技术摘要：
本发明提供了一种唾液葡萄糖检测试纸，所述唾液葡萄糖检测试纸包括酶层和显色层，所述酶层包括葡萄糖氧化酶、辣根过氧化物酶和维生素C氧化酶。还提供了其制备方法和应用。本发明涉及一款用于快速检测唾液中葡萄糖含量的试纸，用于体外检测，对于口腔疾病的早期预防、初  全部
背景技术：
目前已有大量研究表明唾液葡萄糖(简称唾糖)含量的升高对人体健康有显著的 负面作用。一方面，唾糖含量升高会破坏口腔环境，例如使口腔渗透压升高，pH降低，唾液流 速减慢从而削弱其自洁作用等；另一方面，唾糖含量升高为变形链球菌、念珠菌、乳杆菌等 菌群的生长提供了营养物质，造成口腔微生物的增殖。这两方面的因素共同导致了口干症、 牙周炎、牙龈炎和龋齿等口腔疾病。同时，也有一些研究表明糖尿病患者的唾糖浓度与其血 糖水平呈正相关，导致其罹患口腔疾病的概率高于正常人。 通常情况下，口腔疾病是缓慢发生的，早期多无明显临床症状，不易被患者察觉。 等到出现疼痛等不适症状时就已经到了疾病的中晚期，治疗起来很复杂，患者也会遭受更 大的痛苦，花费更多的费用。因此唾糖含量的测定对口腔疾病和糖尿病的预防和治疗具有 重要的意义。 唾液成分复杂(如蛋白质：粘蛋白、白蛋白、球蛋白；酶：唾液淀粉酶、麦芽糖酶、磷 酸脂酶；无机成分：钠、磷、钾、镁、氧化物和硫酸盐、碳酸盐等；此外还有尿素、尿酸和微量的 氨、粘液素、微量元素、白细胞、上皮细胞、痕量物质、微生物等)，且理论上其葡萄糖浓度仅 为血液中葡萄糖浓度的1/50-1/100(1.98-119.99mg/L) ,因此目前主要依靠高精度的仪器 实现唾糖的检测，例如气相色谱、液相色谱、离子色谱、气/液-质联用等。这些仪器设备价格 昂贵，操作复杂，很难实现即时检测，因而其应用受到限制。文献中也有报道通过电化学、光 学方法实现唾糖检测，但是由于高非特异性干扰，这两种方法都难以实现真实唾液中葡萄 糖的准确检测。现有技术基于硼酸基水凝胶的石英晶体微天平传感器能够实现唾糖的特异 性检测。该系统将唾液中的葡萄糖浓度信号转化为石英晶振传感器的频率信号，从而获得 唾液葡萄糖浓度。石英晶体微天平唾糖传感器的优点是快速精准，但是因为其样品前处理 过程复杂，需要专业人士才可完成检测。 试纸法检测唾糖具有操作简便、价格低廉等优点，在唾糖检测方面具有较好的应 用前景。目前已有部分现有技术报道成功合成出测试葡萄糖的试纸条，利用葡萄糖氧化酶 氧化葡萄糖产生过氧化氢，在过氧化氢酶的催化作用下将无色的邻-联二茴香胺氧化成为 有色的产物从而使试纸显色，通过测定试纸颜色变化进行葡萄糖的定量检测。虽然利用中 空的聚合物纳米纤维包覆酶，具有酶用量少、储存稳定性高等优点，但是其检测对象为血 糖，只能对高浓度的葡萄糖有响应，在10mmol/L才有明显的颜色变化，不能满足低浓度唾糖 的检测需求。现有技术还利用葡萄糖氧化酶氧化葡萄糖产生过氧化氢，在过氧化氢酶的催 化作用下将10-乙酰基-3,7-二羟基吩嗪催化成为有色的产物，通过肉眼观察颜色的变化定 性判断出葡萄糖的高低。但目前只能定性区别唾液中葡萄糖含量的高低。现有技术通过膜 过滤血液，利用色原试剂、助显色剂与H2O2的显色反应检测血糖中的葡萄糖，但其同样只能 4 CN 111595839 A 说　明　书 2/5 页 对高浓度的葡萄糖有响应。
技术实现要素：
因此，本发明的目的在于克服现有技术中的缺陷，提供一种唾液葡萄糖检测试纸 及其制备和应用方法。 为实现上述目的，本发明的第一方面提供了一种唾液葡萄糖检测试纸，所述唾液 葡萄糖检测试纸包括酶层和显色层，所述酶层包括葡萄糖氧化酶、辣根过氧化物酶和维生 素C氧化酶； 优选地，所述酶层中葡萄糖氧化酶、辣根过氧化物酶和维生素C氧化酶的酶活力单 位配比为：50～200：50～200：1～10，优选为50～150：100～200：1～5，最优选为100:150:2； 和/或 优选地，所述酶层中葡萄糖氧化酶含量为500～1500U，进一步优选为800～1200U， 最优选为1000U；辣根过氧化物酶含量为1000～2000U，优选为1200～1800U，最优选为 1500U；维生素C氧化酶含量为10～50U，优选为10～30U，最优选为20U。 根据本发明第一方面的唾液葡萄糖检测试纸，其中，所述显色层包括2，4，6-三溴- 3-羟基苯甲酸和4-氨基安替比林。 根据本发明第一方面的唾液葡萄糖检测试纸，其中，所述试纸的酶层或显色层中 还包括酶激活剂、液体扩散控制剂和/或酶稳定剂； 优选地，所述酶激活剂选自以下一种或多种：柠檬醛、谷胱甘肽、乙二胺四乙酸；优 选为柠檬醛； 优选地，所述液体扩散控制剂选自以下一种或多种：聚乙二醇200、聚乙二醇600、 聚乙烯醇；优选为聚乙二醇200；和/或 优选地，所述酶稳定剂为牛血清白蛋白。 