
技术摘要:
本发明涉及被测物质信息的获取方法和被测物质的捕捉方法。本发明的课题在于,提供一种能够高精度地获取作为被测物质的多肽的量或结构的相关信息的方法。一种使用与作为被测物质的多肽结合的捕捉物质、第1固相和第2固相的免疫复合物转移法,其中,通过使用与多肽的C末端 全部
背景技术:
获取从被试者采集的临床检测物中被测物质的量或结构的相关信息在病理诊断 和治疗方案确定中是有用的。例如,老年痴呆症中,随着症状的发展,淀粉样蛋白β(Aβ)等被 测物质的量和结构发生变化,因而通过获取被测物质的量和结构的相关信息,能够准确了 解症状。作为以蛋白变性为主要原因的疾病,例如,除了老年痴呆症以外,还可列举亨廷顿 舞蹈病、帕金森氏病、朊蛋白病、肌萎缩性脊髓硬化(ALS)等。 作为获取临床检测物中被测物质的量或结构的相关信息的方法的一例,非专利文 献1中公开了下述方法:将脑脊液(CSF)所含的Aβ固定在盖玻片上,通过间接荧光抗体法免 疫染色,利用超分辨率显微镜拍摄,从而检测Aβ。获取的图像中,Aβ以大小和强度对应于凝 集程度的点的形式被检测。 现有技术文献 非专利文献 非专利文献1:Zhang W.I.等,脑脊液生物标记物的超高分辨率显微镜检查作为一 种阿尔茨海默氏病诊断的工具(Super-Resolution Microscopy of Cerebrospinal Fluid Biomarkers as a Tool for Alzheimer's Disease Diagnostics) ,J Alzheimers Dis, 2015,第46卷,第1007-1020页
技术实现要素:
发明所要解决的课题 非专利文献1的方法中,将CSF滴加在盖玻片上,因此该盖玻片上不仅固定有Aβ,还 固定有CSF中的杂质。因此,有时免疫染色中使用的一抗和荧光标记二抗会与固定在盖玻片 上的杂质非特异性结合。此外,有时荧光标记二抗还会与盖玻片本身非特异性结合。如果以 这种方式不仅Aβ被标记抗体标记、而且杂质和盖玻片也被标记抗体标记,则无法高精度地 获取作为被测物质的Aβ的量或结构的相关信息。 CSF那样的从被试者采集的临床检测物中,被测物质不一定以对检测而言充分的 量存在。因此,为了测定临床检测物中的被测物质,需要提高检测灵敏度。实际上,本发明人 等发现,即便是能够良好地检测作为被测物质的合成多肽的测定系统,在测定临床检测物 所含的被测物质的情况下,在检测灵敏度这一点上也是有改善的余地的。 用于解决课题的方法 本发明人等发现,在免疫复合物转移(ICT)法中,通过使用与作为被测物质的多肽 的C末端区域结合的捕捉物质,能够以更高的灵敏度检测临床检测物中的多肽,从而完成了 本发明。 5 CN 111596051 A 说 明 书 2/20 页 本发明提供一种被测物质信息的获取方法,包括使作为被测物质的多肽和与多肽 结合的捕捉物质接触、形成包含多肽和捕捉物质的复合物的工序、通过使复合物中的捕捉 物质与第1固相结合而使复合物固定于第1固相的工序、回收固定有复合物的第1固相的工 序、从回收的第1固相将复合物脱离、通过使脱离的复合物中的捕捉物质与第2固相结合而 使复合物固定于第2固相的工序、以及从固定于第2固相的复合物获取多肽的相关信息的工 序,其中与第1固相和第2固相中的至少一方结合的捕捉物质与多肽的C末端区域结合。 此外,本发明提供一种被测物质的捕捉方法,包括使作为被测物质的多肽和与多 肽结合的捕捉物质接触、形成包含多肽和捕捉物质的复合物的工序、通过使复合物中的捕 捉物质与第1固相结合而使复合物固定于第1固相的工序、回收固定有复合物的第1固相的 工序、以及从回收的第1固相将复合物脱离、通过使脱离的复合物中的捕捉物质与第2固相 结合而使复合物固定于第2固相的工序,其中与第1固相和第2固相中的至少一方结合的捕 捉物质与多肽的C末端区域结合。 进一步,本发明还提供一种被测物质信息的获取方法,包括从包含作为被测物质 的多肽和与多肽结合的捕捉物质的复合物获取多肽的相关信息的工序。该方法中,复合物 是通过下述方法得到的:使多肽与捕捉物质接触,形成包含多肽和捕捉物质的复合物;通过 使复合物中的捕捉物质与第1固相结合而使复合物固定于第1固相;回收固定有复合物的第 1固相;以及从回收的第1固相将复合物脱离,使脱离的复合物中的捕捉物质与第2固相结 合。此外,该方法中,与第1固相和第2固相中的至少一方结合的捕捉物质与多肽的C末端区 域结合。 发明的效果 根据本发明,能够高精度地获取作为被测物质的多肽的量或结构的相关信息。 附图说明 图1为显示本实施方式被测物质信息的获取方法的处理次序的流程图。 图2为显示复合物的形成工序和复合物向第1固相的固定工序的示意图。 图3为显示复合物的回收工序和脱离工序的示意图。 图4A为显示复合物向第2固相的固定工序的示意图。 图4B为显示复合物向第2固相的固定工序的示意图。 图5为显示复合物的形成工序和复合物向第1固相的固定工序的示意图。 图6A为显示复合物向第2固相的固定工序的示意图。 图6B为显示复合物向第2固相的固定工序的示意图。 图7为显示复合物的形成工序和复合物向第1固相的固定工序的示意图。 图8为显示复合物的回收工序和脱离工序的示意图。 图9A为显示复合物向第2固相的固定工序的示意图。 图9B为显示复合物向第2固相的固定工序的示意图。 图10为显示固定于第2固相的复合物中发光状态的荧光色素的分布的示意图。 图11为显示信息获取工序的流程图。 图12为说明信息获取工序中获取超分辨率图像并将亮点分类至组中的次序的图。 图13为显示信息获取工序中检测装置的显示部显示的画面的例子的图。 6 CN 111596051 A 说 明 书 3/20 页 图14为显示用于自动进行信息获取工序的检测装置的构成的示意图。 图15为实施例1中得到的、脑脊液中的Aβ的荧光图像。 图16为实施例2中得到的、脑脊液中的Aβ的荧光图像。 图17A为实施例2中得到的、脑脊液中的Aβ的超分辨率图像。 图17B为实施例2中得到的、脑脊液中的Aβ的超分辨率图像。 图18为显示实施例3中的、脑脊液中的Aβ的测定结果的柱状图。 图19为显示实施例3中的、合成Aβ肽的测定结果的柱状图。