患有痤疮样过敏性皮肤障碍，并且她的面部有轻 微瘙痒。她还具有在其面部的发红和肿胀的斑块。 [0488] 将装在喷雾剂瓶中的喷雾剂配制品I(参见上面实施例12)直接施用到面部患处， 一次2次喷雾，每天3次。30分钟内瘙痒感得到缓解。两周后病变完全消失。 [0489] 实施例28 [0490] 动物模型I-特发性肺纤维化(IPF) [0491] 实验动物和分组：在经过7天的适应性饲喂后，将72只成年雄性Sprague  Dawley大 鼠分为6组：假手术(无感染并且无处理)组、IPF模型组(无处理)、高药物剂量测试组、中等 药物剂量测试组、低药物剂量测试组和阳性对照组。 [0492] 将化合物A(实施例1)的剂量设定为0.5mg/mL、0.1mg/mL和0.02mg/mL，分别作为高 剂量、中等剂量和低剂量。以30mg/kg单推注剂量口服给予吡非尼酮( Beijing  Continent  Pharmaceutical  Co.,Ltd.，中国北京)用作阳性对照药物。 [0493] 建模和给予：通过气管内滴注博来霉素建立肺纤维化模型。将大鼠麻醉并且以仰 41 CN 111601618 A 说　明　书 36/47 页 卧姿势放置在手术台上以暴露出气管。通过气管软骨环之间的间隙将博来霉素(5mg/kg)盐 水溶液注入气管。给予假手术组等体积的生理盐水。给予后迅速地将大鼠竖直提起并且旋 转以均匀分散药物。一旦大鼠恢复，在大约5天后，根据模型计划连续28天给予它们不同的 药物。实验计划在下表10中示出。 [0494] 表10 [0495] 组 处理 剂量 假手术 盐水 50μl IPF模型组 盐水 50μl 阳性对照 吡非尼酮 250mg/kg 化合物A，高 化合物A 975μg/只大鼠 化合物A，中等 化合物A 195μg/只大鼠 化合物A，低 化合物A 39μg/只大鼠 [0496] 研究以下观察指标。 [0497] 1)每天对大鼠的活动、对外界刺激的敏感性、皮毛光泽、毛发颜色、嘴、嘴唇、鼻、重 量、饮食、呼吸和死亡率进行总体观察。 [0498] 2)确定大鼠的肺器官系数和肺干湿重量比率(即，动物的肺器官重量与动物的体 重的比率，即，内脏与体重的比率)。 [0499] 3)在肺纤维化形成的过程中，测量生长因子(TGF-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和 与纤维化发作有关的其他细胞因子的表达。使用标准ELISA方法检测肺组织中TGF-β、TNF- α、IL-1β、丙二醛(MDA)的含量以及超氧化物歧化酶(SOD)的活性。 [0500] 4)检测肺中胶原蛋白和纤维蛋白代谢物(羟基脯氨酸)的含量，作为评估肺纤维化 程度的特定指标。 [0501] 5)检测肺组织的组织病理变化，所述组织病理变化是最重要且最客观的用于评估 肺纤维化的指标。 [0502] 结果显示，化合物A抑制TGF-β和炎性细胞因子的过度产生。结果还显示，测试药物 具有抗氧化作用，通过增加SOD产生并且降低脂质氧化。 [0503] 实施例29 [0504] 动物模型II-镇咳实验：小鼠氨诱导咳嗽方法。 [0505] 将60只小鼠根据其体重随机分为5组：CMC-Na阴性对照组，氢溴酸右美沙芬阳性对 照组，以及高剂量、中等剂量和低剂量(化合物A，实施例1)组。每组含有12只小鼠，6只雄性 和6只雌性。 [0506] 通过雾化吸入(0.15mL/min)1min给予测试药物，每天一次，持续5天。给予阳性对 照药物，以10mg/kg通过胃内给予，每天一次，持续5天。 [0507] 在最后一次药物给予(化合物A或阳性对照药物)后1、2和4小时，将小鼠放置在倒 置的烧杯中。将1mL氨水(25.0％至28.0％)放置在沸水浴的顶部并且蒸发到烧杯中。通过氨 蒸气刺激小鼠持续63.1、50.1、39.8、31.6、25.1、20.0、15.9或12.6秒的预定时间。两个相邻 刺激时间的对数的差设定为0.1，并且分别为1.8、1.7、1.6、1.5、1.4、1.3、1.2和1.1。然后将 小鼠迅速移到钟形罩中。用听诊器检测1分钟内的咳嗽次数。在一分钟内发生三次或更多次 典型咳嗽称为‘咳嗽’，并且在一分钟内少于三次典型咳嗽称为‘无咳嗽’。 42 CN 111601618 A 说　明　书 37/47 页 [0508] 根据顺序方法的原则确定下一只小鼠的氨刺激时间，即，如果第一只小鼠‘咳嗽’， 则对下一只小鼠刺激较短时间段。相反，如果第一只小鼠‘无咳嗽’，则对下一只小鼠刺激较 长时间段。 [0509] EDT50被定义为半数小鼠出现“咳嗽”的氨刺激时间并且通过以下等式计算： [0510] EDT50＝lg-1c/n [0511] (c等于r与x的和，r是每个刺激时间组中的动物数量，x是刺激时间的对数，并且n 是每组的动物数量)。结果在下表11中示出。 [0512] 表11 [0513] [0514] 其中R1＝(处理组的EDT50/对照组的EDT50)×100％，R>130％指示镇咳作用。R> 150％指示强的镇咳作用。 [0515] 结果显示，化合物A对咳嗽缓解具有积极作用。 [0516] 实施例30 [0517] 动物模型III-祛痰实验-小鼠酚红排泄方法。 [0518] 将50只小鼠根据体重随机分为5组：生理盐水阴性对照组，氯化铵阳性对照组，以 及高剂量、中等剂量和低剂量的测试药物(上面的化合物A或下面的化合物E)。每组10只小 鼠，5只雄性和5只雌性。 [0519] 通过雾化吸入(0.15mL/min)1min给予化合物A，每天一次，持续5天，并且给予阳性 对照药物，通过胃内给予持续5天。 [0520] 在最后一次给予化合物A后半小时，将5％酚红溶液注入腹腔。另外半小时后处死 小鼠。去除颈部皮肤，并且分离出从甲状腺软骨至分叉处的气管，将其浸泡在5％碳酸氢钠 溶液中同时不断摇动。使用碳酸氢钠溶液检测酚红含量。 [0521] 通过分光光度法(721G分光光度计，Shanghai  Jingke，中国上海)检测在558nm处 的吸光度。通过参照酚红标准曲线，使用光密度值计算气管中的酚红含量。对各组和阴性对 照组的结果进行显著性t检验的测试。祛痰实验的结果在下表12中示出。 [0522] 表12 [0523] 组 处理 剂量 酚红浓度(μg/ml) 阴性对照 生理盐水   6.970±0.339 43 CN 111601618 A 说　明　书 38/47 页 阳性对照 NH4Cl 0.15g/kg 10.335±0.337** 高 化合物A 39μg/只小鼠 9.001±0.637 中等 化合物A 195μg/只小鼠 10.480±0.550*** 低 化合物A 975μg/只小鼠 10.489±0.610*** [0524] 与阴性对照比较：*P<0.05、**P<0.01、***P<0.001 [0525] 结果显示，化合物A降低了粘液的产生并且因此减少了痰液。 [0526] 实施例31 [0527] 化合物A对II型人单纯疱疹病毒(HSV-II)活性的作用 [0528] 使用RPMI1640粉末(1000mL剂量；Thermo  Fisher  Scientific  China)、L-谷氨酰 胺(0.29g；Sinopharm  Chemical  Reagent  Co.Ltd，中国上海)、碳酸氢钠(2.2g；Sinopharm  Chemical  Reagent  Co .)、HEPE(2.39g；Thermo  Fisher  Scientific  China)和去离子水 (1000mL)制备无血清1640培养基。 [0529] 混合试剂直至它们溶解，并且然后通过过滤将溶液灭菌。在使用前通过添加10％ 新生牛血清将混合物配制成含10％血清的完全培养基，或者通过添加2％新生牛血清将混 合物配制成维持液。 [0530] 将20mg化合物A(实施例1)溶解于1ml  0.9％氯化钠水溶液中以制备20μg/μL的储 备溶液。将0.05mL储备溶液添加到1.95mL完全(10％)培养基中以配制500μg/mL的药物溶 液。在下面3号和4号抗病毒测试中，使用维持液(2％)代替完全培养基。 [0531] 通过双重稀释制备浓度为250μg/mL、125、62.5μg/mL、31.25μg/mL、15.625μg/mL、 7.8125μg/mL、3.9063μg/mL、1.9531μg/mL和0.9766μg/mL的工作溶液。 [0532] 将20.34mg月桂基磺酸钠(SDS；由美国俄亥俄州索伦AMRESCO  LLC制造并且由中国 合肥市Biosharp  Company包装；纯度：99％)溶解于10.17mL完全培养基中以产生2000μg/mL 储备溶液。使用用于抗病毒测试的维持液，也以相同的方式制备类似储备溶液。然后通过双 重稀释制备具有如上所述浓度的工作溶液。 [0533] 将2.25mg阿昔洛韦(ACV；Zhiyuan  Pharmaceutical  Co .,Ltd，中国无锡；纯度： 99.3％)溶解于2.25mL完全培养基中以形成1000g/mL的储备溶液。使用用于抗病毒测试的 维持液，也以相同的方式制备类似储备溶液。将0.8mL每种储备溶液进行双重稀释以提供浓 度为500μg/mL、250μg/mL和125μg/mL的工作溶液。