技术摘要：
本发明公开了一种灵敏的色谱‑串联质谱法测定血浆中乙胺丁醇的方法，属于药物分析技术领域。本发明建立了液相色谱‑串联质谱法测定人血浆中乙胺丁醇的方法，血浆样品以沉淀蛋白法处理后，采用Atlantis®dC18色谱柱快速梯度洗脱色谱分离，经串联四极杆质谱仪检测。质谱监 全部
背景技术：
盐酸乙胺丁醇是一种一线抗结核病药物。盐酸乙胺丁醇仿制药研发过程中需要进 行临床生物等效性研究，对比仿制药物和原研药物在人体内暴露量及吸收程度。因此需要 测定血液中乙胺丁醇的浓度。目前血浆中乙胺丁醇的浓度测定方法主要为液相色谱-串联 质谱法。但现有检测方法灵敏度较差，定量下限最低仅能达到10 ng/mL。目前国内大部分乙 胺丁醇规格为0.25g。受限于检测方法灵敏度，临床研究中常常通过增加药物剂量达到0.5g 或1g的方法，提升药物在血液中的浓度，进而获得完整的药物动力学参数。药物剂量的提升 容易对受试者的身体造成不良影响。另外现有方法也存在操作复杂、需要耗时的浓缩步骤、 分析时间长、信噪比不佳等特点。
技术实现要素：
针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种灵敏的液相色谱-串联质谱法测定 血浆中乙胺丁醇的方法。采用本发明的方法可以实现对血浆中乙胺丁醇灵敏、快速检测；而 且血浆用量少，样品前处理简单。 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 一种灵敏的色谱-串联质谱法测定血浆中乙胺丁醇的方法，包括如下步骤： （1）对血浆样品进行前处理； （2）采用液相色谱-串联质谱法测定步骤（1）中经前处理后的血浆样品中乙胺丁醇的浓 度； 所述液相色谱-串联质谱法包括色谱条件和质谱条件，其中： 所述色谱条件包括：采用Atlantis ® dC18柱，梯度洗脱，在0min时，流动相A：流动相B 体积比为65:35，在0.7min时，流动相A：流动相B体积比为65:35，在1min时，流动相A：流动相 B体积比为15:85，在1.5min时，流动相A：流动相B体积比为15:85，在1.6min时，流动相A：流 动相B体积比为65:35，在2.5min时，流动相A：流动相B体积比为65:35，流速0.7 mL/min，柱 温40℃，进样量2 μL。流动相A为含0.1%甲酸和5 mM醋酸铵水溶液，所述流动相B为甲醇：乙 腈：甲酸（50:50：0.1，v/v/v）。 所述质谱条件包括：离子源：电喷雾电离正离子检测；喷雾气温度：500℃；雾化气： 65 psi；气帘气：35 psi；碰撞气：9 psi；电离电流：3.0 uA；扫描时间：200 ms；扫描方式：多 反应监测。用于定量的离子反应分别为：m/z 205.2 ® 116.2（乙胺丁醇）和m/z 209.2.2 ® 3 CN 111595966 A 说 明 书 2/5 页 120.2（乙胺丁醇-d4）；碰撞能量20 eV。 优选的，步骤（1）中，对血浆样品进行前处理的方法为：向50 µL血浆样品中加入50 µL内标溶液，再加入400 µL体积比为90:10的乙腈-水混合液，涡流振荡10min，4℃条件下以 3900 rpm速度离心10 min，将离心后的上清液转移至另一96孔板中。 更优选的，所述内标溶液为100 ng/mL的乙胺丁醇-d4溶液，溶剂为体积比50:50的 甲醇：水混合液。 本发明的有益效果： （1）本发明建立了灵敏、快速的液相色谱-串联质谱法测定人血浆中乙胺丁醇的方法。 血浆样品以沉淀蛋白法进行处理后直接进样分析，分析方法的定量下限为4.00 ng/mL，较 现有最灵敏的检测方法灵敏度提升2.5倍。 （2）本发明与现有技术相比灵敏度得到较大提升，乙胺丁醇临床生物等效性研究 中药物的剂量由原来的0.5或1g降低至0.25g，显著提高了临床研究的安全性。 （3）本发明色谱分析时间更短，分析速度较现有技术提升20%。 附图说明 图1：乙胺丁醇的[M H] 的产物离子扫描图。 图2：乙胺丁醇-d4的[M H] 的产物离子扫描图。 图3：空白血浆样品中乙胺丁醇（上）和乙胺丁醇-d4（下）的典型色谱图。 图4：定量下限样品中乙胺丁醇（上）和乙胺丁醇-d4（下）的典型色谱图。 图5：受试者空腹口服250 mg 盐酸乙胺丁醇片后的血浆浓度-时间曲线。