本发明的第二方面提供了第一方面所述的唾液葡萄糖检测试纸的制备方法，其 中，所述方法包括通过在酶液和显色液中浸泡烘干而分别制备所述试纸的酶层和显色层； 优选地，所述浸泡烘干包括以下步骤：将滤纸置于所述酶液或显色液中浸泡后，将 滤纸冷藏烘干； 更优选地，所述滤纸在酶液中浸泡时间为1～10小时，优选为2～6小时，最优选为5 小时；所述冷藏温度为-10～-30℃，优选为-15～-25℃，最优选为-20℃；所述冷藏时间为6 ～24小时，优选为6～18小时，最优选为12小时；所述烘干温度为20～35℃，优选为25～35 ℃，最优选为30℃；和/或所述烘干时间为10～60分钟，优选为20～50分钟，最优选为30分 钟。 根据本发明第二方面的制备方法，其中，所述酶液中，葡萄糖氧化酶的浓度为50～ 200U/mL，优选为50～150U/mL，最优选为100U/mL； 所述辣根过氧化物酶的浓度为50～200U/mL，优选为100～200U/mL，最优选为 150U/mL；和/或 所述维生素C氧化酶的浓度为1～10U/mL，优选为1～5U/mL，最优选为2U/mL。 根据本发明第二方面的制备方法，其中，所述显色液中，2，4，6-三溴-3-羟基苯甲 酸的浓度为1～20mg/mL优选为1～10mg/mL最优选为5mg/mL；和/或 5 CN 111595839 A 说　明　书 3/5 页 4-氨基安替比林的浓度为10～50mg/mL优选为10～30mg/mL最优选为20mg/mL。 根据本发明第二方面的制备方法，其中，所述酶液中还包括： 酶激活剂，所述酶激活剂的浓度为0.5～2mg/mL优选为1～1 .5mg/mL最优选为 1.22mg/mL； 液体扩散控制剂，所述液体扩散控制剂的添加量为10μL～500μL/mL优选为50～ 200μL/mL最优选为100μL/mL；和/或 酶稳定剂，所述酶稳定剂的浓度为5～20mg/mL优选为8～12mg/mL最优选为10mg/ mL。 本发明的第三方面提供了一种唾液葡萄糖检测装置，所述唾液葡萄糖检测装置包 括第一方面所述的唾液葡萄糖检测试纸或按照第二方面所述的制备方法而制得的唾液葡 萄糖检测试纸。 根据本发明第三方面的装置，其中，所述试纸还包括比色卡、脱脂棉、吸水垫和/或 封装条； 优选地，所述封装条包括上封装条和下封装条； 更优选地，所述试纸设置于所述吸水垫上，所述脱脂棉设置于下封装条的顶部且 置于试纸的上方，所述试纸的酶层靠近所述脱脂棉。 本发明的第四方面提供了一种唾液葡萄糖检测方法，所述方法包括使用第三方面 所述的唾液葡萄糖检测装置进行唾液葡萄糖检测； 优选地，所述检测方法包括：将产品脱脂棉端放置于口腔中10分钟后取出，观察显 色层的颜色，对照比色卡判断唾液葡萄糖含量。 本发明涉及一款用于快速检测唾液中葡萄糖含量的试纸，用于体外检测，测试结 果仅供参考。对于口腔疾病的早期预防、初步判断具有重要的意义，同时在糖尿病预防方面 也具有一定的积极意义。 本产品的工作原理：待测唾液样本中的葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化作用下与氧 气发生反应，生成葡萄糖酸和过氧化氢；过氧化氢进一步在过氧化物酶的催化作用下，和2， 4，6-三溴-3-羟基苯甲酸反应生成2，4-二溴-3，6-二氧六环-1，4-二烯甲酸，生成物再和4- 氨基安替比林反应，生成红色亚胺类物质。红色物质的生成量与唾液中的葡萄糖含量正相 关，因此反应产物的色度可以间接指示唾糖含量。 本发明的唾液葡萄糖检测试纸可对唾液中低浓度葡萄糖(0-200mg/L)含量进行半 定量检测。 本发明的唾液葡萄糖检测试纸可以具有但不限于以下有益效果： 本发明涉及一款用于快速检测唾液中葡萄糖含量的试纸，用于体外检测，对于口 腔疾病的早期预防、初步判断具有重要的意义，同时在糖尿病预防方面也具有一定的积极 意义。 附图说明 以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中： 图1示出了本发明唾液葡萄糖检测装置的结构示意图。 图2示出了本发明唾液葡萄糖检测装置的平面图。 6 CN 111595839 A 说　明　书 4/5 页 图3示出了本发明唾液葡萄糖检测试纸的测试结果图。 图4示出了葡萄糖浓度与试纸显色亮度的线性关系。 附图标记说明： 1、比色卡；2、上封装条；3、脱脂棉；4、试纸；5、吸水垫；6、下封装条；7、酶层；8、显色 层。