将0.2mL每种储备溶液添加到1.95mL完全 培养基中以提供100μg/mL的浓度，然后将其稀释以提供浓度为50μg/mL、25μg/mL和12.5μg/ mL的溶液。 [0534] 1.HSV-2病毒毒性测试 [0535] 将0.5mL  II型人单纯疱疹病毒(HSV-2；SAV株；Shanghai  Institute  of  Cell  Biology)的悬浮液接种到Vero细胞(Shanghai  Institute  of  Cell  Biology)的单层培养 物中，并且在吸附1小时后除去病毒悬浮液。 [0536] 添加维持液并且在5％CO2下在37℃下培养直至在显微镜(带有成像系统的Nikon  ECLIPSE  TS100倒置相差显微镜(inverted  phase  control  microscope))下多于95％的细 胞显示出明显的病理变化。收获细胞，重复地冷冻和解冻(3个循环)，并且然后在400C型医 用低速离心机(Beijing  Baiyang  Centrifuge  Co.,Ltd.)中以3000rpm离心10分钟。收集上 清液作为病毒溶液。 44 CN 111601618 A 说　明　书 39/47 页 [0537] 将密度为2×105(细胞数)的Vero细胞悬浮液以0 .1mL/孔接种到96孔培养板 (Costar，Corning  Inc.，美国纽约奥尼昂塔)中，并且在Thermo  Scientific  CO2培养箱中 在5％CO2下在37℃下培养18小时直至在显微镜下可见单层。将上面收集的病毒以各0.1mL/ 孔接种到在维持液中稀释10倍的单层Vero细胞中。补充维持液并且在5％CO2下在37℃下培 养。培养24小时后，在显微镜下观察细胞的病理变化。每种稀释度重复在3个孔中。使用正常 细胞作为实验对照。重复3次病毒毒力测试。 [0538] 每个孔观察到三个视野。确定视野中病理细胞(P)的平均百分比。 [0539] 根据Reed和Muench常规方法计算病毒的半数感染剂量(TCID50，病毒的50％组织培 养感染剂量)，即TCID50，它是显示出紧临地高于50％死亡率的稀释度的对数-(对数差×稀 释因子对数)。通常，使用下式计算“对数差”(对数差也称为“比例距离(proportionate  distance)”或“内插值”)：对数差＝[(紧临地高于50％的稀释度的死亡率)-50％]/[(紧临 地高于50％的死亡率)-(紧临地低于50％的死亡率)]。 [0540] 2.化合物A和对照药物的细胞毒性 [0541] 将Vero细胞接种在96孔培养板上并且生长成单层。将0.2mL化合物A溶液(实施例 1)或对照药物(20.34mg月桂基磺酸钠或2.25mg阿昔洛韦，如上所述)添加至每个孔中，每个 孔含有不同浓度的完全培养基正确(如上所述)。对于每种浓度，将其重复在3个孔中。 [0542] 使用溶剂和正常细胞培养物作为阴性对照。将细胞在5％CO2下在37℃下培养并且 在显微镜下观察细胞的生长和形态变化持续2天。对于每个孔，在显微镜下选择三个视野， 计数病理细胞的百分比，并且计算平均值。将测试的评估时间点设定为24小时，并且计算半 数中毒浓度(TC50)和最大无毒浓度(TC0)。实验重复3次。 [0543] 如上所述接种细胞。使用溶剂和正常细胞培养物作为阴性对照。在添加化合物A或 对照药物后24小时，引入5mg/mL的在PBS中的3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2,5-二苯基-2-H- 四唑鎓溴化物(MTT，Sigma-Aldrich(中国)，中国上海)(稀释自10x储备溶液，Sigma- Aldrich(中国))(20μL/孔)，并且继续培养4小时。然后弃去每个孔中的上清液并且添加150 μL二甲基亚砜(DMSO；Sigma-Aldrich(中国))，接着在室温下在黑暗中摇动10分钟。 [0544] 通过酶联免疫吸附仪(Multiskan  Spectrum；Thermo  Scientific，中国上海)测量 在550nm处的光吸收值(OD550)。 [0545] 3.测试药物和SDS在直接作用于HSV-2后对病毒的细胞病变效应的作用 [0546] 将保存在-80℃(在Haier  DW-86L486超低温冰箱中)的具有确定的TCID50的HSV-2 病毒以确定的滴度稀释至200TCID50(每次在最初确定TCID50值，允许确定200TCID50)。