本发明公开了一种灵敏的色谱‑串联质谱法测定血浆中乙胺丁醇的方法，属于药物分析技术领域。本发明建立了液相色谱‑串联质谱法测定人血浆中乙胺丁醇的方法，血浆样品以沉淀蛋白法处理后，采用Atlantis®dC18色谱柱快速梯度洗脱色谱分离，经串联四极杆质谱仪检测。质谱监 全部
背景技术：
盐酸乙胺丁醇是一种一线抗结核病药物。盐酸乙胺丁醇仿制药研发过程中需要进 行临床生物等效性研究，对比仿制药物和原研药物在人体内暴露量及吸收程度。因此需要 测定血液中乙胺丁醇的浓度。目前血浆中乙胺丁醇的浓度测定方法主要为液相色谱-串联 质谱法。但现有检测方法灵敏度较差，定量下限最低仅能达到10 ng/mL。目前国内大部分乙 胺丁醇规格为0.25g。受限于检测方法灵敏度，临床研究中常常通过增加药物剂量达到0.5g 或1g的方法，提升药物在血液中的浓度，进而获得完整的药物动力学参数。药物剂量的提升 容易对受试者的身体造成不良影响。另外现有方法也存在操作复杂、需要耗时的浓缩步骤、 分析时间长、信噪比不佳等特点。
技术实现要素：
针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种灵敏的液相色谱-串联质谱法测定 血浆中乙胺丁醇的方法。采用本发明的方法可以实现对血浆中乙胺丁醇灵敏、快速检测；而 且血浆用量少，样品前处理简单。 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 一种灵敏的色谱-串联质谱法测定血浆中乙胺丁醇的方法，包括如下步骤： （1）对血浆样品进行前处理； （2）采用液相色谱-串联质谱法测定步骤（1）中经前处理后的血浆样品中乙胺丁醇的浓 度； 所述液相色谱-串联质谱法包括色谱条件和质谱条件，其中： 所述色谱条件包括：采用Atlantis ® dC18柱，梯度洗脱，在0min时，流动相A：流动相B 体积比为65:35，在0.7min时，流动相A：流动相B体积比为65:35，在1min时，流动相A：流动相 B体积比为15:85，在1.5min时，流动相A：流动相B体积比为15:85，在1.6min时，流动相A：流 动相B体积比为65:35，在2.5min时，流动相A：流动相B体积比为65:35，流速0.7 mL/min，柱 温40℃，进样量2 μL。流动相A为含0.1%甲酸和5 mM醋酸铵水溶液，所述流动相B为甲醇：乙 腈：甲酸（50:50：0.1，v/v/v）。 所述质谱条件包括：离子源：电喷雾电离正离子检测；喷雾气温度：500℃；雾化气： 65 psi；气帘气：35 psi；碰撞气：9 psi；电离电流：3.0 uA；扫描时间：200 ms；扫描方式：多 反应监测。用于定量的离子反应分别为：m/z 205.2 ® 116.2（乙胺丁醇）和m/z 209.2.2 ® 3 CN 111595966 A 说 明 书 2/5 页 120.2（乙胺丁醇-d4）；碰撞能量20 eV。 优选的，步骤（1）中，对血浆样品进行前处理的方法为：向50 µL血浆样品中加入50 µL内标溶液，再加入400 µL体积比为90:10的乙腈-水混合液，涡流振荡10min，4℃条件下以 3900 rpm速度离心10 min，将离心后的上清液转移至另一96孔板中。 更优选的，所述内标溶液为100 ng/mL的乙胺丁醇-d4溶液，溶剂为体积比50:50的 甲醇：水混合液。 本发明的有益效果： （1）本发明建立了灵敏、快速的液相色谱-串联质谱法测定人血浆中乙胺丁醇的方法。 血浆样品以沉淀蛋白法进行处理后直接进样分析，分析方法的定量下限为4.00 ng/mL，较 现有最灵敏的检测方法灵敏度提升2.5倍。 （2）本发明与现有技术相比灵敏度得到较大提升，乙胺丁醇临床生物等效性研究 中药物的剂量由原来的0.5或1g降低至0.25g，显著提高了临床研究的安全性。 （3）本发明色谱分析时间更短，分析速度较现有技术提升20%。 附图说明 图1：乙胺丁醇的[M H] 的产物离子扫描图。 图2：乙胺丁醇-d4的[M H] 的产物离子扫描图。 图3：空白血浆样品中乙胺丁醇（上）和乙胺丁醇-d4（下）的典型色谱图。 图4：定量下限样品中乙胺丁醇（上）和乙胺丁醇-d4（下）的典型色谱图。 图5：受试者空腹口服250 mg 盐酸乙胺丁醇片后的血浆浓度-时间曲线。