将 200TCID50溶液与等体积的病毒滴度为100TCID50的化合物A或SDS液体混合。将混合溶液在 水浴(DK-8B恒温电热水浴；Shanghai  Jinghong  Biotech  Co.,Ltd .)中在37℃下孵育1小 时，并且然后接种在含单层Vero细胞的96孔培养板中。向每个孔中添加0.1mL混合溶液。 [0547] 吸附1小时后，弃去含病毒和药物的上清液。然后将单层Vero细胞用维持液洗涤两 次。最后，将0.2mL维持液添加到每个孔中。将所得混合物在5％CO2下在37℃下连续培养直 至不含药物的培养物的细胞病变率在显微镜下达到95％。将测试的评估时间点设定为24小 时。 [0548] 除了实验组外，还平行测试了三个对照组：溶剂、无药物对照(病毒对照)和正常细 胞对照。每个组由3个孔构成并且实验重复4次。 45 CN 111601618 A 说　明　书 40/47 页 [0549] 将病毒培养物稀释至0.1、1、10、100和1000TCID50，并且然后接种到单层细胞培养 物中。每种稀释度进行一式三份。观察每个孔的细胞病变率。在0.1TCID50下不应有细胞病变 效应，而在100TCID50下应看到细胞病变效应；否则不建立中和测试。 [0550] 评价指标与病毒毒性测试中的评价指标相同。对于每个孔，在显微镜下观察三个 视野。确定视野中病理细胞(P)的平均百分比并且根据Reed和Muencl方法(如上所述)计算 病毒的半数感染剂量(TCID50)。 [0551] 通过细胞形态学方法确定对Vero细胞的药物毒性，同时在无毒浓度下进行抗病毒 测试。在用不同浓度的测试药物和SDS孵育1小时后，将100TCID50HSV-2(SAV株)接种到单层 Vero细胞培养物中。 [0552] 结果显示，由病毒感染引起的细胞的细胞病变效应在不同程度上受到抑制，表明 化合物A对病毒HSV-2具有抑制作用。 [0553] 4.测试药物和ACV对HSV-2的作用(直接方法) [0554] 将病毒稀释至100TCID50并且在每个孔中以0.1mL接种到单层Vero细胞培养物中。 吸附1小时后弃去上清液并且将培养物用维持液洗涤2次。然后以0.2mL/孔添加具有不同浓 度的化合物A或对照药物(阿昔洛韦)的溶液。将培养物在5％CO2下在37℃下连续培养。每种 浓度重复一式三份。 [0555] 除了实验组外，还平行测试了三个对照组：溶剂、无药物对照(病毒对照)和正常细 胞对照。 [0556] 在培养期间，在显微镜下观察病理变化，并且当病毒对照的细胞病变率达到>95％ 时终止测试。测试的评估时间点是24小时并且实验重复3次。 [0557] 判断标准与病毒毒性测试中所用的那些相同，即，选择三个视野用于每个孔的显 微镜检查，确定视野中病理细胞(P)的平均百分比，取三个视野的平均值。 [0558] 根据对于每个试剂浓度组的细胞病变效应百分比相对于药物浓度计算线性回归 方程。计算IC50值并且还计算相关系数的显著性检验。 [0559] 结果显示化合物A具有抗病毒作用。 [0560] 实施例32 [0561] 孟鲁司特-Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-Tyr-Lys(即，在N-末端处与氨基 酸SEQ  ID  No:12共价键合的孟鲁司特)的合成 [0562] 重复如实施例1中所述程序。通过LCMS(分析柱型号：GS-120-5-C18-BIO，4 .6* 250mm；检测：在220nm处的UV；溶剂A：在MeCN中的0.1％TFA，溶剂A：在水中的0.1％TFA；流 速：1.0mL/min；体积：10μL)在5.813处检测第二产物峰并且所述化合物。 [0563] MS:m/z  875.90[M 2H]2 。 [0564] 基于可用的和本文呈现的表征数据，应理解，通过本实施例分离的化合物是以上 鉴定为标题化合物的化合物。实施例32的化合物在下文称为“化合物E”。 [0565] 化合物E与化合物A的产率比为1:9。 [0566] 实施例33 [0567] 氢化孟鲁司特苯乙烯-Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-Tyr-Lys(即，在N-末 端处与氨基酸SEQ  ID  No:12共价键合的氢化孟鲁司特苯乙烯)的合成 [0568] 上述化合物的合成与如实施例1中所述的用于化合物A的程序完全相同，不同之处 46 CN 111601618 A 说　明　书 41/47 页 在于使用孟鲁司特苯乙烯代替孟鲁司特作为试剂。 [0569] MS:m/z  867.91[M 2H]2 。 [0570] 基于可用的和本文呈现的表征数据，应理解，通过本实施例制备的化合物是以上 鉴定为标题化合物的化合物。另外，实施例33中制备的化合物是本发明化合物，其中在式I 的化合物中，并且n为0并且式I的化合物在N-末端处与氨基酸SEQ  ID  No:12共价键合。在任 何情况下，实施例33的化合物在下文称为“化合物F”。 [0571] 实施例34 [0572] 临床实施例XII-发烧缓解 [0573] 一名11岁男孩表现出发烧症状，其中在2100点钟时的温度为39℃。所述受试者还 间歇性咳嗽并且具有流鼻涕。 [0574] 在2200点钟时，经5分钟的时间段通过雾化(装置：手持式喷雾器，Lifetrons  Beaute  NS-400)向每个鼻孔给予作为雾的化合物E(2mg；参见上面实施例32)在生理盐水 (5mL)中的喷雾剂配制品。 [0575] 在2215点钟时，受试者入睡。大约午夜，受试者开始流汗并且他的温度略有下降。 在0030时，以相同方式给予在生理盐水溶液(2.5mL)中的第二剂化合物E(1mg)。 [0576] 到0330时，受试者的温度降至37.0℃。到0800时，受试者具有正常温度。因此，在前 一天2215点钟与第二天0800点钟之间，半分钟总共只观察到一次咳嗽。当晚睡眠过程中，没 有可观察到的鼻阻塞。在早晨，尽管又出现流鼻涕，但与之前11个小时相比，它已有显著改 善。 [0577] 在同一早晨0830点钟时，受试者接受第三剂在生理盐水(2 .5mL)中的化合物E (1mg)，所述第三剂量以相同的方式给予。两个小时后，他的鼻已停止流涕。此后并且直至同 一天的1500点钟，受试者没有发烧、咳嗽或流鼻涕。 [0578] 在第二天1530点钟时，受试者通过雾化(设备：Yuyue，空气压缩喷雾器，403M)接受 第四剂在生理盐水溶液(10mL)中的化合物E(1mg)。在2045点钟时，受试者具有37.1℃的温 度。在2100点钟时，受试者通过雾化接受第五剂在生理盐水溶液(10mL)中的化合物E(1mg)。 到2215点钟时，受试者的温度是36.8℃。 [0579] 实施例35 [0580] 在小鼠耳肿胀模型(III)中化合物A和E的比较 [0581] 在30只健康雄性BALB/c小鼠上进行采用与上面实施例5中所述方案基本相同的方 案的类似实验。将小鼠随机分为6组，如下表13所述，其中每组5只小鼠。 [0582] 表13 47 CN 111601618 A 说　明　书 42/47 页 [0583] [0584] 化合物A和E获得自GL  Biochem  Ltd并且分别如实施例1和32所述合成。通过将 0.5mg粉末溶解于1mL生理盐水(0.9％w/v  NaCl溶液)中来制备化合物A和E的水溶液。将40μ L制备的溶液施用至每组的右耳。 [0585] 使用醋酸地塞米松乳膏(在10g乳膏中的5mg  DEX，Fuyuan  Pharmaceutical  Co .Ltd .，中国安徽)、布地奈德鼻喷雾剂(32μg/次喷雾×120次喷雾，0 .64mg/ml， AstraZeneca  AB，SE-151  85，瑞典索德塔尔杰 )和氟替卡松丙酸酯鼻喷雾剂 (50mcg/次喷雾，0.05％w/w，Glaxo  Wellcome,S.A.，埃斯特雷马杜拉大街n°3-09400，西班 牙布尔戈斯的杜罗河畔阿兰达(Aranda  de  Duero))作为阳性对照。将乳膏放入1mL注射器 中以基于重量和体积的校准来测量剂量。打开喷雾剂瓶并且用移液器吸取40μL液体并且施 用至每组的右耳。 [0586] 结果在图15中示出。 [0587] 所述缀合物在消除由急性炎症引起的水肿方面均具有非常好的作用。化合物A和E 的抗炎作用是等效的。 [0588] 实施例36 [0589] 孟鲁司特-Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Thr-Tyr-Hyp-Lys(即，在N-末端处与氨基 酸SEQ  ID  No:22共价键合的孟鲁司特)和孟鲁司特苯乙烯-Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp- Thr-Tyr-Hyp-Lys(即，在N-末端处与氨基酸SEQ  ID  No:22共价键合的孟鲁司特苯乙烯)的 合成 [0590] 使用与上面实施例1中所述程序基本相同的程序(但其中偶联步骤的顺序被调节 以根据上面氨基酸序列提供)以合成具有SEQ  ID  No:22的修饰的肽。 [0591] 此后，将孟鲁司特偶联到Ala的N-末端上。分离出这两种标题化合物并且从而以与 上面实施例32中所述方式类似的方式通过LCMS纯化。所述化合物在下文分别称为化合物G (包含孟鲁司特)和化合物H(包含孟鲁司特苯乙烯)。 [0592] 化合物G:H的产率比率为1:7 [0593] MS(化合物G)：m/z  876.6[M 2H]2 [0594] MS(化合物H)：m/z  867.6[M 2H]2 48 CN 111601618 A 说　明　书 43/47 页 [0595] 实施例37 [0596] 体外CysLTR1  FLIPR拮抗测试 [0597] 使用Fluo-4  DirectTM钙测定试剂盒[目录号F10471，Thermo  Fisher  Scientific] 测量化合物A和E(分别参见上面实施例1和32)对CYSLTR1细胞系的体外拮抗作用。作为比 较，还测试孟鲁司特钠和孟鲁司特苯乙烯并且使用普鲁司特作为阳性对照。对于每种化合 物，一式两份地测试10种不同浓度。 [0598] 使用CYSLTR1/HEK293细胞系。制备细胞并且将20μL细胞悬浮液添加到384孔板 (20K/孔；聚-D-赖氨酸蛋白包被板，Greiner#781946)中。将板放置在5％CO2培养箱中在37 ℃下过夜。 [0599] 由相关的起始包(starter  pack)(目录号F10471)制备在FLIPR测定缓冲液中的丙 磺舒：通过向含有丙磺舒的77mg小瓶(目录号F10471的组分B)中添加1mL  Fluo-4  DirectTM 钙测定缓冲液来制备250mM水溶性丙磺舒储备溶液。将10mL  Fluo-4  DirectTM钙测定缓冲液 和200μL的250mM丙磺舒储备溶液添加到一瓶Fluo-4  DirectTM钙试剂(组分A)中。此2x  Fluo-4  DirectTM钙试剂上样溶液足够用于两个微孔板。允许将溶液涡旋静置5分钟(避光) 以确保试剂完全溶解。试剂每天新鲜配制。 [0600] 将所有化合物溶解并且连续稀释在Fluo-4  DirectTM钙测定缓冲液(不含丙磺舒) 中。从培养箱中取出细胞板并且轻轻地倾析出培养基。将20μL化合物转移到细胞板中，并且 添加20μL的2x  Fluo-4  DirectTM免洗上样缓冲液。每种化合物的终浓度为100μM、30μM、10μ M、3μM、1μM、0.3μM、0.1μM和0.03μM。将板在5％CO2培养箱中在37℃下孵育50分钟，在室温下 孵育10分钟。使用适于在494nm激发和在516nm发射的仪器设置测量荧光。 [0601] 使用Prism(GraphPad  Software，美国)分析数据并且计算每种化合物的IC50。结 果在下表14中示出。 [0602] 表14 [0603] 化合物ID IC50(nM) 最大剂量(nM) 化合物A 474.7 100000 孟鲁司特苯乙烯 158.5 100000 化合物E 90.55 100000 孟鲁司特钠 13.74 100000 普鲁司特 0.2178 1000 [0604] 结果显示，孟鲁司特对CysLTR1的亲和力是孟鲁司特苯乙烯的11倍。因此，化合物E 的亲和力比化合物A的亲和力高5倍，并且所测试的化合物对CysLTR1的亲和力很大程度上 取决于式I的化合物的结构。 [0605] 实施例38 [0606] 体外CysLTR1  FLIPR拮抗测试 [0607] 对化合物G(参见上面实施例36)重复上面实施例37中所述测定程序，并且进一步 对化合物E(参见上面实施例32)进行，作为比较。结果在表15中示出。 [0608] 表15 [0609] 化合物ID IC50(nM) 最大剂量(nM) 化合物G 99.55 50000 49 CN 111601618 A 说　明　书 44/47 页 化合物E 140.5 50000 孟鲁司特钠 7.300 50000 普鲁司特 0.2496 4000 [0610] 结果显示，化合物G和H对CysLTR1具有相同水平的亲和力，这指示肽的氨基酸序列 的变化对缀合物的亲和力影响很小。 [0611] 实施例38 [0612] 脂多糖诱导的小鼠肺损伤 [0613] 将36只体重在20g至22g之间的BALB/c雄性小鼠圈养在动物设施中，所述动物设施 处在22℃至26℃之间，并且相对湿度在55％与75％之间并且12/12小时昼/夜循环，其中随 意获取食物和水。 [0614] 将小鼠随机分为6组，如下表16所指示。 [0615] 表16 [0616] 组 剂量 给予 对照 / / 模型 盐水 吸入 化合物A 2mg/kg 吸入 化合物G(高剂量) 10mg/kg 吸入 化合物G(中等剂量) 2mg/kg 吸入 化合物G(低剂量) 0.4mg/kg 吸入 [0617] 与上面实施例1中所述程序类似地制备化合物A，并且与上面实施例36中所述程序 类似地制备化合物G。 [0618] 通过腹膜内注射3％水合氯醛(0.1mL/10g)将小鼠麻醉。用镊子将舌头拉到一边。 通过用移液器移至咽的后壁来给予脂多糖(LPS，1mg/mL，50μL)。释放舌头并且立即捏住鼻 持续30秒钟。然后，将扣留的小鼠释放并且放回笼中，自然苏醒。将对照组的小鼠用相同体 积的生理盐水处理。 [0619] 在LPS诱导后，经由雾化/吸入30分钟给予测试化合物。24小时后，处死小鼠。 [0620] 迅速打开胸腔并且剥离全肺。准确称重肺组织碎片，并且以9mL盐水比1g肺组织的 比率添加盐水。然后，将组织匀浆并且以3000rpm离心10分钟。使用ELISA试剂盒(Beijing  4A  Biotech  Co.,Ltd，中国)，使用匀浆检测TGF-β1，并且结果在图16中示出。 [0621] 结果显示，本发明的两种化合物均降低了肺组织中的炎性细胞因子。化合物A组的 肺组织中的IL-1β浓度水平与化合物G低剂量组的相同。化合物G在减少炎性细胞因子方面 也显示出剂量依赖性功效。 [0622] 因此，尽管已显示本发明的两种化合物在治疗LPS诱导的小鼠急性肺损伤方面是 有功效的，但是化合物G的效力比化合物A的效力高约5倍。 [0623] 实施例39 [0624] 大鼠特发性肺纤维化(IPF)模型 [0625] 从中国Zhejiang  Experimental  Animal  Center购买60只成年SD大鼠(30只雄性， 30只雌性)。在21℃与26℃之间下并且在40％与70％之间的相对湿度下圈养动物，其中自由 获取食物和水。 50 CN 111601618 A 说　明　书 45/47 页 [0626] 适应性饲喂7天后，将大鼠随机分为6组，如下表17所示。 [0627] 表17 [0628] 组 药物 剂量 给予方法 假手术 / / 吸入 模型 生理盐水 0.15mL 吸入 吡非尼酮 吡非尼酮 240mg/kg 管饲 化合物A 化合物A 2mg/kg 吸入 化合物E 化合物E 2mg/kg 吸入 化合物H 化合物H 2mg/kg 吸入 [0629] 将大鼠麻醉并且以仰卧姿势放置在手术台上以暴露出气管。通过气管软骨环之间 的间隙将博来霉素(5mg/kg，注射用盐酸博来霉素，Haizheng  Pfizer  Pharmaceutical  Co.,Ltd.)和盐溶液注入气管。 [0630] 给予假手术组等体积的生理盐水代替博来霉素。在给予后立即将大鼠竖直提起并 且旋转以允许博来霉素均匀分散。 [0631] 一旦大鼠恢复，在大约7天后，根据模型计划给予它们不同的药物。将6.5mg呈粉末 形式的本发明测试化合物准确地溶解于5mL盐水中以制造1.3mg/mL溶液。将0.15mL溶液雾 化并且被每只大鼠吸入。吸入每天进行一次。 [0632] 对于吡非尼酮组，将12个吡非尼酮胶囊(Beijing  Contini  Pharmaceutical  Co., Ltd .，中国北京；100mg)打开，并且将内容物完全悬浮于25mL的0.5％CMC-Na溶液中以获得 48mg/mL的悬浮液。吡非尼酮的剂量为在大鼠中1.0mL/200g，即，240mg/kg，并且通过口服管 饲给予。 [0633] 给予28天后，通过腹膜内注射水合氯醛将大鼠麻醉并且然后处死。迅速打开胸腔 并且取出全肺组织。称量肺湿重，并且计算肺系数(肺湿重/大鼠重量×1000)，并且在下表 18中示出。 [0634] 表18 [0635] [0636] [0637] 结果显示，化合物A、E和H降低了由博来霉素诱导引起的肺水肿。 [0638] 将右支气管结扎，并且体外用福尔马林溶液灌注左肺。将左肺切开并且固定在福 尔马林溶液中以进行病理检查。将剩余的组织储存在-80℃冰箱中，以备后用。 [0639] 将固定的肺组织包埋在石蜡中，并且将连续的4μm切片用苏木精-伊红(HE)和改进 的Masson三色染色法进行染色。通过半定量参数在形态学上评价纤维化肺损伤。根据损害 51 CN 111601618 A 说　明　书 46/47 页 的严重程度对所有形态变化进行评分。给出得分，根据轻度、低度(mild)、中度和重度分别 为1-4分。无病变评分为0。通过HE染色切片的评估是纤维化程度和炎症程度的总和。通过 Masson染色切片的评估是肺间质中胶原蛋白沉积的程度。结果在下表19中示出。 [0640] 表19 [0641] [0642] 结果显示，与假手术组相比，模型组的肺纤维化和支气管肺炎更严重。与模型组相 比，药物处理组的病理变化相似，并且病理变化的程度较小。病理变化的顺序如下：模型、吡 非尼酮>化合物E>化合物A>化合物H>假手术。这些结果指示，化合物A、E和H预防博来霉素诱 导的小鼠肺纤维化，并且其功效比吡非尼酮的功效更强。 [0643] 实施例40 [0644] 孟鲁司特-Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-Tyr-Hyp-Lys(即，在N-末端处与 氨基酸SEQID  No:20共价键合的孟鲁司特苯乙烯)的合成 [0645] 使用与上面实施例1中所述程序基本相同的程序(但其中偶联步骤的顺序被调节 以根据上面氨基酸序列提供)以合成具有SEQ  ID  No:20的修饰的肽。 [0646] 此后，将孟鲁司特偶联到Ala的N-末端上。以与上面实施例32中所述方式类似的方 式，通过LCMS纯化所述化合物。标题化合物在下文中称为化合物J。 [0647] MS:m/z  924.15[M 2H]2 [0648] 实施例41 [0649] 小鼠耳肿胀模型IV [0650] 使用化合物J(参见上面实施例40)作为测试化合物，对15只健康雄性BALB/c小鼠 进行与上面实施例5中所述方案基本相同的方案。将小鼠随机分为3组，如下表20所述，其中 每组5只小鼠。 [0651] 制备化合物J的水凝胶，其包含0.5mg/g的活性成分和甲基纤维素(2.5％)、丙二醇 (11％)、甘油(11％)、乙酸(pH调节剂；0至0.5g)。所有赋形剂均从Sinopharm  Chemical  Reagent  Co.Ltd.获得。凝胶用注射用水制成。 [0652] 使用醋酸地塞米松乳膏(DEX乳膏；在10g乳膏中的5mg地塞米松；Fuyuan  Pharmaceutical  Co.Ltd.，中国安徽)作为阳性对照。将40μL各种处理药物施用至每组的右 耳。 [0653] 表20 [0654] 组 药物浓度 在右耳上给予药物 药物总量(μg/只小鼠) 模型 / 二甲苯 / 52 CN 111601618 A 说　明　书 47/47 页 Dex乳膏 10μg/μL 二甲苯 地塞米松乳膏 400 化合物J 0.5mg/g 二甲苯 化合物J凝胶 20 [0655] 结果在图17中示出。化合物J在消除由急性炎症引起的水肿方面显示出非常好的 作用。 [0656] 实施例42 [0657] 临床实施例-过敏性结膜炎 [0658] 一名52岁女性患者被诊断为过敏性结膜炎并且经历眼睑肿胀、瘙痒和鼻漏。 [0659] 将0.5mg/mL在盐水溶液中的化合物G装在喷雾剂瓶中。向每只眼睛给予喷雾剂，每 天2至3次，持续7天。 [0660] 在一次处理后，患者感到眼睛瘙痒得到缓解。在处理的第二天，她的眼睑肿胀较 小。一周内所有症状完全恢复。 [0661] 实施例43 [0662] 临床实施例-溃疡性结肠炎 [0663] 患有溃疡性结肠炎的住院患者遭受严重的症状，包括严重的腹痛和痉挛、频繁腹 泻(每天多于20次)，并且对非处方药没有反应。患者经历直肠出血、大便伴有少量血、排便 紧迫感和发烧。 [0664] 制备化合物G的水凝胶，其由0.5mg/g的活性成分、甲基纤维素(2.5％)、丙二醇 (11％)、甘油(11％)、乙酸(pH调节剂；0至0.5g)组成。所有赋形剂均从Sinopharm  Chemical  Reagent  Co.Ltd.获得。凝胶用注射用水制成。 [0665] 向患者给予2g上述凝胶，通过肛门给予，每天一次。在给予后第二天，腹泻减少至 每天仅5-6次，伴有较少出血。 [0666] 为了确定长期功效，患者继续使用所述凝胶。 53 CN 111601618 A 说　明　书　附　图 1/9 页 图1 图2 54 CN 111601618 A 说　明　书　附　图 2/9 页 图3 55 CN 111601618 A 说　明　书　附　图 3/9 页 图4 图5 56 CN 111601618 A 说　明　书　附　图 4/9 页 图6 图7 57 CN 111601618 A 说　明　书　附　图 5/9 页 图8 图9 58 CN 111601618 A 说　明　书　附　图 6/9 页 图10 图11 59 CN 111601618 A 说　明　书　附　图 7/9 页 图12 图13 60 CN 111601618 A 说　明　书　附　图 8/9 页 图14 图15 61 CN 111601618 A 说　明　书　附　图 9/9 页 图16 图17 62